發(fā)布時(shí)間：2020-06-12 00:20

【摘要】：目的:1.建立并評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)性高原腦水腫大鼠模型。2.探討5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì)高原腦水腫大鼠的干預(yù)作用及初步作用機(jī)制。方法:1.雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(Control),低壓低氧組(HH),低溫低壓低氧組(HH+2℃),溫差低壓低氧組(HH+12/2℃),除Control組外,其余各組根據(jù)不同的條件將大鼠置于低壓氧艙模擬海拔6000 m高原暴露72 h,通過(guò)大鼠體重、腦組織含水量、血腦屏障通透性的變化以及HE染色結(jié)果初步篩選出高原腦水腫模型;通過(guò)氧化應(yīng)激、能量代謝指標(biāo)以及炎癥因子、AQP4、VEGF的表達(dá)進(jìn)一步明確最佳模型。2.采用小鼠常壓密閉缺氧耐力實(shí)驗(yàn)和小鼠急性減壓耐力實(shí)驗(yàn)研究5,6,7,8-四羥基黃酮低、中、高劑量組的抗缺氧活性,確定最佳給藥劑量;將Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(Control),高原腦水腫模型組(HACE),乙酰唑胺組(ACZ),5,6,7,8-四羥基黃酮組(THF),除Control組外,HACE組、ACZ組、THF組于當(dāng)?shù)睾０喂辔附o藥3天后置于低壓氧艙模擬海拔6000m繼續(xù)給藥3天,觀察腦組織病理結(jié)構(gòu)改變,檢測(cè)腦含水量、EB含量、相關(guān)生化指標(biāo)、基因和蛋白表達(dá)。3.采用八臂迷宮實(shí)驗(yàn)探究5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì)HACE大鼠認(rèn)知能力的影響。將訓(xùn)練成功的Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(Control),高原腦水腫模型組(HACE),5,6,7,8-四羥基黃酮組(THF),重復(fù)大鼠急性減壓實(shí)驗(yàn),于實(shí)驗(yàn)第7天采用八臂迷宮進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定,分別記錄WME,WMEF,RME,RMEF,TE,TT,每只大鼠進(jìn)行兩次測(cè)定,取平均值,評(píng)價(jià)5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì)HACE大鼠學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用。結(jié)果:1.與Control組和其他低氧組相比,HH+12/2℃組大鼠體重下降最為明顯,腦含水量和EB含量顯著增加,HE染色觀察到腦組織明顯的病理改變,因此初步篩選出HH+12/2℃組為高原腦水腫模型;此外,通過(guò)氧化應(yīng)激、能量代謝指標(biāo)、炎癥因子、AQP4、VEGF的表達(dá)進(jìn)一步驗(yàn)證模型的最佳性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HH+12/2℃組O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,丙酮酸和PK含量或活力升高(P0.05或P0.01),SOD,CAT,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性和GSH含量顯著降低(P0.05或P0.01),大鼠血清中NFκB-p65,IL-6,IL-1β和TNF-α濃度顯著增加(P0.05或P0.01),與腦水腫密切相關(guān)的AQP4和VEGF表達(dá)水平顯著增高(P0.01),以上結(jié)果進(jìn)一步明確HH+12/2℃為最佳的高原腦水腫建模條件。2.小鼠常壓密閉耐力實(shí)驗(yàn)和急性減壓耐力實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:5,6,7,8-四羥基黃酮高劑量組(500 mg/kg)的抗缺氧效果最佳,故后期實(shí)驗(yàn)選用高劑量進(jìn)行給藥,通過(guò)大小鼠種屬間等效劑量換算得到大鼠給藥劑量為350 mg/kg;急性減壓大鼠實(shí)驗(yàn)表明:5,6,7,8-四羥基黃酮可以明顯降低高原腦水腫大鼠腦組織含水量和腦通透性,改善腦組織病理變化,此外,5,6,7,8-四羥基黃酮能夠降低O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,PK水平(P0.05或P0.01),增強(qiáng)SOD,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活力和GSH含量(P0.05或P0.01),降低氧化應(yīng)激,通過(guò)下調(diào)NFκB-p65的含量,減少炎癥因子IL-6,IL-1β和TNF-α的分泌和AQP4的表達(dá)(P0.05或P0.01),此外,低氧信號(hào)通路的關(guān)鍵因子HIF-1α蛋白和基因表達(dá)下調(diào)(P0.05),其下游相關(guān)蛋白和基因VEGF、MMP-9表達(dá)減少(P0.05或P0.01)。3.與Control組相比,HACE組大鼠無(wú)論是短期記憶錯(cuò)誤(WME,WMEF)還是長(zhǎng)期記憶錯(cuò)誤(RME,RMEF)都顯著增加(P0.01),探究總時(shí)間(TT)和錯(cuò)誤總次數(shù)(TE)也顯著性延長(zhǎng)(P0.01),而經(jīng)THF之干預(yù)后,WME,WMEF,RME,RMEF,TT,TE顯著性降低(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1.確定建立實(shí)驗(yàn)性大鼠高原腦水腫模型的最佳條件為6000 m結(jié)合寒冷條件下的晝夜溫差(12/2℃)。2.5,6,7,8-四羥基黃酮具有良好的抗缺氧作用,且高劑量(350 mg/kg)抗缺氧活性最佳;5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì)預(yù)防高原腦水腫具有良好的作用,其作用機(jī)制主要是通過(guò)降低機(jī)體氧化能力、提高抗氧化能力,緩解氧化應(yīng)激,同時(shí)通過(guò)NFκB途徑,降低炎性反應(yīng),減少下游水通道蛋白AQP4的表達(dá),降低腦含水量,維持血腦屏障通透性,改善腦組織病理形態(tài);此外,5,6,7,8-四羥基黃酮能夠下調(diào)低氧信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子HIF-1α蛋白及其下游相關(guān)蛋白VEGF、MMP-9表達(dá),降低血管通透性,保護(hù)血腦屏障,從而預(yù)防高原腦水腫的發(fā)生。3.5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì)HACE所致的學(xué)習(xí)記憶功能缺陷有一定的改善作用。
【圖文】：

6,7,8-四羥基黃酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式術(shù)路線進(jìn)展迅速，死亡率高，，其分子機(jī)制而目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)公認(rèn)理想的 HAC制。因此本文立足于影響 HACE 的方式以及寒冷等來(lái)建立實(shí)驗(yàn)性 HAC以 10 m/s 速度急進(jìn)至海拔 6000 m 溫、2℃、12/2℃（8:00-20:00 為 12血腦屏障通透性和 HE 染色作為判定模型，通過(guò)以生化指標(biāo)、蛋白表達(dá)E 大鼠模型。

學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 高原腦水腫大鼠模型的建立及 5,6,7,8-四羥基黃酮的干迷宮通過(guò)對(duì) HACE 大鼠短時(shí)記憶、長(zhǎng)時(shí)記憶以及總探究時(shí)間等的分析從行為學(xué)角度闡述了 5,6,7,8-四羥基黃酮對(duì) HACE 大鼠認(rèn)知能力的保 技術(shù)路線本文技術(shù)路線圖如圖1-2、1-3所示。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 王玲;王春霞;;白楊素對(duì)膿毒癥急性肺損傷大鼠COX-2和NOS表達(dá)的影響[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2017年06期

2 常朋飛;韓威;孫世中;趙娟;;白藜蘆醇對(duì)高原腦水腫小鼠認(rèn)知功能的影響[J];武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年03期

3 趙雪巍;劉培玉;劉丹;孫珊珊;李貞;余可馨;張Z誒

本文編號(hào)：2708707