【摘要】：第一部分產(chǎn)褥期抑郁模型的建立[目的]探究產(chǎn)褥期抑郁(Postpartum Depression,PPD)模型的最佳建立方法,為產(chǎn)褥期抑郁癥的發(fā)病機(jī)制及治療的研究提供科學(xué)有效的動物模型。[方法]成年雌性ICR妊娠(Gestation,G)小鼠根據(jù)不同的干預(yù)時間段隨機(jī)分成六組,每個時間段再分為給藥組和對照組,給藥組分別于妊娠第1天至妊娠第10天(G1-G10)、妊娠第1天至妊娠第21天(G1-G21)、妊娠第1天至產(chǎn)后(Postpartum,P)第 21 天(G1-P21)、妊娠第 10 天至妊娠第 21 天(G10-G21)、妊娠第10天至產(chǎn)后第21天(G10-P21)和產(chǎn)后第1天至產(chǎn)后第21天(P1-P21)連續(xù)皮下注射皮質(zhì)酮構(gòu)建產(chǎn)褥期抑郁癥模型,對照組分別于相應(yīng)時期注射等量的芝麻油,模型建立完成后分別進(jìn)行曠場實驗、高架十字迷宮實驗、強(qiáng)迫游泳實驗、懸尾實驗等行為學(xué)實驗驗證產(chǎn)褥期抑郁癥模型的構(gòu)建效果。[結(jié)果]行為學(xué)實驗結(jié)果顯示:強(qiáng)迫游泳實驗中G1-G21、G1-P21、G10-G21和G10-P21皮下注射皮質(zhì)酮組小鼠的靜止不動時間明顯比對照組增加;懸尾實驗中,G1-G21、G1-P21和G10-P21皮下注射皮質(zhì)酮組小鼠的靜止不動時間明顯比對照組增加;高架十字迷宮實驗中,G10-G21皮質(zhì)酮注射組小鼠在開放臂的次數(shù)比對照組增加,G1-P21皮質(zhì)酮注射組小鼠進(jìn)入開放臂的次數(shù)比對照組小;曠場實驗中,G1-G10皮質(zhì)酮注射組小鼠運(yùn)動的總距離以及在中間區(qū)域活動的次數(shù)都明顯大于對照組小鼠,G10-G21皮質(zhì)酮注射組小鼠運(yùn)動的總距離明顯大于對照組小鼠,P1-P21皮質(zhì)酮注射組小鼠在中心區(qū)域活動的頻率明顯低于對照組。據(jù)實驗統(tǒng)計,在妊娠前期(即G1-G10)給予小鼠高劑量皮質(zhì)酮可導(dǎo)致較高的流產(chǎn)率和母鼠的死亡率。[結(jié)論]在G1-G21、G1-P21、G10-G21和G10-P21等四個時間段給予連續(xù)皮下注射皮質(zhì)酮均能誘導(dǎo)抑郁樣行為的產(chǎn)生,因妊娠前期給藥可導(dǎo)致母鼠高流產(chǎn)率和死亡率,所以,G10-G21和G10-P21可作為產(chǎn)褥期抑郁癥模型構(gòu)建的最佳時間靶點;在G1-P21和P1-P21兩個時間段給予連續(xù)皮下注射皮質(zhì)酮均能誘導(dǎo)焦慮樣行為的發(fā)生,除去妊娠前期給藥時間段,P1-P21可作為產(chǎn)褥期焦慮模型構(gòu)建的最佳時間靶點。第二部分白藜蘆醇對抑郁癥的治療干預(yù)[目的]探索一種多酚類復(fù)合物—白藜蘆醇拮抗抑郁癥模型小鼠伴發(fā)的認(rèn)知功能障礙及其可能的機(jī)制。[方法]成年雄性C57BL/6J小鼠,隨機(jī)分成四組,分別為對照組(Control)、模型組(Model)、模型+白藜蘆醇組(Model+ RSV)、模型+煙酰胺+白藜蘆醇組(Model+ NA + RSV),除對照組外,其余三組連續(xù)皮下注射皮質(zhì)酮21天,構(gòu)建抑郁癥動物模型,對照組給予皮下注射等量的生理鹽水,注射完成后行糖水偏好實驗,驗證模型的建立情況,模型建立成功后,模型+白藜蘆醇組給予連續(xù)強(qiáng)飼白藜蘆醇21天,模型+煙酰胺+白藜蘆醇組連續(xù)強(qiáng)飼白藜蘆醇的同時給予腹腔注射煙酰胺21天,應(yīng)用新物體識別實驗、新位置識別實驗、水迷宮實驗等行為學(xué)實驗檢測小鼠的認(rèn)知功能。