發(fā)布時(shí)間：2020-06-10 06:21

【摘要】：曾毅院士實(shí)驗(yàn)室主要研究治療性艾滋病疫苗，前期提出的多載體HIV疫苗序貫和重復(fù)免疫的策略能在小鼠及恒河猴體內(nèi)誘導(dǎo)高水平、持久的HIV特異性免疫反應(yīng)。多載體疫苗中的DNA和rMVA疫苗目前正在HIV-1感染者中進(jìn)行Ⅰ期臨床試驗(yàn)，rAd5疫苗也已經(jīng)申報(bào)Ⅰ期臨床研究。本研究主要對(duì)上述三種載體為基礎(chǔ)的艾滋病疫苗聯(lián)合免疫的方案進(jìn)行深入探討，為申報(bào)三種疫苗聯(lián)合應(yīng)用的Ⅰ期臨床試驗(yàn)提供依據(jù)。一方面對(duì)表達(dá)HIV基因的上述疫苗的免疫劑量、免疫間隔及免疫順序等進(jìn)行優(yōu)化；同時(shí)，從我國(guó)CRF01_AE亞型感染者中克隆env基因，構(gòu)建多載體疫苗，為與其他亞型疫苗聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)更廣譜的免疫反應(yīng)奠定基礎(chǔ)。另一方面構(gòu)建表達(dá)SIV gag及env基因的三種載體疫苗，采用上述優(yōu)化的免疫方案先在小鼠體內(nèi)進(jìn)行聯(lián)合免疫效果的觀察，為進(jìn)一步在感染SIV的恒河猴模型內(nèi)進(jìn)行疫苗治療效果的評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。 表達(dá)HIV-1基因的DNA、rMVA及rAd5疫苗單獨(dú)免疫后細(xì)胞免疫反應(yīng)高峰均出現(xiàn)在免疫后2w。DNA單獨(dú)免疫1次或2次以及三種不同劑量的rMVA疫苗單獨(dú)免疫產(chǎn)生的細(xì)胞免疫反應(yīng)都較弱，各組間差別不顯著。三種不同劑量的rAd5疫苗單獨(dú)免疫均可產(chǎn)生較高水平特異性細(xì)胞免疫。因而rMVA疫苗和rAd5疫苗都選擇中劑量，DNA疫苗選擇免疫2次。兩種疫苗聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，DNA與rAd5聯(lián)合免疫效果優(yōu)于DNA與rMVA聯(lián)合。DNA與rAd5疫苗免疫間隔4w誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)于免疫間隔3w；DNA與rMVA疫苗免疫間隔4w與3w誘導(dǎo)的反應(yīng)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。隨著時(shí)間推移，各組免疫反應(yīng)水平均有所下降。三種疫苗聯(lián)合應(yīng)用時(shí)采用DNA疫苗初免兩次、間隔2w，第二種疫苗rMVA或rAd5與DNA疫苗免疫間隔4w，第三種疫苗rAd5或rMVA采用6w及4w兩種不同間隔以進(jìn)一步優(yōu)化方案。結(jié)果第三種疫苗免疫后各組小鼠都能誘導(dǎo)強(qiáng)而且持久的Gag特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，在末次免疫后12w仍維持在比較高的水平�？偨Y(jié)上述研究結(jié)果為了使疫苗能更持久誘導(dǎo)高水平免疫反應(yīng)，最佳的免疫方案為： DNA疫苗初免2次、間隔2w，再間隔4w rAd5疫苗加強(qiáng)免疫，間隔6wrMVA疫苗加強(qiáng)免疫。 上述DNA和rMVA疫苗表達(dá)B′/C重組型HIV-1基因，rAd5疫苗表達(dá)B′亞型HIV-1基因。近年來(lái)，CRF01_AE亞型也成為我國(guó)的主要流行亞型，設(shè)計(jì)針對(duì)該亞型的疫苗迫在眉睫。將表達(dá)多種不同亞型的疫苗聯(lián)合應(yīng)用可能誘導(dǎo)更廣譜的免疫反應(yīng)。因此本研究從A/E亞型感染者的血液標(biāo)本中克隆env基因，對(duì)其共享序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化，成功構(gòu)建了DNA疫苗，能有效表達(dá)env基因。在小鼠體內(nèi)能誘導(dǎo)高水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答。同時(shí)，也對(duì)克隆得到env序列的基因特性進(jìn)行了分析。V1、V2、V4和V5區(qū)在氨基酸長(zhǎng)度的多態(tài)性上變化較大，而V3區(qū)相對(duì)較為保守。對(duì)Env氨基酸序列中N-糖基化位點(diǎn)的分析顯示V3，C3，C4及V5區(qū)糖基化位點(diǎn)的數(shù)目變化不大。gp41區(qū)的糖基化位點(diǎn)主要集中在跨膜區(qū)外側(cè)的胞外功能域。還進(jìn)一步構(gòu)建含有上述env序列的假病毒，共獲得8株滴度較高的假病毒，均為R5嗜性；檢測(cè)了假病毒對(duì)5種已知廣譜中和抗體和不同亞型HIV-1感染者血漿的中和敏感性。結(jié)果8株假病毒均對(duì)2G12中和抗體不敏感，對(duì)VRC_01、PG9，PG16及NIH45-46中和抗體比較敏感；對(duì)A/E及B/C亞型血漿抗體較為敏感，而對(duì)B′亞型血漿的中和敏感性較弱。該結(jié)果為研究CRF01_AE亞型疫苗的抗原特性及評(píng)價(jià)疫苗的免疫反應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。 同時(shí)，為方便評(píng)價(jià)前述三載體疫苗聯(lián)合應(yīng)用的治療效果，本研究構(gòu)建了表達(dá)SIV gag/env優(yōu)化基因的DNA、rMVA及rAd5多載體疫苗。DNA水平和蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果證明，包含這兩種基因的三種載體疫苗可以有效表達(dá)相應(yīng)的目的基因；在小鼠體內(nèi)初步的免疫效果評(píng)價(jià)表明構(gòu)建的三種載體疫苗均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的Gag/Env特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。將進(jìn)一步在SIV感染的猴模型中進(jìn)行治療效果的評(píng)價(jià)，，為申報(bào)臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

