【摘要】：目的建立測(cè)定吸附無細(xì)胞百白破聯(lián)合疫苗中白喉類毒素酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)方法,并進(jìn)行驗(yàn)證及初步應(yīng)用。方法以高效價(jià)兔抗DT多克隆抗體和相應(yīng)酶標(biāo)抗體建立雙抗體夾心ELISA法,確定線性范圍同時(shí)驗(yàn)證該方法的重復(fù)性和特異性等確定檢測(cè)限度,并初步應(yīng)用。結(jié)果 DT含量在0~0.0160 Lf/m L范圍內(nèi)反應(yīng)曲線線性關(guān)系良好(r0.99)。該方法與破傷風(fēng)類毒素(Tetanus toxoid,TT)、百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、百日咳絲狀血凝素(Filamantous hemagglutinin,FHA)與黏著素(Pertactin,Prn)無明顯交叉反應(yīng),重復(fù)性好、特異性較強(qiáng),精密度及準(zhǔn)確度驗(yàn)證均符合常規(guī)質(zhì)控要求,通過驗(yàn)證確定的準(zhǔn)確檢測(cè)范圍為0.000 8~0.016 0 Lf/m L;檢測(cè)限度為0.000 8 Lf/m L。該方法對(duì)DT抗原進(jìn)行了吸附率的檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)了10批白喉類毒素原液與《中華人民共和國藥典》三部2010年版規(guī)定的絮狀單位檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比,變異系數(shù)低于20%。結(jié)論建立了白喉類毒素雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法,為吸附無細(xì)胞百白破聯(lián)合疫苗生產(chǎn)過程中白喉類毒素含量的質(zhì)量控制提供了有效技術(shù)手段。
【圖文】：

．3．1線性范圍在0～0．0160Lf/mL范圍內(nèi)反應(yīng)曲線線性關(guān)系良好(r＞0．99)，建立方程y=100．71x+0．0825，見圖2。2．3．2線性關(guān)系的重復(fù)性驗(yàn)證重復(fù)試驗(yàn)10次，10次不同時(shí)間檢測(cè)的r值，結(jié)果見表1。無論r值還是r2值均＞0．99，表明實(shí)驗(yàn)中所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有較好的可重復(fù)性。注:1．抗DT血清1∶2;2．抗DT血清1∶4;3．抗DT血清1∶4;4．抗DT血清1∶8;5．抗DT血清1∶16;6．抗DT血清1∶32;7．NIBSC的DT標(biāo)準(zhǔn)品。圖1免疫雙擴(kuò)散法測(cè)定DT抗血清效價(jià)Fig．1DeterminationofpotencyforDTanti-serumbyadoublediffusionmethod圖2DT的雙抗體夾心ELISA法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立Fig．2ThestandardcurveforadoubleantibodysandwichELISAindetectionDT表1線性關(guān)系的重復(fù)性驗(yàn)證Tab．1TheverificationrepeatabilityoflinearityfortheELISA次數(shù)rr210．9900．99520．9940．99730．9910．99540．9950．99750．9950．99760．9980．99970．9950．99780．9910．99590．9900．995100．9940．9972．3．3特異性驗(yàn)證雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)DT抗原的特異性，見表2。對(duì)含量高的破傷風(fēng)類毒素、百日咳毒素、百日咳絲狀血凝素和黏著素的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，而對(duì)含量為80Lf/mL的DT檢測(cè)結(jié)果微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2016年4月第44卷第2期ProginMicrobiolImmunol，Apr．2016，Vol．44No．2·47·

．3．1線性范圍在0～0．0160Lf/mL范圍內(nèi)反應(yīng)曲線線性關(guān)系良好(r＞0．99)，建立方程y=100．71x+0．0825，見圖2。2．3．2線性關(guān)系的重復(fù)性驗(yàn)證重復(fù)試驗(yàn)10次，10次不同時(shí)間檢測(cè)的r值，，結(jié)果見表1。無論r值還是r2值均＞0．99，表明實(shí)驗(yàn)中所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有較好的可重復(fù)性。注:1．抗DT血清1∶2;2．抗DT血清1∶4;3．抗DT血清1∶4;4．抗DT血清1∶8;5．抗DT血清1∶16;6．抗DT血清1∶32;7．NIBSC的DT標(biāo)準(zhǔn)品。圖1免疫雙擴(kuò)散法測(cè)定DT抗血清效價(jià)Fig．1DeterminationofpotencyforDTanti-serumbyadoublediffusionmethod圖2DT的雙抗體夾心ELISA法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立Fig．2ThestandardcurveforadoubleantibodysandwichELISAindetectionDT表1線性關(guān)系的重復(fù)性驗(yàn)證Tab．1TheverificationrepeatabilityoflinearityfortheELISA次數(shù)rr210．9900．99520．9940．99730．9910．99540．9950．99750．9950．99760．9980．99970．9950．99780．9910．99590．9900．995100．9940．9972．3．3特異性驗(yàn)證雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)DT抗原的特異性，見表2。對(duì)含量高的破傷風(fēng)類毒素、百日咳毒素、百日咳絲狀血凝素和黏著素的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，而對(duì)含量為80Lf/mL的DT檢測(cè)結(jié)果微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2016年4月第44卷第2期ProginMicrobiolImmunol，Apr．2016，Vol．44No．2·47·

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