【摘要】：組蛋白的甲基化在調(diào)節(jié)基因表達方面發(fā)揮著重要的作用,而組蛋白甲基化修飾的研究在免疫學領域的研究才剛剛開始。為了尋找在天然免疫中可能發(fā)揮作用的表觀遺傳修飾酶,我們通過對小鼠骨髓來源的樹突狀細胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析,發(fā)現(xiàn)Ezhl在成熟的樹突狀細胞中有特異性的表達,于是我們認為Ezhl可能在樹突狀細胞功能的調(diào)控中發(fā)揮作用。 為了研究Ezhl的功能,我們使用了siRNA干擾了小鼠骨髓來源的樹突狀細胞中Ezhl的表達,我們發(fā)現(xiàn)在Ezhl干擾后的細胞在使用LPS和PGN刺激后所分泌的炎性因子如白細胞介素-6,腫瘤壞死因子和一型干擾素的水平有了顯著的降低。同樣我們使用siRNA干擾小鼠的腹腔巨噬細胞后,其在LPS和PGN刺激后分泌的細胞因子水平也有所降低。Ezh1干擾后的樹突狀細胞在LPS刺激后的MHCⅡ和共刺激分子的表達有所降低,導致其無法有效地誘導T細胞的應答。在接下來的實驗中,我們需要驗證是否Ezhl對天然免疫的調(diào)控依賴于其及甲基化轉(zhuǎn)移酶的活性,我們通過在巨噬細胞中過表達酶活性區(qū)域缺失的Ezhl的實驗進一步證明了Ezhl對TLR活化的調(diào)控是和其組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶活性相關的。隨后通過分析信號通路的活化水平,我們發(fā)現(xiàn)在LPS刺激下,Ezhl干擾的巨噬細胞中TLR活化所誘導的信號通路的活化有所下降,NF-κb和IRF-3信號通路的中信號接頭分子和轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化有所下降。這種下降可通過過表達全長的Ezhl逆轉(zhuǎn),但過表達酶活性缺失的Ezhl則沒有效果。 Ezh1是一個組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶,根據(jù)以前的報道其可通過對基因位點H3K27三甲基化的修飾抑制蛋白的表達,我們猜想Ezh1可能通過沉默某些TLR通路的負調(diào)控分子基因的表達,維持其信號通路的暢通。通過對干擾Ezh1后的巨噬細胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析和驗證,我們發(fā)現(xiàn),Ezh1抑制TLR通路的負向調(diào)控蛋白Tollip的表達,而這種抑制依賴于Ezh1分子的甲基轉(zhuǎn)移酶活性。最后,我們通過染色體免疫共沉淀實驗證明了Tollip轉(zhuǎn)錄起始位點近端的H3K27三甲基化水平受到Ezh1的調(diào)控,并且Ezh1靶向與染色體的調(diào)節(jié)位點結合。 綜上所述,本研究結果提示,組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶Ezh1抑制TLR通路的免疫負向調(diào)控分子Tollip的表達,繼而促進了TLR通路活化誘導的細胞因子的產(chǎn)生。
【圖文】：

Medium LPS CpG P(%《I:C》PGN圖3.1TLR配體刺激促進Ezhl在樹突狀細胞中的表達Figure 3.1 Upregulation of Ezhl expression in dendritic cells by TLR ligands

主要結論(1)在LPS等TLR配體刺激的小鼠樹突狀細胞和腹腔巨瘦細胞中，，組蛋白賴l#酸甲基轉(zhuǎn)移醇Ezhl表徸顯著增加；(2) Ezhl促進TLR所誘導的細胞因子的表達并促進TLR信號通路的活化；(3) Ezhl通過促進TLR活化所誘導樹突狀細胞MHCn和共刺激分子的表達促進T細胞免疫；(4) Ezhl促進TLR誘導的細胞因子產(chǎn)生和促進TLR信號通路活化依賴于其組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶活性；(5) Ezhl通過抑制TLR信號通路負向調(diào)控分子ToUip分子轉(zhuǎn)錄從而促進TLR信號通路的活化(6) Ezhl通過組蛋白H3ia7的三甲基化而抑制Tbllip分子的表達
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【共引文獻】

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