【摘要】：目的:隨著臭氧層空洞日益加劇,人們接觸紫外線(UV)明顯增多,長(zhǎng)期接觸過(guò)量UV易導(dǎo)致皮膚曬傷、光老化及腫瘤發(fā)生。據(jù)報(bào)道人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hucMSC)條件培養(yǎng)基能保護(hù)UV損傷,延緩皮膚衰老。外泌體(exosome)是hucMSC旁分泌關(guān)鍵成分,大量存在其條件培養(yǎng)基中。然而,hucMSC-exosome(hucMSC-ex)對(duì)皮膚UV損傷作用未見(jiàn)報(bào)道,本文旨在探討hucMSC-ex能否防治UV所致皮膚損傷及其作用機(jī)制。方法:組織貼壁法分離hucMSC,成脂和成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)鑒定hucMSC分化潛能;30%蔗糖密度梯度超濾離心法分離hucMSC-ex,蛋白質(zhì)印跡分析其表面標(biāo)記,透射電鏡觀察其形態(tài)和大小,Nanosight檢測(cè)其粒徑分布和濃度;hucMSC-ex預(yù)處理暴露皮膚,UVA和UVB輻照法制作SD大鼠急性光損傷模型,大體觀、HE和免疫組化等方法分析其防護(hù)效果;Western Blot檢測(cè)組織蛋白PCNA、p-NF-κB和TNF-α表達(dá),免疫組化和熒光檢測(cè)組織8-OHDG和γH_2AX表達(dá);共聚焦顯微鏡檢測(cè)PKH-67標(biāo)記hucMSC-ex被HaCaT細(xì)胞內(nèi)化情況;UVB和H_2O_2建立HaCaT氧化損傷細(xì)胞模型,免疫熒光分析hucMSC-ex對(duì)活性氧自由基(ROS)表達(dá)影響;細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)PCNA和Caspase3表達(dá)量;Western Blot檢測(cè)H_2O_2作用后HaCaT細(xì)胞增殖、凋亡、炎癥情況,qRT-PCR分析HaCaT細(xì)胞SIRT1和TNF-α表達(dá)情況;Western Blot檢測(cè)對(duì)照組和過(guò)表達(dá)14-3-3ζ組exosome中14-3-3ζ和SIRT1表達(dá)情況;過(guò)表達(dá)14-3-3ζexosome(ad-14-3-3ζ-ex)與H_2O_2共處理HaCaT細(xì)胞,免疫熒光、Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)SIRT1表達(dá)情況;應(yīng)用過(guò)表達(dá)14-3-3ζ腺病毒轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞,免疫熒光和Western Blot檢測(cè)細(xì)胞SIRT1表達(dá)變化。結(jié)果:茜素油紅O染色陽(yáng)性;Exosome表達(dá)CD63和CD9,電鏡下為“杯狀”結(jié)構(gòu),Nanosight分析其直徑在100nm左右;對(duì)照組皮膚光滑細(xì)膩、狀態(tài)健康,而模型組皮膚明顯紅腫、脫屑、粗糙;HE顯示對(duì)照組皮膚分層清晰,無(wú)病理變化,而模型組表皮細(xì)胞大片壞死,部分仍黏連,分層紊亂。真皮大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),網(wǎng)織纖維腫脹變性,而hucMSC-ex組表皮紅腫、脫屑明顯減輕,細(xì)胞壞死脫落明顯減少,炎細(xì)胞浸潤(rùn)較少。DNA損傷產(chǎn)物顯著減少,p-NF-κB水平顯著下調(diào),PCNA明顯上調(diào);hucMSC-ex在HaCaT胞質(zhì)中富集,ROS和8-OHDG顯著減少,Bax、p-NF-κB、TNF-α明顯下調(diào),PCNA、Bcl2顯著上調(diào);氧化應(yīng)激條件下HaCaT細(xì)胞SIRT1表達(dá)呈時(shí)間和劑量依賴性下調(diào),而hucMSC-ex處理組SIRT1則顯著高表達(dá);過(guò)表達(dá)14-3-3ζexosome(ad-14-3-3ζ-ex)顯著上調(diào)HaCaT細(xì)胞SIRT1水平,促進(jìn)自噬活化,減少DNA損傷和細(xì)胞凋亡;過(guò)表達(dá)14-3-3ζ腺病毒轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞顯著促進(jìn)SIRT1表達(dá)。結(jié)論:HucMSC-ex攜帶14-3-3ζ促進(jìn)HaCaT細(xì)胞SIRT1上調(diào),減少ROS產(chǎn)生和DNA損傷,促進(jìn)自噬活化發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用,緩解UV和H_2O_2誘導(dǎo)的氧化損傷。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R329.2;R594.11
【圖文】：

江 蘇 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文抗炎細(xì)胞因子 IL-10 來(lái)緩解炎癥反應(yīng)[62]。同時(shí)越來(lái)越多文me 也能通過(guò)特定的 miRNA 發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。Ti 等人發(fā)現(xiàn) LPSme 攜帶的 miRNA-let-7b 可通過(guò)抑制 TLR4/NF-κB 途徑并激活 ST從而抑制慢性炎癥反應(yīng)并促進(jìn)皮膚傷口愈合[63]。通過(guò)分析 miRNA hucMSC-exosome 高表達(dá)三種 miRNA（ miRNA-21 ，miRNA1c），研究表明攜帶 miRNA-181c 的 hucMSC-exosome 通過(guò)下調(diào) T燒傷誘導(dǎo)的過(guò)度炎癥[64]。綜上所述，MSC-exosome 能通過(guò)多種不應(yīng)進(jìn)而緩解皮膚的炎癥程度并促進(jìn)傷口的愈合。

圖 1.3.2 MSC-exosome 促血管形成機(jī)制[22]C-exosome 促進(jìn)皮膚細(xì)胞增殖和再上皮化段通常在皮膚損傷后的第 3d 開(kāi)始。此后，成纖維細(xì)胞出現(xiàn)并開(kāi)始（ECM），包括纖連蛋白，I 型和 III 型膠原蛋白。此外，上皮細(xì)區(qū)域的邊緣遷移，從而加速傷口閉合，減少皮膚感染。因此，細(xì)胞對(duì)皮膚再生至關(guān)重要。以前的研究表明，來(lái)自不同來(lái)源的 exosom血漿（PRP），hiPSCs 和 hucMSC 都可以促進(jìn)皮膚細(xì)胞增殖并加速上鼠模型中，PRP 衍生的 exosome 通過(guò)激活 YAP 有效促進(jìn)成纖維細(xì)速再上皮化[75]。此外，人類成纖維細(xì)胞衍生的 exosome 含有具有質(zhì)和 miRNA，這些 exosome 通過(guò)誘導(dǎo)皮膚細(xì)胞的增殖和遷移來(lái)加合[76]。 MSC-exosome 是一種理想的治療工具，因?yàn)樗鼈兙哂胸S富和儲(chǔ)存，安全性和有效性增加以及免疫原性較低。已廣泛報(bào)道 MSC

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳明亮;李吉;肖偉榮;孫磊;唐樺;王琳;吳凌燕;陳翔;謝紅付;;白藜蘆醇對(duì)UVA致HaCaT細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用(英文)[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

2 ;Human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J];Chinese Medical Journal;2005年23期

本文編號(hào)：2715275