【摘要】：目的:Sel1L(Suppressor/Enhancer of Lin-12-like)是內(nèi)質網(wǎng)上的羥甲基戊二�；�原酶降解蛋白1(Hrd1)的銜接蛋白,其構成的Sel1L-Hrd1復合物可以通過對免疫細胞的蛋白質合成的調控,從而調節(jié)免疫細胞的功能。有研究表明,Sel1L參與自身免疫性疾病及多種癌癥類型的腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,而樹突狀細胞在激發(fā)免疫應答以及免疫耐受方面起重要作用。本文構建Sel1Lf/fCD11c-Cre+/-基因敲除小鼠模型,研究Se1l L對骨髓源樹突狀細胞功能的影響。方法:1.采用Cre-Loxp重組酶系統(tǒng)構建DCs細胞特定基因敲除小鼠模型。將Sel1Lf/f小鼠與CD11c-Cre+/-小鼠(C57BL/6背景)進行雜合,其子代小鼠的基因型經(jīng)PCR鑒定后,篩選出Sel1Lf/f CD11c-Cre+/-小鼠。2.取適齡的野生型(WT)小鼠及敲除型(KO)小鼠,分別稱取兩組小鼠的體重以及脾臟的重量,并進行拍照。3.脾臟組織切片用HE染色進行觀察。采用流式分析小鼠脾臟中CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、B220+B細胞、CD11c+細胞及c DCs亞群比例變化。流式檢測CD11c+細胞表面共刺激分子及抗原提呈分子的表達情況。4.用GM-CSF、IL-4誘導培養(yǎng)BMDCs,LPS刺激成熟后,收集細胞及上清。Western blot檢測BMDCs中Sel1L的表達情況。流式檢測CD11c+DCs群體數(shù)及CFSE的變化。流式分析BMDCs表面CD80、CD86、MHC-I及MHC-II的表達情況。ELISA和q RT-PCR檢測炎癥相關分子IL-6和IL-12的表達水平。流式檢測DCs誘導抗原特異性CD4+T細胞及CD8+T細胞增殖的能力。結果:(1)與野生型小鼠相比,敲除型小鼠的脾臟重量明顯增大,肉眼觀察其發(fā)生明顯充血腫脹變大,組織切片顯示脾臟的白髓區(qū)相對明顯變小。(2)流式結果表明Sel1L的缺失使脾臟的CD8+T細胞數(shù)量降低。敲除型小鼠的脾臟中CD11c+細胞數(shù)量升高,c DCs亞群中c DC1s數(shù)量明顯降低而c DC2s數(shù)量升高,同時BMDCs細胞在誘導分化過程中的增殖效率受到抑制。(3)敲除型小鼠DCs分泌炎癥因子的能力及MHC-I的表達升高,增強對CD8+T細胞的激活,同時MHC-II的表達顯著降低,抑制CD4+T細胞的增殖。結論:在DCs中特異性敲除Sel1L,降低BMDCs分化效率,促進炎性因子分泌,并調控其抗原提呈功能,在激發(fā)免疫應答中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

DCs的發(fā)育過程

Sel1L 分子對骨髓源樹突狀細胞的影響 其激活后，上調 MHC-II 和共刺激分子，并快速產(chǎn)生大量的 I 型和 III 型 IFN，影響其他免疫效應細胞如 cDCs、NK 細胞、CTL 和輔助性 T 細胞，，從而介導抗病毒免疫反應[35]。小鼠 pDCs 的抗原呈遞及激發(fā) T 細胞能力很弱，但其在介導外周免疫耐受方面發(fā)揮重要作用[36]。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 盧伸;王青青;;第14屆國際樹突狀細胞會議熱點解讀[J];浙江大學學報(醫(yī)學版);2017年01期

2 ;中國醫(yī)科院揭示樹突狀細胞啟動“經(jīng)典免疫”的調控機理[J];生物學教學;2017年01期

3 鐘貴文;;“吞噬細胞”及其在免疫中的作用探究[J];中學生物教學;2017年Z1期

4 ;第14屆國際樹突狀細胞研討會會議通知[J];中國腫瘤生物治療雜志;2016年03期

5 ;第14屆國際樹突狀細胞研討會會議通知[J];中國腫瘤生物治療雜志;2016年04期

6 曹華;薛峰;陳小英;李霞;陳雪華;鄭捷;;鏈球菌誘導外周血單個核細胞來源的樹突狀細胞的成熟[J];中國皮膚性病學雜志;2013年12期

7 馬金柱;宋佰芬;崔玉東;;樹突狀細胞免疫功能的研究進展[J];中國預防獸醫(yī)學報;2012年02期

8 桂琳;李靜;陳寶安;;白血病樹突狀細胞體外培養(yǎng)影響因素的研究[J];中國實驗血液學雜志;2010年06期

9 ;封面圖片——樹突狀細胞[J];中國廠礦醫(yī)學;2009年04期

10 ;科學家發(fā)現(xiàn)樹突狀細胞調節(jié)新機制[J];生物學通報;2007年11期

相關會議論文 前10條

1 王玉忠;邢春葉;王倩;石其光;馮勛剛;郝延磊;;樹突狀細胞亞群在吉蘭-巴雷綜合征發(fā)病中的作用[A];中華醫(yī)學峰會暨中華醫(yī)學會神經(jīng)病學分會第八屆全國中青年神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2015年

2 王玉忠;邢春葉;王倩;石其光;馮勛剛;郝延磊;;樹突狀細胞亞群在吉蘭-巴雷綜合征發(fā)病中的作用[A];中華醫(yī)學會第十八次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編（上）[C];2015年

3 時建銓;張穎冬;周俊山;田有勇;趙紅東;;Aβ1-15誘導小鼠髓源樹突狀細胞的正確功能[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編（上）[C];2014年

4 郝群;梁元姣;吳元赭;汪灝;;應用基因表達譜芯片研究人樹突狀細胞成熟前后免疫相關基因的差異表達[A];第四屆長三角婦產(chǎn)科學術論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學術年會論文匯編[C];2009年

5 蔣應明;萬濤;陳國友;夏大靜;周向陽;修方明;張意;曹雪濤;;樹突狀細胞來源的鈣粘著相關蛋白新基因的克隆、表達及功能研究[A];中國免疫學會第四屆學術大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

6 王勝軍;王麗莉;李堅;許化溪;;肺癌患者胸水中樹突狀細胞的誘導和初步鑒定[A];中國免疫學會第四屆學術大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

7 徐克成;牛立志;郭子倩;張德春;左建生;;樹突狀細胞及其在癌腫治療中應用[A];中國中西醫(yī)結合學會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2003年

8 何廣勝;邵宗鴻;和虹;劉鴻;施白;潔均;曹燕然;Q

本文編號：2686301