【摘要】：組蛋白的甲基化在調(diào)節(jié)基因表達(dá)方面發(fā)揮著重要的作用,而組蛋白甲基化修飾的研究在免疫學(xué)領(lǐng)域的研究才剛剛開始。為了尋找在天然免疫中可能發(fā)揮作用的表觀遺傳修飾酶,我們通過對小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)Ezhl在成熟的樹突狀細(xì)胞中有特異性的表達(dá),于是我們認(rèn)為Ezhl可能在樹突狀細(xì)胞功能的調(diào)控中發(fā)揮作用。 為了研究Ezhl的功能,我們使用了siRNA干擾了小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞中Ezhl的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)在Ezhl干擾后的細(xì)胞在使用LPS和PGN刺激后所分泌的炎性因子如白細(xì)胞介素-6,腫瘤壞死因子和一型干擾素的水平有了顯著的降低。同樣我們使用siRNA干擾小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞后,其在LPS和PGN刺激后分泌的細(xì)胞因子水平也有所降低。Ezh1干擾后的樹突狀細(xì)胞在LPS刺激后的MHCⅡ和共刺激分子的表達(dá)有所降低,導(dǎo)致其無法有效地誘導(dǎo)T細(xì)胞的應(yīng)答。在接下來的實(shí)驗(yàn)中,我們需要驗(yàn)證是否Ezhl對天然免疫的調(diào)控依賴于其及甲基化轉(zhuǎn)移酶的活性,我們通過在巨噬細(xì)胞中過表達(dá)酶活性區(qū)域缺失的Ezhl的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了Ezhl對TLR活化的調(diào)控是和其組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶活性相關(guān)的。隨后通過分析信號通路的活化水平,我們發(fā)現(xiàn)在LPS刺激下,Ezhl干擾的巨噬細(xì)胞中TLR活化所誘導(dǎo)的信號通路的活化有所下降,NF-κb和IRF-3信號通路的中信號接頭分子和轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化有所下降。這種下降可通過過表達(dá)全長的Ezhl逆轉(zhuǎn),但過表達(dá)酶活性缺失的Ezhl則沒有效果。 Ezh1是一個組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶,根據(jù)以前的報(bào)道其可通過對基因位點(diǎn)H3K27三甲基化的修飾抑制蛋白的表達(dá),我們猜想Ezh1可能通過沉默某些TLR通路的負(fù)調(diào)控分子基因的表達(dá),維持其信號通路的暢通。通過對干擾Ezh1后的巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析和驗(yàn)證,我們發(fā)現(xiàn),Ezh1抑制TLR通路的負(fù)向調(diào)控蛋白Tollip的表達(dá),而這種抑制依賴于Ezh1分子的甲基轉(zhuǎn)移酶活性。最后,我們通過染色體免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明了Tollip轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)近端的H3K27三甲基化水平受到Ezh1的調(diào)控,并且Ezh1靶向與染色體的調(diào)節(jié)位點(diǎn)結(jié)合。 綜上所述,本研究結(jié)果提示,組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶Ezh1抑制TLR通路的免疫負(fù)向調(diào)控分子Tollip的表達(dá),繼而促進(jìn)了TLR通路活化誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
【圖文】：

Medium LPS CpG P(%《I:C》PGN圖3.1TLR配體刺激促進(jìn)Ezhl在樹突狀細(xì)胞中的表達(dá)Figure 3.1 Upregulation of Ezhl expression in dendritic cells by TLR ligands

主要結(jié)論(1)在LPS等TLR配體刺激的小鼠樹突狀細(xì)胞和腹腔巨瘦細(xì)胞中，，組蛋白賴l#酸甲基轉(zhuǎn)移醇Ezhl表徸顯著增加；(2) Ezhl促進(jìn)TLR所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的表達(dá)并促進(jìn)TLR信號通路的活化；(3) Ezhl通過促進(jìn)TLR活化所誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞MHCn和共刺激分子的表達(dá)促進(jìn)T細(xì)胞免疫；(4) Ezhl促進(jìn)TLR誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生和促進(jìn)TLR信號通路活化依賴于其組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶活性；(5) Ezhl通過抑制TLR信號通路負(fù)向調(diào)控分子ToUip分子轉(zhuǎn)錄從而促進(jìn)TLR信號通路的活化(6) Ezhl通過組蛋白H3ia7的三甲基化而抑制Tbllip分子的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2698078