【摘要】：疫苗(Vaccine)是用于預防傳染病的抗原制劑,在預防和治療重大傳染病以及保護人類免受侵害的過程中發(fā)揮著極為重要的作用。重組抗原或多肽的亞單位疫苗已逐漸成為一種新型的疫苗。然而,誘導有效的免疫反應仍然是重大挑戰(zhàn)。納米顆�？乖瓊鬟f系統(tǒng)被認為是一種潛在的載體系統(tǒng),可以提高亞單位疫苗效力。感染病毒等抗原后會引起淋巴細胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)升高,過高濃度會促使淋巴細胞損傷凋亡;再如過量的ROS產(chǎn)生,特別是過氧化氫產(chǎn)生過剩從而引起炎癥、觸發(fā)細胞凋亡和組織氧化損傷。利用過量的ROS引起慢性炎癥如炎癥反應、癌癥以及炎癥后持續(xù)釋放ROS濃度升高等疾病特點,設計ROS響應的聚合物材料制成納米載體,降低病灶部位ROS濃度,同時實現(xiàn)靶向遞送疫苗。因此,本論文采用簡單的兩步法合成了兩親性聚合物材料3s-PLGA-PO-PEG,該材料具有ROS響應性,探索了活性氧響應的納米粒能否有效用于疫苗遞送。此外,針對如何實現(xiàn)高效地疫苗遞送問題,利用聚乙烯亞胺(Polyethylenemine,PEI)的疫苗佐劑特性和CD44靶向受體透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)的納米運載系統(tǒng)并進行體內(nèi)外評價,為其更加合理地應用到疫苗領域提供參考。第一部分:我們設計了 3s-PLGA通過過氧草酸酯鍵連接聚乙二醇,制備了陽離子免疫佐劑PEI修飾的活性氧響應的納米疫苗。過氧化氫清除實驗驗證了材料的活性氧響應性,細胞毒實驗表明了納米粒具有良好的細胞相容性,降低了 PEI的毒性。共聚焦觀察納米粒吞噬發(fā)現(xiàn),納米粒可實現(xiàn)溶酶體逃逸,可增強MHCⅠ類途徑遞送。納米疫苗刺激小鼠骨髓來源樹突狀細胞(Bone Marrow-derived Dendritic Cells,BMDC)表面促成熟標記表達高于游離OVA組。納米粒免疫小鼠后,相比游離OVA刺激淋巴細胞增殖較多,IgG表達增高。研究結果表明活性氧納米載體系統(tǒng)具有良好的免疫刺激作用,誘導了樹突狀細胞的成熟,體內(nèi)T細胞活化以及PEI具有作為免疫佐劑的潛力。第二部分:我們將通過外表面修飾具有CD44受體靶向的透明質(zhì)酸過氧化氫敏感性的免疫遞送系統(tǒng)。通過體外釋放實驗觀察了其釋放行為,體內(nèi)示蹤觀察了其在體內(nèi)的遷移情況,并進行了體內(nèi)抗體測試和T細胞免疫應答評價。體外納米粒增強樹突狀細胞的成熟,體外促進抗原攝取和抗原提呈。體內(nèi)的免疫實驗表明納米粒有利于促進OVA特異性抗體產(chǎn)生和T細胞反應,同時伴有適度刺激的記憶T細胞的產(chǎn)生。HA修飾的ROS響應性的納米�？赡苁且环N有效的抗原傳遞系統(tǒng),促進抗原誘導免疫應答。
【圖文】：

活性氧持續(xù)生成、轉(zhuǎn)化、消耗，在各種生理過程中起關鍵性作用，與蛋白逡逑折疊、信號傳導、細胞增殖分化遷移有關；同時與防御反應，呼吸作用，氧化損害逡逑也有關（如圖１．１）。ＲＯＳ中最豐富和穩(wěn)定的形式就是過氧化氫，，產(chǎn)生于細胞膜、線逡逑粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和吞噬體。Ｌａｃｙ等人報告正常人血漿的過氧化氫范圍在１－８ｍＭ，平均逡逑３邋ｍＭ［２－３】。腸道和尿道細胞的Ｈ２Ｃｈ可達到１０0ｎＭ［４］。呼吸道可產(chǎn)生０．１－１邋ｈＭＨ２0２，逡逑但是在患肺炎疾病時會提高２０倍。末期腎病（１３邋ｎＭ）、高血壓血漿（７邋ｐＭ）、腦內(nèi)逡逑缺血再灌注（１６０邋ｐＭ）、癌癥、阿爾茲海默癥中，在ｐ－淀粉樣蛋白刺激下包括過氧逡逑化氫的ＲＯＳ濃度會增加三倍［５］。在大多數(shù)的癌細胞中過氧化氫生成率很高，通常發(fā)邐－逡逑現(xiàn)高達０．５邋ｎｍｏｌ／１０４細胞／ｈ【吹并且刺激多核白細胞１．５邋ｎｍｏｌ／１０４細胞／ｈ隊吞嗟細逡逑胞相比其他細胞會產(chǎn)生和分泌高水平的Ｈ２０２。活化的中性粒細胞生成６ｘｌ0－１４邋ｍ0ｌ逡逑Ｈ２０２／ｈ／細胞，局部生成１０－１００0ｍＭ［８］。最近有報告稱體內(nèi)樹突狀細胞（ＤＣ）最有逡逑效的抗原呈遞細胞（ＡＰＣ）中過氧化氫濃度可達１邋ｍＭ［９］�；钚匝跏且话央p刃劍。逡逑生理狀態(tài)下，低水平的活性氧是維持細胞正常功能所必需的，通過調(diào)節(jié)氧平衡參與逡逑各種信號通路，細胞通過抗氧化物質(zhì)保持ＲＯＳ的平衡；在炎癥產(chǎn)生時誘導細胞發(fā)生逡逑氧化應激

水平也無法生存，許多癌細胞通過激活ＧＳＨ或其他抗氧化分子來激活ＲＯＳ防御機逡逑制。因此X椉酉赴冢遙希油ü種瓶寡躉芰蛘咄卑邢潁牽櫻群停遙希右彩茄″義顯裥隕鄙酥琢齙牟唄裕ㄍ跡保常ｅ義希瑰義

本文編號：2685324