【摘要】：目的探究CXCL12對人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力、干性及免疫調(diào)節(jié)的影響。方法1.人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定:在鼻內(nèi)鏡直視下,夾取中鼻甲后方正常鼻黏膜組織,采用組織貼壁法培養(yǎng)嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞;利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的表面標(biāo)記物,免疫熒光檢測Nestin及STRO-1,對其進行鑒定。2.培養(yǎng)至P3代,將鼻黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞消化下來,并傳代培養(yǎng)于6孔板,待細(xì)胞融合度接近80%,隨機分成2組,即對照組和實驗組,對照組用D/F-12加10%胎牛血清培養(yǎng),實驗組在此基礎(chǔ)上另添加100ng/mL的CXCL12重組蛋白,放入37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的C02、飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3.在對照組和實驗組6孔板中長滿的細(xì)胞上用10μL移液槍頭人為制造一條粗細(xì)均勻的劃痕,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),24小時、48小時后分別對劃痕區(qū)域進行顯微鏡下拍照。觀察其劃痕融合的情況。4.將對照組和實驗組的細(xì)胞培養(yǎng)48小時后,消化下來,收集細(xì)胞并提取總蛋白,分別進行CXCR4(CXCL12的受體)和Nestin的Western Blotting實驗,檢測對照組和實驗組中這2種蛋白的表達差異。5.在CXCL12處理48小時后,分別收集對照組和實驗組的上清,通過ELISA試劑盒檢測兩組細(xì)胞分泌的IL-6含量差異。結(jié)果1.培養(yǎng)的細(xì)胞呈紡錘形或長條形,也可有數(shù)個分支,貼壁生長,融合度高時呈旋渦狀或平行生長,CD34、CD45表達陰性,CD73、CD90、CD105表達陽性,且細(xì)胞純度達到97%以上,此外,免疫熒光顯示,細(xì)胞的Nestin和STRO-1表達陽性,符合間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。2.在細(xì)胞的劃痕實驗中,經(jīng)過CXCL12的處理,實驗組劃痕融合速度較對照組快。3.在CXCR4的Western Blotting實驗中,實驗組較對照組表達量上調(diào),經(jīng)灰度分析,P0.01,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。4.在Nestin的Western Blotting實驗中,實驗組較對照組表達量下調(diào),經(jīng)灰度分析,P0.01,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。5.在IL-6的ELISA實驗中,實驗組較對照組分泌量明顯下降,P0.01,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論1.CXCL12可以直接提高嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞(OM-MSCs)的遷移能力,并且通過使OM-MSCs中的CXCR4表達上調(diào)進一步提高OM-MSCs的遷移能力。2.CXCL12通過下調(diào)OM-MSCs中Nestin的表達,降低了OM-MSCs的干性。3.CXCL12 通過下調(diào) OM-MSCs 分泌的 IL-6,改變了 OM-MSCs免疫調(diào)節(jié)的作用。
【圖文】：

ＳＴＲＯ－１的表達及間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物鑒定逡逑�。校炒诵狃つらg充質(zhì)干細(xì)胞進行免疫熒光檢測，，培養(yǎng)的細(xì)胞逡逑呈紡錘形或長條形，貼壁生長，ＳＴＲ０－１和Ｎｅｓｔｉｎ表達陽性（圖３－１邋）。逡逑｜邋■■逡逑圖３－１人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征及Ｎｅｓｔｉｎ和ＳＴＲＯ－１的免疫熒光實驗逡逑Ａ．人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞：左邊黑色區(qū)域為嗅黏膜組織塊，右邊旋渦狀生長的細(xì)胞為人嗅逡逑黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞0４０）；邋Ｂ．ＳＴＲＯ－１染色：紅色胞體部分顯示為標(biāo)記的ＳＴＲＯ－丨，藍(lán)色為細(xì)逡逑胞核ＤＡＰＩ染色；Ｃ．邋Ｎｅｓｔｉｎ染色：綠色胞體部分顯示為標(biāo)記的Ｎｅｓｔｉｎ，藍(lán)色為細(xì)胞核ＤＡＰＩ逡逑染色。逡逑經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，ＣＤ３４、ＣＤ４５表達陰性，ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５逡逑表達陽性，且細(xì)胞純度達到９７％以上（圖３－２），符合間充質(zhì)干細(xì)胞的逡逑鑒定標(biāo)準(zhǔn)。逡逑１８逡逑

部分進行拍照。結(jié)果顯示，２４小時、４８小時實驗組的劃痕融合度均逡逑較對照組高，證明實驗組嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力在ＣＸＣＬ１２逡逑的作用下提高了（圖３－３）。逡逑１９逡逑
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2

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本文編號：2679855