發(fā)布時間：2020-05-29 00:28

【摘要】：蒲公英甾醇(Taraxasterol)是一種從傳統(tǒng)中藥蒲公英中提取出來的五環(huán)三萜類的化合物,它有廣泛的藥理活性。本試驗(yàn)通過建立ConA和乙醇誘導(dǎo)的小鼠肝損模型,來探究蒲公英甾醇對小鼠免疫性和酒精性肝損傷的保肝作用及其機(jī)制,為蒲公英甾醇應(yīng)用于臨床提供理論基礎(chǔ)。小鼠酒精性肝損傷模型:將小鼠分為6組,即空白組、EtOH組、硫普羅寧組(TPN組)、蒲公英甾醇組(10、5、2.5mg/kg)。各組小鼠每日灌胃相應(yīng)劑量的藥物和50%的乙醇,各1次/d,連續(xù)15 d。末次口服乙醇12h后,取血和肝臟。計(jì)算小鼠肝臟指數(shù);測定小鼠血清中AST、ALT、TG、ADH和LDH的含量、小鼠肝臟中TG、MDA、GSH、SOD的活性和ROS的含量;ELISA法測定小鼠血清中TNF-α和IL-6的含量;通過免疫組化和Western blot法來檢測小鼠肝臟中含有的CYP2E1蛋白的表達(dá);通過Western blot法檢測小鼠肝臟中Nrf2、HO-1、IκBα和p65的蛋白表達(dá)。小鼠免疫性肝損傷模型:將小鼠隨機(jī)分為6組,即空白組、ConA組、聯(lián)苯雙酯組(Bif組)、蒲公英甾醇組(10、5、2.5mg/kg)。除空白組和Con A組外,其他各組每日口服相應(yīng)劑量藥物,1次/d,連續(xù)7 d。末次給藥1h后,小鼠尾靜脈注射18 mg/kg的ConA溶液,8 h后,取血和肝臟。計(jì)算小鼠肝臟和脾臟指數(shù);測定小鼠血清中AST、ALT的含量、肝臟中MDA、GSH、SOD 的活性;ELISA 法測定小鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和 IL-4的含量;利用TUNEL法來檢測肝臟細(xì)胞的凋亡情況;通過Western blot法檢測小鼠肝組織中TLR2、TLR4、p65、Bax和Bcl-2的蛋白表達(dá),計(jì)算Bax/Bcl-2的比值。與EtOH組相比,蒲公英甾醇能顯著或極顯著降低酒精肝小鼠肝臟指數(shù)、血清中ALT、AST、TG、ADH、LDH的含量、小鼠肝組織中TG、MDA和ROS的含量(P0.05或P0.01)、增強(qiáng)小鼠肝組織中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著抑制小鼠血清中TNF-α和IL-6的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著下調(diào)小鼠肝組織中CYP2E1和p65蛋白的表達(dá)、顯著或極顯著抑制IκBα蛋白的降解,顯著或極顯著上調(diào)肝臟中Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)(P0.05或P0.01)。與ConA組相比,蒲公英甾醇能顯著或極顯著降低小鼠肝臟和脾臟指數(shù)、小鼠血清中ALT、AST的含量、小鼠肝組織中MDA的含量(P0.05或P0.01)、增強(qiáng)小鼠肝組織中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著抑制血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和IL-4的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著下調(diào)小鼠肝組織中TLR2、TLR4和p65蛋白的表達(dá),降低Bax/Bcl-2的比值(P0.05 或P0.01)。結(jié)論:上述結(jié)果表明,蒲公英甾醇通過降低機(jī)小鼠血清中ALT、AST等酶類的活性,增加抗氧化酶的活性,減少脂質(zhì)過氧化的發(fā)生,調(diào)控NF-κB通路中關(guān)鍵因子IκBα和p65蛋白的表達(dá),上調(diào)Nrf2和抗氧化酶HO-1來抑制氧化應(yīng)激的產(chǎn)生,對乙醇誘導(dǎo)的小鼠肝損傷起到保護(hù)作用;蒲公英甾醇通過抑制細(xì)胞因子的分泌,下調(diào)NF-κBp65蛋白和Bax蛋白的表達(dá)、上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá),降低Con A對肝細(xì)胞造成的損害和凋亡,從而對Con A所致的肝損傷起到保護(hù)作用。
【圖文】：

ｐ６５的蛋白表達(dá)的影響逡逑１．１０．１蒲公英甾醇對酒精肝小鼠肝臟中ＣＹＰ２Ｅ１蛋白表達(dá)的影響逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果（見圖３）可知：相較于空白組，ＥｔＯＨ組肝臟中ＣＹＰ２Ｅ１逡逑１８逡逑

注：與空白組比較：＃＃戶＜0．0丨；與ＥｔＯＨ組比較：７＞＜０．０５，＂戶＜０．０１。逡逑１．１０．２蒲公英甾醇對酒精肝小鼠肝臟中Ｎｒ。蛋白表達(dá)的影響逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果（見圖４）可知：相較于空白組而言，ＥｔＯＨ組肝臟中逡逑Ｎｒｆ２蛋白表達(dá)量出現(xiàn)極顯著的下降（尸＜0．0１）。與ＥｔＯＨ組相比，蒲公英甾醇高、逡逑中劑量組能極顯著上調(diào)小鼠肝臟中Ｎｒｆ２蛋白的表達(dá)（戶＜０．０１），低劑量組能顯逡逑著上調(diào)小鼠肝臟中Ｎｒｆ２蛋白的表達(dá)（Ｐ＜０．０５）。由此可知，，蒲公英甾醇通過上逡逑調(diào)酒精性肝損傷小鼠肝組織Ｎｒｆ２蛋白的表達(dá)，增加核轉(zhuǎn)入量，進(jìn)而激活下游抗逡逑氧化蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的氧化防御系統(tǒng)，以達(dá)到保肝的目的。逡逑１９逡逑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2686080