發(fā)布時間：2020-06-14 15:38

【摘要】：目的:自噬和外泌體是細(xì)胞普遍存在的生物學(xué)現(xiàn)象。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的自噬對維持干細(xì)胞分化以及細(xì)胞抗應(yīng)激能力發(fā)揮重要作用;干細(xì)胞分泌的外泌體參與了組織損傷修復(fù)、炎癥介導(dǎo)等眾多生理活動。納米材料被廣泛應(yīng)用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究。球形金納米顆粒對干細(xì)胞自噬和外泌體分泌的影響尚不十分明確。因此,進(jìn)一步明確金納米顆粒對干細(xì)胞自噬和外泌體分泌的影響,對金納米顆粒在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用以及干細(xì)胞外泌體研究中都要重要作用。方法:利用檸檬酸還原法用檸檬酸三鈉還原四氯金酸合成球形金納米顆粒,透射電子顯微鏡觀察納米顆粒的大小的形態(tài),檢測納米顆粒紫外可見光譜的吸收峰。提取大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,向干細(xì)胞中加入20nm大小的球形金納米顆粒,用CCK-8法檢測金納米顆粒對干細(xì)胞增殖能力的影響。收集細(xì)胞上清液,利用超速離心提取外泌體,送投射電子顯微鏡和納米顆粒跟蹤分析儀檢測。以Western Blot檢測金納米顆粒對干細(xì)胞自噬的影響,導(dǎo)入RFP-GFP-LC3慢病毒檢測自噬流,溶酶體探針檢測溶酶體酸堿度,透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)內(nèi)體系統(tǒng)的變化。結(jié)果:1.利用檸檬酸還原法法合成的球形金納米顆粒大小均一,形態(tài)呈球形,紫外吸收峰在540nm左右;金納米顆粒具有良好的生物相容性,低于30μg/ml的濃度對干細(xì)胞增殖活性和形態(tài)無明顯影響。2.球形金納米顆粒處理后的干細(xì)胞分泌的外泌體量明顯多余未處理組。大量的納米顆粒聚集在多囊泡體內(nèi)。3.球形金納米顆粒處理后細(xì)胞溶酶體堿化、自噬小體同溶酶體融合受阻。結(jié)論:球形金納米顆粒能阻斷細(xì)胞自噬流,有效促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌外泌體。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2
【圖文】：

圖 1.球形金納米顆粒的掃描電鏡圖Figure1. Scanning electron micrograph of spherical gold nanoparticles注：A 圖為粒徑為 10nm 的球形金納米顆粒掃描電子顯微鏡圖；B 圖為粒徑 20nm 的球形金納米顆粒掃描電子顯微鏡圖；C 圖為粒徑為 50nm 的球形金納

圖 2.球形金納米顆粒粒徑分布圖Figure2.Size distribution of spherical gold nanoparticles注：A 圖為粒徑為 10nm 的球形金納米顆粒粒徑分布圖；B 圖為粒徑為 20nm球形金納米顆粒粒徑分布圖；C 圖為粒徑為 50nm 的球形金納米顆粒粒徑分布

【參考文獻(xiàn)】

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1 張彩順;呂剛;張基仁;肖強;;無細(xì)胞神經(jīng)移植物復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年28期

本文編號：2712997