【摘要】：研究背景抑郁癥是當(dāng)今社會面臨的一項重大的醫(yī)療難題,已經(jīng)成為當(dāng)代社會最嚴(yán)重的社會問題。挑戰(zhàn)抑郁癥這一高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率的精神疾患,是全人類醫(yī)學(xué)研究的熱點。。抑郁癥發(fā)病機(jī)制及治療效應(yīng)機(jī)制的研究,主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)元營養(yǎng)與凋亡、細(xì)胞因子學(xué)說,以及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。JNK信號通路屬于MAPK大家族,JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要介導(dǎo)細(xì)胞外的信號,傳導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi),以達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞增殖分化、凋亡的作用。近年來研究腦區(qū)主要集中在海馬、前額葉皮質(zhì)、扣帶回、杏仁核、外側(cè)韁核等區(qū)域本研究探討針刺對慢性不可預(yù)知應(yīng)激(CUMS)模型大鼠前額葉JNK信號通路的影響。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,繼續(xù)深入探討針刺干預(yù)對JNK通路中JNK、c-jun、p-c-jun三個密切關(guān)鍵指標(biāo)的影響。研究目的本研究利用慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型激活JNK信號通路,觀察CUMS大鼠前額葉皮質(zhì)JNK信號通路上JNK、c-jun、p-c-jun蛋白表達(dá)水平的改變,對課題組前期研究推斷進(jìn)行驗證的同時,繼續(xù)深入探討,以期完善針刺通過調(diào)節(jié)JNK信號通路的抗抑郁機(jī)制。研究方法1.動物模型選擇國際公認(rèn)的CUMS造模方法:除空白組外,其余大鼠均采用國際公認(rèn)的CMUS造模方法:應(yīng)用7種不可預(yù)知刺激方法(震蕩30min、夜間光照12h、束縛2h、夾尾24h、斷食24h、斷水24h、潮濕墊料24h),每天選中1種方法,連續(xù)刺激21天,平均每種刺激各使用3次。2.干預(yù)方法:針刺干預(yù)選取“內(nèi)關(guān)”、“三陰交”穴,進(jìn)針后捻轉(zhuǎn)2min,頻率為2次/s,針刺深度為0.5～1cm,留針1Omin,每日一次;氟西汀用蒸餾水配成0.2mg/ml的混懸液,以1.8mg/kg灌胃給藥。以上操作時注意盡量減少額外刺激。3.將48只SD大鼠,隨機(jī)分為8組:空白組、模型組、SP(SP600125,以下簡稱SP)組、模型+DMSO組(以下簡稱DMSO組)、模型+氟西汀組、針刺組、模型組+氟西汀+SP組、模型組+針刺+SP組,每組6只。采用慢性不可預(yù)知應(yīng)激(CUMS)法造模,采用側(cè)腦室注射技術(shù)側(cè)腦室注射SP600125溶液10 μm。針刺穴位選擇“內(nèi)關(guān)”、“三陰交”,每日于造模前干預(yù),每次20min;陽性對照藥采用氟西汀1.8mg/Kg灌胃,每日1次。采用曠場實驗和體質(zhì)量來評價實驗的行為學(xué),Western-blot法檢測大鼠前額葉JNK、c-jun、p-c-jun蛋白的表達(dá)。4.處理方法空白組不給予任何刺激,正常群居飼養(yǎng)。其余各組均接受21天慢性應(yīng)激并單籠飼養(yǎng)。