【摘要】：目的建立相對靜息狀態(tài)下在體骨細胞的體外模型,體外模擬其體內(nèi)生存的微環(huán)境,尋找骨細胞不同狀態(tài)下的標志分子。方法1.采用I型膠原蛋白凝膠鋪板,并接種成骨細胞系MC3T3-E1,進行成骨誘導;2.分別取誘導14天、21天、28天、35天的細胞凝膠層進行石蠟包埋切片;3.通過HE染色的方法觀察細胞形態(tài)以及細胞間連接;4.通過免疫組化的方法檢測成骨細胞標志物RUNX2以及骨細胞標志物DMP1的表達;5.應用該模型對骨細胞不同狀態(tài)下的標志分子進行驗證。結(jié)果1.在成骨誘導過程中,隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,細胞進入凝膠的深度逐漸增加,且在第35天的HE染色切片中發(fā)現(xiàn)星狀、骨細胞樣細胞,且出現(xiàn)類似骨小管的小管狀結(jié)構(gòu)。在誘導14-28天時,凝膠層細胞表達RUNX2逐漸減弱,直至誘導35天,RUNX2不表達。在誘導第28天時,凝膠層細胞開始表達DMP1,并隨誘導天數(shù)的增加,表達逐漸增強;2.在體骨組織切片中骨細胞不表達Notch1,體外骨細胞表達Notch1,而本骨細胞體外模型與在體骨組織切片中Notch1表達一致;3.成骨細胞系MC3T3-E1中,下調(diào)Notch2可使β-cantein及其下游靶基因Notch1以及Notch2本身的下游靶基因NFATc1表達增加,進而影響骨重建;4.骨細胞系M LO-Y4中,下調(diào)Notch1可降低Notch2影響骨重建。結(jié)論1.成功的建立了相對靜息狀態(tài)下在體骨細胞的體外模型并能在體外模擬其體內(nèi)生存的微環(huán)境2.Notch1可作為判斷骨細胞不同功能狀態(tài)的標志分子3.Notch1、Notch2相互作用影響骨重建
【圖文】：

圖 1-1 I 型膠原中培養(yǎng)成骨細胞系 MC3T3-E1 的整體實物圖從 I 型膠原中培養(yǎng)成骨細胞系 MC3T3-E1 的大體觀中發(fā)現(xiàn)，，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，含有 MC3T3-E1 的凝膠受細胞的牽拉逐漸固縮。0 天 1421 天 28 天天35 天

10圖 1-2 I 型膠原中成骨細胞系 MC3T3-E1 的微觀形態(tài)學觀察采用 HE 染色的方法，在鏡下觀察 I 型膠原中成骨細胞系 MC3T3-E1 的微觀形態(tài)，發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，細胞進入凝膠的深度逐漸增加，且在第 35 天的 HE 染色切片中發(fā)40X 40X 40X
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2

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本文編號：2687215