【摘要】：目的:Sel1L(Suppressor/Enhancer of Lin-12-like)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的羥甲基戊二酰基還原酶降解蛋白1(Hrd1)的銜接蛋白,其構(gòu)成的Sel1L-Hrd1復(fù)合物可以通過(guò)對(duì)免疫細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成的調(diào)控,從而調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能。有研究表明,Sel1L參與自身免疫性疾病及多種癌癥類型的腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,而樹突狀細(xì)胞在激發(fā)免疫應(yīng)答以及免疫耐受方面起重要作用。本文構(gòu)建Sel1Lf/fCD11c-Cre+/-基因敲除小鼠模型,研究Se1l L對(duì)骨髓源樹突狀細(xì)胞功能的影響。方法:1.采用Cre-Loxp重組酶系統(tǒng)構(gòu)建DCs細(xì)胞特定基因敲除小鼠模型。將Sel1Lf/f小鼠與CD11c-Cre+/-小鼠(C57BL/6背景)進(jìn)行雜合,其子代小鼠的基因型經(jīng)PCR鑒定后,篩選出Sel1Lf/f CD11c-Cre+/-小鼠。2.取適齡的野生型(WT)小鼠及敲除型(KO)小鼠,分別稱取兩組小鼠的體重以及脾臟的重量,并進(jìn)行拍照。3.脾臟組織切片用HE染色進(jìn)行觀察。采用流式分析小鼠脾臟中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、B220+B細(xì)胞、CD11c+細(xì)胞及c DCs亞群比例變化。流式檢測(cè)CD11c+細(xì)胞表面共刺激分子及抗原提呈分子的表達(dá)情況。4.用GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)BMDCs,LPS刺激成熟后,收集細(xì)胞及上清。Western blot檢測(cè)BMDCs中Sel1L的表達(dá)情況。流式檢測(cè)CD11c+DCs群體數(shù)及CFSE的變化。流式分析BMDCs表面CD80、CD86、MHC-I及MHC-II的表達(dá)情況。ELISA和q RT-PCR檢測(cè)炎癥相關(guān)分子IL-6和IL-12的表達(dá)水平。流式檢測(cè)DCs誘導(dǎo)抗原特異性CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果:(1)與野生型小鼠相比,敲除型小鼠的脾臟重量明顯增大,肉眼觀察其發(fā)生明顯充血腫脹變大,組織切片顯示脾臟的白髓區(qū)相對(duì)明顯變小。(2)流式結(jié)果表明Sel1L的缺失使脾臟的CD8+T細(xì)胞數(shù)量降低。敲除型小鼠的脾臟中CD11c+細(xì)胞數(shù)量升高,c DCs亞群中c DC1s數(shù)量明顯降低而c DC2s數(shù)量升高,同時(shí)BMDCs細(xì)胞在誘導(dǎo)分化過(guò)程中的增殖效率受到抑制。(3)敲除型小鼠DCs分泌炎癥因子的能力及MHC-I的表達(dá)升高,增強(qiáng)對(duì)CD8+T細(xì)胞的激活,同時(shí)MHC-II的表達(dá)顯著降低,抑制CD4+T細(xì)胞的增殖。結(jié)論:在DCs中特異性敲除Sel1L,降低BMDCs分化效率,促進(jìn)炎性因子分泌,并調(diào)控其抗原提呈功能,在激發(fā)免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

DCs的發(fā)育過(guò)程

Sel1L 分子對(duì)骨髓源樹突狀細(xì)胞的影響 其激活后，上調(diào) MHC-II 和共刺激分子，并快速產(chǎn)生大量的 I 型和 III 型 IFN，影響其他免疫效應(yīng)細(xì)胞如 cDCs、NK 細(xì)胞、CTL 和輔助性 T 細(xì)胞，，從而介導(dǎo)抗病毒免疫反應(yīng)[35]。小鼠 pDCs 的抗原呈遞及激發(fā) T 細(xì)胞能力很弱，但其在介導(dǎo)外周免疫耐受方面發(fā)揮重要作用[36]。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 盧伸;王青青;;第14屆國(guó)際樹突狀細(xì)胞會(huì)議熱點(diǎn)解讀[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2017年01期

2 ;中國(guó)醫(yī)科院揭示樹突狀細(xì)胞啟動(dòng)“經(jīng)典免疫”的調(diào)控機(jī)理[J];生物學(xué)教學(xué);2017年01期

3 鐘貴文;;“吞噬細(xì)胞”及其在免疫中的作用探究[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年Z1期

4 ;第14屆國(guó)際樹突狀細(xì)胞研討會(huì)會(huì)議通知[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2016年03期

5 ;第14屆國(guó)際樹突狀細(xì)胞研討會(huì)會(huì)議通知[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2016年04期

6 曹華;薛峰;陳小英;李霞;陳雪華;鄭捷;;鏈球菌誘導(dǎo)外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞的成熟[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2013年12期

7 馬金柱;宋佰芬;崔玉東;;樹突狀細(xì)胞免疫功能的研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年02期

8 桂琳;李靜;陳寶安;;白血病樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)影響因素的研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2010年06期

9 ;封面圖片——樹突狀細(xì)胞[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);2009年04期

10 ;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)胞調(diào)節(jié)新機(jī)制[J];生物學(xué)通報(bào);2007年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王玉忠;邢春葉;王倩;石其光;馮勛剛;郝延磊;;樹突狀細(xì)胞亞群在吉蘭-巴雷綜合征發(fā)病中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)峰會(huì)暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2015年

2 王玉忠;邢春葉;王倩;石其光;馮勛剛;郝延磊;;樹突狀細(xì)胞亞群在吉蘭-巴雷綜合征發(fā)病中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2015年

3 時(shí)建銓;張穎冬;周俊山;田有勇;趙紅東;;Aβ1-15誘導(dǎo)小鼠髓源樹突狀細(xì)胞的正確功能[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2014年

4 郝群;梁元姣;吳元赭;汪灝;;應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片研究人樹突狀細(xì)胞成熟前后免疫相關(guān)基因的差異表達(dá)[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 蔣應(yīng)明;萬(wàn)濤;陳國(guó)友;夏大靜;周向陽(yáng);修方明;張意;曹雪濤;;樹突狀細(xì)胞來(lái)源的鈣粘著相關(guān)蛋白新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 王勝軍;王麗莉;李堅(jiān);許化溪;;肺癌患者胸水中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)和初步鑒定[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

7 徐克成;牛立志;郭子倩;張德春;左建生;;樹突狀細(xì)胞及其在癌腫治療中應(yīng)用[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2003年

8 何廣勝;邵宗鴻;和虹;劉鴻;施白;潔均;曹燕然;Q

本文編號(hào)：2686301