發(fā)布時(shí)間：2020-06-07 03:49

【摘要】：交感神經(jīng)系統(tǒng)的過(guò)度激活在高血壓的產(chǎn)生和維持中起重要作用。去腎動(dòng)脈神經(jīng)可降低外周及中樞交感活性，促進(jìn)腎鈉排泄，降低血壓。腎交感神經(jīng)的血壓調(diào)控機(jī)制至今尚未明確闡明。去腎動(dòng)脈神經(jīng)通過(guò)什么途徑和機(jī)制降低外周及中樞交感神經(jīng)活性，調(diào)節(jié)鈉處理，目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道未完全闡明。 腎臟交感神經(jīng)通過(guò)刺激腎小管上皮細(xì)胞α1B受體激活多種細(xì)胞信號(hào)途徑，增強(qiáng)腎小管鈉氫交換蛋白（NHE）與Na+-K+-ATP酶活性，腎小管鈉重吸收增加；同時(shí)RAAS激活，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）作用于近曲腎小管上皮細(xì)胞，同時(shí)刺激醛固酮（ALD）的釋放使腎小管鈉重吸收增加；此外，內(nèi)源性哇巴因（EO），可增加交感神經(jīng)活性，激活腎臟Na＋-K＋-ATP酶α1亞基及增加NHE表達(dá)，最終導(dǎo)致血壓升高。本研究的目的是首先觀察去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR腎臟交感神經(jīng)活性和鈉處理的影響，進(jìn)而通過(guò)觀察其對(duì)RAAS和EO含量的影響，腎臟NHE表達(dá)和Na＋-K＋-ATP酶活性及表達(dá)的調(diào)節(jié)，探討去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)腎臟鈉處理的調(diào)節(jié)機(jī)制，探討腎交感神經(jīng)在高血壓發(fā)生發(fā)展和維持中的機(jī)制。本研究擬采用溶于苯酚乙醇溶液涂抹SHR腎動(dòng)脈周?chē)M(jìn)行去腎動(dòng)脈神經(jīng)，進(jìn)行一下四方面研究。 第一部分去腎動(dòng)脈神經(jīng)的SHR模型建立及腎交感神經(jīng)活性檢測(cè) 目的：通過(guò)苯酚消蝕法去腎動(dòng)脈神經(jīng)構(gòu)建SHR模型，通過(guò)檢測(cè)血清和腎組織NE含量，以及腎組織酪氨酸羥化酶（TH）染色證實(shí)該模型對(duì)腎交感神經(jīng)活性的影響；同時(shí)檢測(cè)下丘腦和腎上腺交感活性，以了解該模型下丘腦和腎上腺交感活動(dòng)的改變。方法：取16只12周齡的雄性SHR隨機(jī)分為二組，并取8只相同周齡的雄性對(duì)照WKY大鼠，分為去腎神經(jīng)組（RDNX）、假手術(shù)組（Sham）和正常對(duì)照組（WKY）。采用tail-cuff法測(cè)定血壓參數(shù)和心率。于術(shù)后2周，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，分別取腎臟、下丘腦、腎上腺。采用高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)血清及組織NE含量。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎臟、下丘腦和腎上腺組織TH蛋白染色。 結(jié)果： 1．RDNX大鼠收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）及平均動(dòng)脈壓（MBP）均顯著低于Sham組（P0.05）。 2．RDNX組血清NE含量與Sham組相比顯著降低（14.02±2.37vs.23.04±8.77ng/ml，P＜0.05），在腎（0.91±0.21vs.1.34±0.18ng/mg）、下丘腦（1.52±0.43vs.2.95±0.67ng/mg）及腎上腺組織（271.80±50.10vs.371.48±76.62ng/mg） NE含量亦顯著降低（P均＜0.05）。 3．相關(guān)性分析顯示MBP與血清NE水平呈顯著正相關(guān)（β=0.784，r2=0.615，P＜0.001）。 4．RDNX組TH蛋白在腎小葉間動(dòng)脈表達(dá)與Sham組相比顯著降低（0.13±0.04vs.0.08±0.02，P＜0.05）；腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞TH蛋白免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比顯著減少（21.31±2.52vs.47.56±5.17%，P＜0.05）；下丘腦視旁核細(xì)胞TH蛋白陽(yáng)性表達(dá)百分比與Sham組相比顯著降低（16.22±2.51vs.30.35±4.33%，P＜0.05）。 結(jié)論：采用苯酚消蝕法成功構(gòu)建的去腎動(dòng)脈神經(jīng)SHR模型血清和腎組織NE水平降低，腎小葉間動(dòng)脈TH蛋白表達(dá)減少，血壓降低；同時(shí)下丘腦及腎上腺交感神經(jīng)活性降低。 第二部分去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR腎鈉處理的影響 目的：通過(guò)觀察去腎動(dòng)脈神經(jīng)術(shù)后SHR腎臟鈉排泄、腎小管重吸收功能的變化，以及腎小球硬化指數(shù)、腎小血管厚度和腎間質(zhì)纖維化的改變，探討交感神經(jīng)活性對(duì)鈉處理、腎功能和腎血管的影響。 方法：12周齡的雄性SHR和WKY大鼠，分為RDNX、Sham和WKY組。