【摘要】：[目的]:比較木瓜蛋白酶注射及Hulth法建立滇南小耳豬骨關(guān)節(jié)炎的作用效果,為建立骨關(guān)節(jié)炎動物模型提供新的思路。[方法]:選取27頭10-15kg的成年滇南小耳豬作為研究對象。27頭豬被隨機(jī)分為三組:手術(shù)組(9頭)、化學(xué)組(9頭)及空白組(9頭)。手術(shù)組接受前后交叉韌帶切斷、內(nèi)側(cè)副韌帶切斷及內(nèi)側(cè)半月板切除�；瘜W(xué)組則于第1天、第4天及第7天接受關(guān)節(jié)腔木瓜蛋白酶注射。空白組則常規(guī)飼養(yǎng)。造模后4w、8w及12w每組分別處死3頭豬,取滑膜ELISA檢測SDF-I含量;取股骨內(nèi)髁負(fù)重面關(guān)節(jié)軟骨行組織學(xué)染色(HE染色、番紅固綠染色及免疫熒光染色);取軟骨行Q-PCR檢測二型膠原蛋白、聚集蛋白聚糖及MMP-3mRNA含量、Westerm Blot檢測二型膠原蛋白、聚集蛋白聚糖及MMP-3蛋白含量。[結(jié)果]:組織學(xué)染色:(1)HE染色及番紅固綠染色顯示4周時手術(shù)組出現(xiàn)軟骨表面輕度損壞,8周時軟骨破壞加重,潮線不連續(xù),12周時大量軟骨細(xì)胞丟失,細(xì)胞核排列紊亂,潮線消失�；瘜W(xué)組4周是軟骨表面粗糙,8周時軟骨表面破壞并延伸至軟骨下骨,12周時軟骨破壞更加嚴(yán)重,且軟骨下骨外露。(2)免疫熒光染色:顯示手術(shù)組及化學(xué)組二型膠原蛋白含量逐漸減少,結(jié)合IOD/area結(jié)果顯示化學(xué)組二型膠原蛋白降低更加明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)ELSIA:隨著時間增加,手術(shù)組及化學(xué)組SDF-1含量較空白組顯著增加,且同一時間內(nèi),化學(xué)組SDF-1含量更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)QPCR:隨著時間增加,手術(shù)組及化學(xué)組MMP-3 mRNA含量逐漸增加,而二型膠原蛋白及聚集蛋白聚糖mRNA含量逐漸下降,且同一時間內(nèi),化學(xué)組MMP-3下降,二型膠原蛋白及聚集蛋白聚糖增加更顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)隨著時間增加,手術(shù)組及化學(xué)組MMP-3蛋白水平逐漸增加,而二型膠原蛋白及聚集蛋白聚糖蛋白水平逐漸下降,且同一時間內(nèi),化學(xué)組MMP-3下降,二型膠原蛋白及聚集蛋白聚糖增加更顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]:(1)滇南小耳豬可用于OA模型研究,且較傳統(tǒng)小動物更方便獲取足夠的病理組織;(2)Hulth手術(shù)方法及木瓜蛋白酶注射都可以誘導(dǎo)滇南小耳豬關(guān)節(jié)軟骨退變,形成骨性關(guān)節(jié)炎;(3)化學(xué)法在相同時間內(nèi)可較手術(shù)法誘導(dǎo)更加明顯的關(guān)節(jié)炎,且造模時間更短,對動物創(chuàng)傷更小;(4)手術(shù)造模后OA多局限于膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間室,接近于人類早期OA表現(xiàn);而化學(xué)法造模誘導(dǎo)出膝關(guān)節(jié)全間室OA,更接近于人類中晚期OA表現(xiàn)。(5)SDF-1可作為滇南小耳豬OA的特征性的標(biāo)志物,故SDF-1/CXCR4信號通路在滇南小耳豬OA的病理過程中可能起關(guān)鍵作用,為下一步研制高效靶向治療藥物奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R684.3;R-332

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本文編號：2707083