【摘要】：單純皰疹病毒I型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染是人類面臨的重要健康問題。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,目前67%的50歲以下人口感染HSV-1病毒。HSV-1感染會引起口唇皰疹、皰疹性腦炎等疾病,且新生兒和免疫缺陷病人感染后發(fā)病率和死亡率增加。目前已有幾種抗HSV-1藥物被批準用于臨床治療,如西多福韋,伐昔洛韋、噴昔洛韋和泛昔洛韋等。但這些藥物均只能是消除癥狀、緩解疼痛,并不能清除潛伏的病毒或者防止疾病復(fù)發(fā)。同時,多個HSV-1疫苗的臨床研究均未提供具有應(yīng)用意義的結(jié)果。因此,為HSV-1疫苗及更高效治療藥物的開發(fā)提供更多的理論依據(jù),我們需更深入的探究HSV-1感染機理。HSV-1通過感染人體上皮細胞進入機體,目前對于HSV-1在最初感染部位的免疫反應(yīng)機理并不完全清楚。之前的的研究表明,在上皮及粘膜組織中存在一類天然淋巴細胞(Innate lymphoid cells,ILCs),其可被病原體感染的上皮細胞可產(chǎn)生一些天然免疫信號分子激活,并積極參與天然免疫反應(yīng)及適應(yīng)性免疫反應(yīng)的形成。本文主要從探索HSV-1感染上皮組織后機體免疫系統(tǒng)反應(yīng)特征及其對皮膚粘膜組織中的天然免疫細胞的激活機制出發(fā),深入了解HSV-1與免疫系統(tǒng)相互作用。我們首先分析了 HSV-1對呼吸道上皮細胞的感染特征,發(fā)現(xiàn)當HSV-1感染人支氣管上皮細胞16HBE后,細胞內(nèi)與天然免疫反應(yīng)相關(guān)的非經(jīng)典途徑的NF-kB通路被激活,表達具有募集及活化天然淋巴細胞(ILCs)的信號分子,如IL-33、IL-25。進一步利用小鼠模型的研究表明,相比于對照組與肌肉感染組,皮膚粘膜感染組小鼠在病毒感染后各個組織中尤其是神經(jīng)組織中病毒載量更高,同時病毒感染導(dǎo)致上皮組織損傷,且上皮組織中與ILCs募集、激活相關(guān)的天然免疫信號分子的上調(diào)。HSV-1在破壞呼吸道粘膜上皮屏障之后進入粘膜下層與ILCs出現(xiàn)共定位。一系列結(jié)果表明HSV-1感染上皮組織會導(dǎo)致其出現(xiàn)組織損傷并誘導(dǎo)其產(chǎn)生募集及激活I(lǐng)LCs的細胞因子,隨后病毒進一步感染分布于上皮組織中的ILCs。我們進一步利用HSV-1分別感染ILCs細胞和KMB17細胞,結(jié)果表明HSV-1能夠在ILCs中增殖,但增殖率較上皮細胞KMB17中的低。同時,ILCs在HSV-1感染后出現(xiàn)了細胞基因表達的變化,如皰疹病毒侵入介質(zhì)(Herpes virus entry mediator,HVEM)基因表達上升。我們進一步對ILCs對來源于同一供體的T細胞為中心的特異型應(yīng)答反應(yīng)的調(diào)控做了分析。ILCs具有非特異性刺激T細胞增殖的能力,HSV-1對ILCs的作用又可抑制ILCs本身所具有的刺激T細胞非特異性增殖的能力。這可能是HSV-1的gD蛋白與HVEM結(jié)合可以阻斷HVEM與T淋巴細胞表面的LIGHT結(jié)合,從而抑制了 T淋巴細胞的活化與增殖。以上結(jié)果表明,HSV-1感染上皮組織后可誘導(dǎo)ILCs激活,隨后ILCs被病毒感染并抑制T淋巴細胞發(fā)揮免疫應(yīng)答。
【圖文】：