于處死前收集24h尿液；于術(shù)后2周，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，取腎臟組織。采用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血鈉、鉀、肌酐和總蛋白水平，以及尿鈉、鉀、尿肌酐、尿蛋白水平。原子吸收光度計(jì)檢測(cè)血、尿鋰離子濃度。計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）、鈉清除率（CNa）、鋰排泄分?jǐn)?shù)（FELi）、遠(yuǎn)端腎小管鈉重吸收率（FDRNa）和尿肌酐與血肌酐比值（Ucr/Scr）。腎組織石蠟切片PAS染色和Masson染色，計(jì)算腎小球硬化指數(shù)（GS）、腎間質(zhì)纖維化指數(shù)（IF）及腎小葉間動(dòng)脈血管壁中層厚度與內(nèi)徑比值。 結(jié)果： 1．RDNX組、Sham組與WKY組間腎重指數(shù)、Ccr及24h尿蛋白的比較均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。 2．RDNX組與Sham組相比CNa和FELi均升高（P＞0.05），F(xiàn)DRNa組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．RDNX組與Sham組相比Ucr/Scr升高（79.87±26.92vs.135.74±37.21，，P=0.003）。 4．RDNX組與Sham組相比GS指數(shù)降低（0.53±0.09vs.0.21±0.05，P＜0.05）。 5．RDNX組與Sham組相比腎小葉間動(dòng)脈血管壁中層厚度與內(nèi)徑比值降低（0.54±0.07vs.0.28±0.04，P＜0.05）。 6．RDNX組、Sham組與WKY組間IF值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.34） 結(jié)論：去腎動(dòng)脈神經(jīng)可以降低SHR近端腎小管鈉的重吸收，腎鈉排泄增加，改善腎小管濃縮稀釋功能及腎小球?yàn)V過(guò)功能，同時(shí)延緩腎小球硬化的發(fā)展和改善腎血管阻力。 第三部分去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR RAAS的影響 目的：通過(guò)觀察去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR RAAS的影響，探討去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)腎鈉處理的調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：12周齡的雄性SHR和WKY大鼠，分為RDNX、Sham和WKY組。于術(shù)后2周采血，分別取腎臟、下丘腦、和腎上腺。采用放免法檢測(cè)血清及組織醛固酮（ALD）水平。采用熒光定量PCR檢測(cè)腎臟血管緊張素受體1型（AT1R）mRNA表達(dá)。免疫組化染色檢測(cè)腎臟組織切片AngⅡ和AT1R蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．去腎動(dòng)脈神經(jīng)術(shù)后SHR血清、腎臟、腎上腺及下丘腦組織ALD水平均降低（P均＜0.05）。 2．RDNX組腎臟AT1R mRNA表達(dá)較Sham組降低（P＜0.05），F(xiàn)old為㧟2.22。 3．RDNX組腎皮質(zhì)和腎外髓部外帶（OSOM）AT1R蛋白表達(dá)較Sham組降低（P＜0.05），而在各組大鼠腎外髓部?jī)?nèi)帶（ISOM）的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4．RDNX組腎皮質(zhì)、OSOM和ISOM AngⅡ蛋白的表達(dá)均較Sham組顯著降低（P＜0.05）。 結(jié)論：去腎動(dòng)脈神經(jīng)可以降低SHR血清、腎臟、腎上腺及下丘腦組織ALD水平，降低腎組織AngⅡ和AT1R的表達(dá)，從而在鈉處理中發(fā)揮作用。 第四部分去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR腎內(nèi)源性哇巴因的影響 目的：通過(guò)觀察去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR腎組織EO含量和Na+-K+-ATP酶活性和表達(dá)的影響，探討去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)腎鈉處理的調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：12周齡的雄性SHR和WKY大鼠，分為RDNX、Sham和WKY組。于術(shù)后2周采血，分別取腎臟、下丘腦、和腎上腺。采用放免法檢測(cè)血清及組織EO含量。采用酶學(xué)比色法測(cè)定腎組織Na+-K+-ATP酶活性。采用熒光定量PCR檢測(cè)腎臟Na+-K+-ATP酶α1和β1亞基mRNA表達(dá)。免疫組化染色檢測(cè)腎臟組織切片Na+-K+-ATP酶蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．去腎動(dòng)脈神經(jīng)術(shù)后SHR血清、腎臟及下丘腦組織EO含量均降低（P均＜0.05），而腎上腺EO含量無(wú)改變。 2．Sham組腎組織Na+-K+-ATP酶活性與WKY組相比顯著升高（P=0.02）。去腎動(dòng)脈神經(jīng)術(shù)后，可使升高的腎組織Na+-K+-ATP酶活性顯著降低。