第1章 緒論景陷病毒（HIV）概述病毒 1 型（human immunodeficiency virus type o合征（acquired immune deficiency syndrom, AIDS滋病規(guī)劃署 2013 年的報(bào)告估計(jì)[3]，2012 年世界，新發(fā)感染人數(shù)仍以每年超過(guò) 200 萬(wàn)的數(shù)字居高者總數(shù)仍在持續(xù)增長(zhǎng)，每年將近 160 萬(wàn)的感染者鏈 RNA 病毒，隸屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬。成熟為二十面體對(duì)稱球形。電鏡下觀察可見致密的圓子和酶（如圖 1-1）。

避宿主的免疫控制。同時(shí)，由于 HIV 的膜蛋白 Env 結(jié)構(gòu)復(fù)雜，免疫原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì) Env 抗原的廣譜中和抗體。由于 gp41 胞內(nèi)尾區(qū)的存 Env 蛋白的低表達(dá)也被認(rèn)為是 HIV/SIV 病毒免疫逃逸機(jī)制之一[15]，據(jù) HIV 病毒刺突的數(shù)目?jī)H約為 7-16 個(gè)[16-18]。同時(shí) Env 蛋白中表面蛋白 糖基化程度非常高，約占其分子量的 50%左右[19]，這些因素都減少了表位的暴露，使病毒得以逃避免疫系統(tǒng)的攻擊[20]。缺乏有效的動(dòng)物模型滋病疫苗研發(fā)的主要障礙之一。由于 HIV-1 無(wú)法感染猴，可以感染黑猩不致病[21, 22]，因此用其它類似的病毒感染相應(yīng)宿主并致病來(lái)模擬 HIV進(jìn)程是目前一個(gè)主要選擇。猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency ）是猴 AIDS 的致病因子，由于 SIV 和 HIV-1 有較高的同源性和相似的構(gòu)，且 SIV 感染恒河猴可引起與 HIV-1 感染人類類似的病理過(guò)程和免疫4]，盡管并不能完全以SIV感染猴模型來(lái)預(yù)測(cè)和評(píng)判HIV預(yù)防性疫苗的在評(píng)價(jià)治療性疫苗策略的有效性上還是具有一定的指導(dǎo)意義。4 艾滋病疫苗的主要免疫保護(hù)策略
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙秀英;黃德莊;汪俊韜;;植物載體疫苗的研究進(jìn)展[J];傳染病信息;1999年02期

2 張波,陳冠軍;細(xì)菌載體疫苗的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2002年02期

3 付遠(yuǎn)輝;何金生;洪濤;;呼吸道合胞病毒載體疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2012年01期

4 曲莉,周正任;臨床用免疫學(xué)關(guān)鍵詞100 77、載體疫苗[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2001年02期

5 萬(wàn)婧;周向陽(yáng);方維煥;;桿狀病毒在載體疫苗中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2012年03期

6 鄭繼平,劉向昕,王令春,李淑琴,方門忠,張兆山;產(chǎn)腸毒素大腸桿菌混合載體疫苗的免疫原性評(píng)價(jià)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2004年06期

7 劉祥;李欣;余倩;張朝武;;幽門螺桿菌載體疫苗研究進(jìn)展[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志;2008年08期

8 周珍文;胡旭初;余新炳;;枯草桿菌芽孢載體疫苗的研究及其在寄生蟲病防治中的應(yīng)用前景[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

9 王熙;基于傷寒桿菌的HIV-1載體疫苗的構(gòu)建和鑒定[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1996年03期

10 董樹林;表位嵌合Ig載體疫苗研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1997年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 仇華吉;羅玉子;李娜;童光志;;一種基于塞姆利基森林病毒復(fù)制子的新型復(fù)制子載體[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳丹瑛;表達(dá)HIV-1及SIV基因的三載體疫苗免疫策略的研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2014年

2 余雙慶;表達(dá)HIV-1 gag和env基因的多載體疫苗在動(dòng)物體內(nèi)免疫原性研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 牟為;基于體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)在遲鈍愛德華氏菌中構(gòu)建多價(jià)載體疫苗[D];華東理工大學(xué);2011年

2 吳鼎龍;新型肺炎多糖結(jié)合蛋白載體疫苗的制備及表征[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

3 馬紀(jì)梅;細(xì)胞穿膜肽的篩選及其在細(xì)菌載體疫苗設(shè)計(jì)上的探索[D];華東理工大學(xué);2014年

4 郭雷;乙型肝炎治療性MVA載體疫苗的基礎(chǔ)研究[D];吉林大學(xué);2010年

5 胡偉;新型嚴(yán)謹(jǐn)型四環(huán)素調(diào)控載體的構(gòu)建及鑒定[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 寧元元;以減毒鼠傷寒沙門氏菌為載體的腸出血性大腸桿菌EHEC O157：H7疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2705905