」＞二邋４，逡逑圖１：邋ＩＬＣｓ參與ＨＳＶ－１誘導(dǎo)Ｔ細胞免疫反應(yīng)體外實驗設(shè)計。逡逑本部分實驗過程見上圖１。逡逑我們利用分離的包括ＩＬＣｓ群體的細胞，首先觀察ＨＳＶ－１在ＩＬＣｓ中的增殖情況。逡逑其過程為：從以往的ＨＳＶ－１感染并己出現(xiàn)病變的１６ＨＢＥ細胞中收獲ＨＳＶ－１病毒經(jīng)逡逑蝕斑滴定法測定病毒滴度為８．５＊１０２ＰＦＵ／ｍＬ，加入１００Ｗ到１＊１０５細胞／孔培養(yǎng)的逡逑ＩＬＣｓ邋（Ｌｉｎ－ＣＤ４５＋）細胞中，同時，設(shè)置同樣病毒滴度感染的ＫＭＢ－１７細胞作為陽逡逑性對照，１２ｈ后，收集細胞懸液１００｜ｉｌ，提取病毒ＤＮＡ，測定病毒載量；逡逑隨后我們對感染了病毒的ＩＬＣｓ邋（Ｌｉｎ＿ＣＤ４５＋）細胞懸液和ＫＭＢ１７細胞懸液所提逡逑取的ＲＮＡ中相關(guān)天然免疫信號分子ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬ、ＴＮＦ－ａ進行定量分析。具體逡逑過程為：病毒感染１２ｈ后，收�。桑蹋茫罂瞻捉M、ＩＬＣｓ＋ＨＳＶ－１感染組、ＫＭＢ１７空白逡逑組、ＫＭＢ１７＋ＨＳＶ－１感染組細胞，提取ＲＮＡ，，Ｑ－ＰＣＲ檢測各組細胞基因表達變化。逡逑為進一步了解ＨＳＶ－１對ＬｉｒｒＣＤ４５＋細胞即對ＩＬＣｓ的作用是否對其免疫學(xué)功能有逡逑所影響，我們使用ＩＦＮ－ｙ特異性的Ｔ細胞增殖實驗，觀察了邋ＩＬＣｓ在ＨＳＶ－１作用后逡逑對Ｔ細胞增殖反應(yīng)的影響效果。實驗流程如下：在ＩＦＮ－ｙ特異性的Ｅｌｉｓｐｏｔ板中

如基因邋ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＡ、ＯＸ４０Ｌ、ＲＡＮＫＬ、ＴＮＦ－ａ等均在病毒感染逡逑后表達水平上調(diào)（圖１）；且１６ＨＢＥ細胞在病毒感染后，細胞內(nèi)具有募集及活化天逡逑然淋巴細胞ＵＬＣｓ）的信號分子（如ＩＬ－３３、ＩＬ－２５）基因表達水平上調(diào)（圖２）。逡逑這表明ＨＳＶ－１病毒感染上皮細胞后可能通過上調(diào)ＴＮＦＲ超家族成員基因表達水平，逡逑ＴＮＦＲ超家族成員基因表達水平上調(diào)可能會使ＮＦ－ｋＢ通路激活使上皮細胞產(chǎn)生具有逡逑募集及活化天然淋巴細胞（ＩＬＣｓ）的信號分子。逡逑１０００００－１逡逑…邐＊１＊＊邐畫Ｏｈ逡逑Ｉ邋１０００°－邋ｉｉ＇－Ｊ邐Ｔ邐ｉｌ．ｊ邋．．．邋Ｃ３邋１２ｈ逡逑！邐１00°－邐ｍ邐．．．．邐ｉ邐ｉｉ邐ｉｉｉ邐ｙ邐－－逡逑Ｉ邐：：邐�。戾澹蛇姡椋欤爝姡辏爝姡瓦姡蛇姡�！邋Ｉ邐！邐＾４８ｈ逡逑圖１：邋１６ＨＢＥ細胞ＨＳＶ－１病毒感染后ＴＮＦＲ超家族成員基因表達水平分析。逡逑＊＊＊＊Ｐ＜0．０００１，邋＊＊叩＜０．００１，＊＊Ｐ＜０．０１，叩＜０．０５（與未感染組邋１６ＨＢＥ邋細胞相比）。逡逑３８逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392

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本文編號：2676722