同時(shí)，相關(guān)性分析顯示腎組織NE含量與Na+-K+-ATP酶活性呈顯著正相關(guān)（r2=0.579，β=0.733，P＜0.05）。 3．RDNX組腎臟Na+-K+-ATP酶α1mRNA表達(dá)較Sham組降低（P＜0.05），F(xiàn)old為㧟1.92。RDNX、Sham與WKY組間Na+-K+-ATP酶β1mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.63）。 4．RDNX組腎皮質(zhì)、OSOM和ISOM的Na+-K+-ATP酶蛋白表達(dá)（分別為0.0956±0.0144，0.1310±0.0175，0.1693±0.0136）均較Sham組降低（P＜0.05）。 結(jié)論：去腎動(dòng)脈神經(jīng)可以SHR降低血清、腎臟及下丘腦組織EO含量，進(jìn)而降低腎臟Na＋-K＋-ATP酶活性及Na+-K+-ATP酶α1的表達(dá)，從而在降低腎小管鈉的重吸收；此外腎上腺EO的合成和分泌可能存在自身反饋調(diào)節(jié)作用。 第五部分去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)SHR腎臟鈉氫交換蛋白表達(dá)的影響 目的：觀察去腎動(dòng)脈神經(jīng)對(duì)腎臟NHE1、NHE3及其調(diào)節(jié)因子NHERF1和NHERF2表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討腎臟交感神經(jīng)在腎臟鈉處理調(diào)節(jié)中的作用。 方法：12周齡的雄性SHR和WKY大鼠，分為RDNX、Sham和WKY組。采用熒光定量PCR檢測(cè)腎臟NHE1、NHE3、NHERF1和NHERF2mRNA表達(dá)。采用Western-blot和免疫熒光染色檢測(cè)腎臟NHE1、NHE3、NHERF1和NHERF2蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1．RDNX組與Sham組相比腎臟NHE1mRNA表達(dá)降低（P＜0.05），F(xiàn)old為㧟1.84；NHE3mRNA表達(dá)降低，F(xiàn)old為㧟4.02；NHERF1mRNA表達(dá)顯著升高，F(xiàn)old為2.09；NHERF2mRNA表達(dá)降低，F(xiàn)old為㧟2.95。 2．Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，RDNX組與Sham組相比NHE1、NHE3和NHERF2蛋白表達(dá)均降低（P＜0.05），NHERF1蛋白表達(dá)增加（P＜0.05）。 3．免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，RDNX組與Sham組相比NHE1、NHE3和NHERF2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），NHERF1蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。 結(jié)論：去腎動(dòng)脈神經(jīng)可降低SHR腎組織NHE1及NHE3的表達(dá)；同時(shí)NHERF1表達(dá)升高，而NHERF2表達(dá)降低。 總而言之，本課題研究結(jié)果顯示:（1）采用苯酚消蝕法構(gòu)建的去腎動(dòng)脈神經(jīng)SHR模型，血清及腎組織交感神經(jīng)活性降低，血壓下降；同時(shí)下丘腦和腎上腺組織交感神經(jīng)活性降低。（2）去腎動(dòng)脈神經(jīng)降低SHR近端腎小管鈉重吸收，腎鈉排泄增加，改善腎小管濃縮與稀釋功能，并延緩高血壓腎小球硬化的發(fā)展和改善腎血管阻力。（3）去腎動(dòng)脈神經(jīng)可降低SHR血清、腎及下丘腦組織ALD水平，腎組織AngⅡ及AT1R的表達(dá)。（4）去腎動(dòng)脈神經(jīng)可降低SHR血清、腎及下丘腦組織EO含量，使腎組織Na＋-K＋-ATP酶活性及Na+-K+-ATP酶α1表達(dá)降低，從而減少腎小管鈉重吸收。（5）去腎動(dòng)脈神經(jīng)可降低SHR腎組織NHE1和NHE3表達(dá)，進(jìn)而腎臟鈉排泄增加。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1;R338

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4 陳壯;腎動(dòng)脈三維重建在mPCNL穿刺定位中的數(shù)字解剖研究[D];南華大學(xué);2010年

5 秦衛(wèi)和;多層螺旋CT在正常成人活體腎及活體腎移植術(shù)前綜合評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

6 彭衛(wèi)華;多層螺旋CT三維重建模擬研究豬腎動(dòng)脈和集合系統(tǒng)的解剖關(guān)系[D];南昌大學(xué);2010年

7 潘澤遠(yuǎn);多層螺旋CT三維成像下腎動(dòng)脈測(cè)量及與腎盂、腎盞形態(tài)間關(guān)系的研究[D];南華大學(xué);2013年

8 韓雪;MSCTA在活體腎移植供腎切除術(shù)前的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2010年

9 劉仁貴;腹主動(dòng)脈的應(yīng)用解剖學(xué)研究[D];四川大學(xué);2007年

10 黃強(qiáng);犬經(jīng)皮插管腎動(dòng)脈注射人HGF基因的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2700791