【摘要】：目的:1.建立并評價實驗性高原腦水腫大鼠模型。2.探討5,6,7,8-四羥基黃酮對高原腦水腫大鼠的干預作用及初步作用機制。方法:1.雄性Wistar大鼠隨機分為4組:正常對照組(Control),低壓低氧組(HH),低溫低壓低氧組(HH+2℃),溫差低壓低氧組(HH+12/2℃),除Control組外,其余各組根據(jù)不同的條件將大鼠置于低壓氧艙模擬海拔6000 m高原暴露72 h,通過大鼠體重、腦組織含水量、血腦屏障通透性的變化以及HE染色結果初步篩選出高原腦水腫模型;通過氧化應激、能量代謝指標以及炎癥因子、AQP4、VEGF的表達進一步明確最佳模型。2.采用小鼠常壓密閉缺氧耐力實驗和小鼠急性減壓耐力實驗研究5,6,7,8-四羥基黃酮低、中、高劑量組的抗缺氧活性,確定最佳給藥劑量;將Wistar雄性大鼠隨機分為4組:正常對照組(Control),高原腦水腫模型組(HACE),乙酰唑胺組(ACZ),5,6,7,8-四羥基黃酮組(THF),除Control組外,HACE組、ACZ組、THF組于當?shù)睾０喂辔附o藥3天后置于低壓氧艙模擬海拔6000m繼續(xù)給藥3天,觀察腦組織病理結構改變,檢測腦含水量、EB含量、相關生化指標、基因和蛋白表達。3.采用八臂迷宮實驗探究5,6,7,8-四羥基黃酮對HACE大鼠認知能力的影響。將訓練成功的Wistar雄性大鼠隨機分為3組:正常對照組(Control),高原腦水腫模型組(HACE),5,6,7,8-四羥基黃酮組(THF),重復大鼠急性減壓實驗,于實驗第7天采用八臂迷宮進行行為學測定,分別記錄WME,WMEF,RME,RMEF,TE,TT,每只大鼠進行兩次測定,取平均值,評價5,6,7,8-四羥基黃酮對HACE大鼠學習記憶的保護作用。結果:1.與Control組和其他低氧組相比,HH+12/2℃組大鼠體重下降最為明顯,腦含水量和EB含量顯著增加,HE染色觀察到腦組織明顯的病理改變,因此初步篩選出HH+12/2℃組為高原腦水腫模型;此外,通過氧化應激、能量代謝指標、炎癥因子、AQP4、VEGF的表達進一步驗證模型的最佳性,結果發(fā)現(xiàn)HH+12/2℃組O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,丙酮酸和PK含量或活力升高(P0.05或P0.01),SOD,CAT,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性和GSH含量顯著降低(P0.05或P0.01),大鼠血清中NFκB-p65,IL-6,IL-1β和TNF-α濃度顯著增加(P0.05或P0.01),與腦水腫密切相關的AQP4和VEGF表達水平顯著增高(P0.01),以上結果進一步明確HH+12/2℃為最佳的高原腦水腫建模條件。2.小鼠常壓密閉耐力實驗和急性減壓耐力實驗結果表明:5,6,7,8-四羥基黃酮高劑量組(500 mg/kg)的抗缺氧效果最佳,故后期實驗選用高劑量進行給藥,通過大小鼠種屬間等效劑量換算得到大鼠給藥劑量為350 mg/kg;急性減壓大鼠實驗表明:5,6,7,8-四羥基黃酮可以明顯降低高原腦水腫大鼠腦組織含水量和腦通透性,改善腦組織病理變化,此外,5,6,7,8-四羥基黃酮能夠降低O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,PK水平(P0.05或P0.01),增強SOD,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活力和GSH含量(P0.05或P0.01),降低氧化應激,通過下調NFκB-p65的含量,減少炎癥因子IL-6,IL-1β和TNF-α的分泌和AQP4的表達(P0.05或P0.01),此外,低氧信號通路的關鍵因子HIF-1α蛋白和基因表達下調(P0.05),其下游相關蛋白和基因VEGF、MMP-9表達減少(P0.05或P0.01)。3.與Control組相比,HACE組大鼠無論是短期記憶錯誤(WME,WMEF)還是長期記憶錯誤(RME,RMEF)都顯著增加(P0.01),探究總時間(TT)和錯誤總次數(shù)(TE)也顯著性延長(P0.01),而經THF之干預后,WME,WMEF,RME,RMEF,TT,TE顯著性降低(P0.05或P0.01)。結論:1.確定建立實驗性大鼠高原腦水腫模型的最佳條件為6000 m結合寒冷條件下的晝夜溫差(12/2℃)。2.5,6,7,8-四羥基黃酮具有良好的抗缺氧作用,且高劑量(350 mg/kg)抗缺氧活性最佳;5,6,7,8-四羥基黃酮對預防高原腦水腫具有良好的作用,其作用機制主要是通過降低機體氧化能力、提高抗氧化能力,緩解氧化應激,同時通過NFκB途徑,降低炎性反應,減少下游水通道蛋白AQP4的表達,降低腦含水量,維持血腦屏障通透性,改善腦組織病理形態(tài);此外,5,6,7,8-四羥基黃酮能夠下調低氧信號通路中的關鍵因子HIF-1α蛋白及其下游相關蛋白VEGF、MMP-9表達,降低血管通透性,保護血腦屏障,從而預防高原腦水腫的發(fā)生。3.5,6,7,8-四羥基黃酮對HACE所致的學習記憶功能缺陷有一定的改善作用。
【圖文】：

6,7,8-四羥基黃酮化學結構式術路線進展迅速，死亡率高，，其分子機制而目前國內外尚無公認理想的 HAC制。因此本文立足于影響 HACE 的方式以及寒冷等來建立實驗性 HAC以 10 m/s 速度急進至海拔 6000 m 溫、2℃、12/2℃（8:00-20:00 為 12血腦屏障通透性和 HE 染色作為判定模型，通過以生化指標、蛋白表達E 大鼠模型。

學碩士研究生學位論文 高原腦水腫大鼠模型的建立及 5,6,7,8-四羥基黃酮的干迷宮通過對 HACE 大鼠短時記憶、長時記憶以及總探究時間等的分析從行為學角度闡述了 5,6,7,8-四羥基黃酮對 HACE 大鼠認知能力的保 技術路線本文技術路線圖如圖1-2、1-3所示。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻】

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2 常朋飛;韓威;孫世中;趙娟;;白藜蘆醇對高原腦水腫小鼠認知功能的影響[J];武警后勤學院學報(醫(yī)學版);2016年03期

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本文編號：2708707