發(fā)布時間：2020-05-28 10:25

【摘要】：目的:在昆蟲細胞中表達2型單純皰疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外區(qū)基因,檢測其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因組為模板,PCR擴增得到gD2片段,構(gòu)建至桿狀病毒質(zhì)粒Bacmind中,轉(zhuǎn)染sf9細胞,包裝重組桿狀病毒,收集后連續(xù)感染sf9細胞,收獲第4代重組桿狀病毒(P4),通過Western blotting法鑒定蛋白表達情況,采用空斑實驗檢測重組病毒滴度,將P4代重組病毒作為種子大量感染sf9細胞,上清經(jīng)鎳柱親和層析進行純化,將純化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2組),以PBS作為陰性對照(PBS組),ELISA檢測小鼠血清中g(shù)D2特異性IgG滴度。結(jié)果:PCR鑒定和DNA測序,重組表達質(zhì)粒gD2-Bacmind構(gòu)建正確,空斑實驗檢測重組病毒滴度為2.0×109 pfu·mL-1,純化的gD2重組蛋白在相對分子質(zhì)量37 000處出現(xiàn)目標條帶,純度達90%以上。第6周gD2組小鼠免疫血清中g(shù)D2特異性IgG抗體滴度Log10平均值達到4.34,與PBS組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結(jié)論:利用昆蟲-桿狀病毒表達系統(tǒng)表達的gD2胞外區(qū)蛋白具有良好的免疫原性,可作為HSV-2疫苗的候選。

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