發(fā)布時間：2020-05-29 00:28

【摘要】：蒲公英甾醇(Taraxasterol)是一種從傳統(tǒng)中藥蒲公英中提取出來的五環(huán)三萜類的化合物,它有廣泛的藥理活性。本試驗通過建立ConA和乙醇誘導(dǎo)的小鼠肝損模型,來探究蒲公英甾醇對小鼠免疫性和酒精性肝損傷的保肝作用及其機制,為蒲公英甾醇應(yīng)用于臨床提供理論基礎(chǔ)。小鼠酒精性肝損傷模型:將小鼠分為6組,即空白組、EtOH組、硫普羅寧組(TPN組)、蒲公英甾醇組(10、5、2.5mg/kg)。各組小鼠每日灌胃相應(yīng)劑量的藥物和50%的乙醇,各1次/d,連續(xù)15 d。末次口服乙醇12h后,取血和肝臟。計算小鼠肝臟指數(shù);測定小鼠血清中AST、ALT、TG、ADH和LDH的含量、小鼠肝臟中TG、MDA、GSH、SOD的活性和ROS的含量;ELISA法測定小鼠血清中TNF-α和IL-6的含量;通過免疫組化和Western blot法來檢測小鼠肝臟中含有的CYP2E1蛋白的表達;通過Western blot法檢測小鼠肝臟中Nrf2、HO-1、IκBα和p65的蛋白表達。小鼠免疫性肝損傷模型:將小鼠隨機分為6組,即空白組、ConA組、聯(lián)苯雙酯組(Bif組)、蒲公英甾醇組(10、5、2.5mg/kg)。除空白組和Con A組外,其他各組每日口服相應(yīng)劑量藥物,1次/d,連續(xù)7 d。末次給藥1h后,小鼠尾靜脈注射18 mg/kg的ConA溶液,8 h后,取血和肝臟。計算小鼠肝臟和脾臟指數(shù);測定小鼠血清中AST、ALT的含量、肝臟中MDA、GSH、SOD 的活性;ELISA 法測定小鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和 IL-4的含量;利用TUNEL法來檢測肝臟細胞的凋亡情況;通過Western blot法檢測小鼠肝組織中TLR2、TLR4、p65、Bax和Bcl-2的蛋白表達,計算Bax/Bcl-2的比值。與EtOH組相比,蒲公英甾醇能顯著或極顯著降低酒精肝小鼠肝臟指數(shù)、血清中ALT、AST、TG、ADH、LDH的含量、小鼠肝組織中TG、MDA和ROS的含量(P0.05或P0.01)、增強小鼠肝組織中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著抑制小鼠血清中TNF-α和IL-6的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著下調(diào)小鼠肝組織中CYP2E1和p65蛋白的表達、顯著或極顯著抑制IκBα蛋白的降解,顯著或極顯著上調(diào)肝臟中Nrf2和HO-1蛋白的表達(P0.05或P0.01)。與ConA組相比,蒲公英甾醇能顯著或極顯著降低小鼠肝臟和脾臟指數(shù)、小鼠血清中ALT、AST的含量、小鼠肝組織中MDA的含量(P0.05或P0.01)、增強小鼠肝組織中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著抑制血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和IL-4的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能顯著或極顯著下調(diào)小鼠肝組織中TLR2、TLR4和p65蛋白的表達,降低Bax/Bcl-2的比值(P0.05 或P0.01)。結(jié)論:上述結(jié)果表明,蒲公英甾醇通過降低機小鼠血清中ALT、AST等酶類的活性,增加抗氧化酶的活性,減少脂質(zhì)過氧化的發(fā)生,調(diào)控NF-κB通路中關(guān)鍵因子IκBα和p65蛋白的表達,上調(diào)Nrf2和抗氧化酶HO-1來抑制氧化應(yīng)激的產(chǎn)生,對乙醇誘導(dǎo)的小鼠肝損傷起到保護作用;蒲公英甾醇通過抑制細胞因子的分泌,下調(diào)NF-κBp65蛋白和Bax蛋白的表達、上調(diào)Bcl-2蛋白的表達,降低Con A對肝細胞造成的損害和凋亡,從而對Con A所致的肝損傷起到保護作用。
【圖文】：

ｐ６５的蛋白表達的影響逡逑１．１０．１蒲公英甾醇對酒精肝小鼠肝臟中ＣＹＰ２Ｅ１蛋白表達的影響逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果（見圖３）可知：相較于空白組，ＥｔＯＨ組肝臟中ＣＹＰ２Ｅ１逡逑１８逡逑

注：與空白組比較：＃＃戶＜0．0丨；與ＥｔＯＨ組比較：７＞＜０．０５，＂戶＜０．０１。逡逑１．１０．２蒲公英甾醇對酒精肝小鼠肝臟中Ｎｒ。蛋白表達的影響逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果（見圖４）可知：相較于空白組而言，ＥｔＯＨ組肝臟中逡逑Ｎｒｆ２蛋白表達量出現(xiàn)極顯著的下降（尸＜0．0１）。與ＥｔＯＨ組相比，蒲公英甾醇高、逡逑中劑量組能極顯著上調(diào)小鼠肝臟中Ｎｒｆ２蛋白的表達（戶＜０．０１），低劑量組能顯逡逑著上調(diào)小鼠肝臟中Ｎｒｆ２蛋白的表達（Ｐ＜０．０５）。由此可知，，蒲公英甾醇通過上逡逑調(diào)酒精性肝損傷小鼠肝組織Ｎｒｆ２蛋白的表達，增加核轉(zhuǎn)入量，進而激活下游抗逡逑氧化蛋白的表達，增強機體的氧化防御系統(tǒng)，以達到保肝的目的。逡逑１９逡逑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2686080