行為學(xué)結(jié)束后處死小鼠,取腦中海馬組織,分別行RT-PCR、western bolting檢測海馬中沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶，(SIRT1),過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1α(PGC-1α)及小清蛋白(PV)的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)情況。[結(jié)果]小鼠連續(xù)皮下注射皮質(zhì)酮誘導(dǎo)抑郁癥模型完成后,進(jìn)行糖水偏好實驗驗證抑郁模型構(gòu)建情況,結(jié)果顯示模型組小鼠對糖水的消耗百分比明顯大于模型組小鼠;繼續(xù)給予白藜蘆醇和煙酰胺后,進(jìn)行行為學(xué)實驗,在新物體識別實驗中,模型組小鼠對新物體的探索次數(shù)比明顯低于對照組,而模型+白藜蘆醇組小鼠對新物體的探索次數(shù)比明顯大于模型組;在新位置識別實驗中,模型組小鼠對新位置的探索次數(shù)比、探索時間比、探索距離比以及新位置的站立次數(shù)比都明顯低于對照組,而模型+白藜蘆醇組能夠逆轉(zhuǎn)模型組小鼠對新位置探索次數(shù)比、探索時間比、探索距離比以及新位置的站立次數(shù)比的減低,事先給予煙酰胺的模型+煙酰胺+白藜蘆醇組則不能逆轉(zhuǎn)抑郁模型小鼠對新位置探索次數(shù)比、探索時間比、探索距離比以及新位置的站立次數(shù)比的降低;在水迷宮實驗中,模型組小鼠找到平臺的平均時間、平均運(yùn)動距離明顯大于對照組,而模型+白藜蘆醇組小鼠則能逆轉(zhuǎn)模型組小鼠尋找平臺平均時間、平均運(yùn)動距離的增加,事先給予煙酰胺的模型+煙酰胺+白藜蘆醇組則不能逆轉(zhuǎn)模型組尋找平臺時間的增加;在水迷宮探測實驗中,模型組小鼠在平臺所在的目標(biāo)象限探索的次數(shù)明顯低于對照組,而給予白藜蘆醇后,抑郁模型小鼠顯著增加了在平臺所在的目標(biāo)象限探索的次數(shù);模型組小鼠顯著降低了海馬組織中SIRT1,PGC-1α及PV蛋白的表達(dá),而白藜蘆醇顯著增加了抑郁模型伴隨的SIRT1,PGC-1α及PV蛋白表達(dá)水平,煙酰胺顯著降低了白藜蘆醇誘導(dǎo)的SIRT1及PGC-1α蛋白表達(dá)的增加;模型組小鼠顯著降低了海馬組織中SIRT1,PGC-1α及PV的轉(zhuǎn)錄水平,而白藜蘆醇顯著逆轉(zhuǎn)了抑郁模型伴隨的SIRT1,PGC-1α及PV轉(zhuǎn)錄水平降低,煙酰胺顯著降低了白藜蘆醇誘導(dǎo)的SIRT1及PGC-1α轉(zhuǎn)錄水平的增加。[結(jié)論]白藜蘆醇能夠顯著改善抑郁模型小鼠認(rèn)知功能的損傷,該行為學(xué)表現(xiàn)可能是通過活化SIRT1/PGC-1 α信號通路進(jìn)而增加PV的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)而實現(xiàn)的。
【圖文】：

逡逑圖１．１曠場箱示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．１邋Ｔｈｅ邋ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋Ｏｐｅｎ邋Ｆｉｅｌｄ邋ｂｏｘ逡逑（２）高架十字迷宮實驗逡逑該實驗是公認(rèn)的焦慮研究模型，小鼠會好奇地探索高懸的開放臂，同時它們逡逑又有嗜暗的天性（即躲避在閉合臂內(nèi)），，小鼠在兩者之間的矛盾沖突狀態(tài)下從而逡逑產(chǎn)生焦慮樣心理［１７］。高架十字迷宮由十字迷宮和立柱兩部分組成。十字迷宮部分逡逑由兩個對立的長寬分別為３０邋ｃｍ邋ｘ邋１0邋ｃｍ的開放臂與兩個對立的長ｘ寬為３０邋ｃｍ邋ｘ逡逑１０ｃｍ的閉合臂以及連接開放臂和閉合臂的中央?yún)^(qū)域構(gòu)成，中央平臺的大小是逡逑１０邋ｃｍ邋ｘ邋ｌ0ｃｍ，閉合臂除了與中央平臺相鄰的一面外，其余三面均由高為２０邋ｃｍ逡逑不透光的木板所圍成，以形成暗區(qū)。支撐十字迷宮部分的支柱高５０邋ｃｍ。（見圖逡逑１．２）逡逑圖１．２高架十字迷[疽饌煎義希疲椋紓酰潁邋澹保插澹裕瑁邋澹螅悖

本文編號：2675068