同時,針刺組在每天造模前30mirn進(jìn)行針刺治療;氟西汀組每天應(yīng)激前30min進(jìn)行氟西汀灌胃給藥;DMSO組在應(yīng)激前1h給于1Oul/1dDMSO側(cè)腦室注射;SP組在應(yīng)激前1h給予10ul/1d阻斷劑SP600125稀釋液側(cè)腦室注射;氟西汀+SP組、針刺+SP組在應(yīng)激前1h給予10ul/1d阻斷劑SP600125稀釋液側(cè)腦室注射,然后在應(yīng)急前30min分別給予針刺干預(yù)和氟西汀灌胃給藥。5.檢測方法采用體質(zhì)量、曠場實驗評價抑郁模型大鼠行為學(xué)的改變,采用Western Blot法檢測前額葉皮質(zhì)中JNK、c-jun、p-c-jun的蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果觀察大鼠的行為學(xué)和檢測前額葉皮質(zhì)中JNK、c-jun、p-c-jun的表達(dá)。1.行為學(xué)檢測:1.1體質(zhì)量實驗0天,各組之間沒有顯著差異(P0.05)。實驗21天,與空白組比較,模型組、DMSO組均下降(P0.01),氟西汀+SP組、針刺+SP組沒有顯著差異(P0.05)。相較于模型組,SP組、DMSO組沒有顯著改變,針刺組、氟西汀組均顯著上升(P0.01))。與DMSO組比較,SP組、氟西汀+SP組、針刺+SP組沒有顯著改變(P0.05)。與氟西汀組比較,氟西汀+SP組顯著下降(P0.01);與針刺組比較,針刺+SP組顯著下降(P0.01)。1.2曠場實驗(水平)實驗0天,各組之間沒有顯著差異(P0.05)。實驗21天,與空白組比較,各組均下降(P0.01)。與模型組比較,SP組、氟西汀組沒有顯著差異(P0.05),針刺組顯著上升(P0.01)。與DMSO組比較,SP組、氟西汀組沒有顯著差異(P0.05),針刺組顯著上升(P0.01)。與SP組比較,氟西汀組、針刺+SP組沒有顯著差異(P0.05),氟西汀+SP組、針刺組顯著上升(P0.01)。與氟西汀組比較,氟西汀+SP組顯著上升(P0.05);與針刺組比較,針刺+SP組顯著下降(P0.05)。1.3曠場實驗(豎直)實驗0天,各組之間沒有顯著差異(P0.05)。實驗21天,與空白組比較,模型各組均顯著下降(P0.01)。與模型組比較,氟西汀組、SP組沒有顯著差異(P0.05),針刺組顯著上升(P0.01)。與DMSO組比較,SP組、針刺+SP組、氟西汀+SP組沒有顯著差異(P0.05)。與氟西汀組比較,氟西汀+SP組沒有顯著差異(P0.05);與針刺組比較,針刺+SP組沒有顯著差異(P0.05)。2.前額葉皮質(zhì)中JNK、c-jun、p-c-jun相關(guān)蛋白的表達(dá)JNK蛋白的表達(dá)與空白組相比,模型組的JNK表達(dá)明顯上升(P0.001);與模型組相比,SP組、氟西汀組JNK蛋白表達(dá)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),針刺組顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與DMSO組比較,SP組、氟西汀+SP組JNK表達(dá)沒有顯著差異(P0.05),針刺+SP 組 JNK 顯著下降(P0.01)c-jun蛋白的表達(dá)與空白組相比,模型組的c-jun表達(dá)明顯上升(P0.001);與模型組相比,SP組、氟西汀組c-jun蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05),針刺組顯著下降(P0.01);與DMSO組比較,SP組、氟西汀+SP組c-jun表達(dá)沒有顯著差異(P0.05),針刺+SP組顯著下降(P0.05)。p-c-jun蛋白的表達(dá)與空白組相比,模型組的p-c-jun表達(dá)明顯上升(P0.001);針刺、針刺+SP組表達(dá)沒有顯著差異。與模型組相比,SP組有下降趨勢(P=0.08)氟西汀組、針刺組顯著下降p-c-jun蛋白表達(dá)顯著下降(P0.01;P0.001)。與DMSO組比較,SP組p-c-jun表達(dá)沒有顯著差異(P0.05),氟西汀+SP組、針刺+SP組p-c-jun顯著下降(P0.01;P0.001)結(jié)論1.CUMS模型是一個可靠的慢性模型,本實驗中反映了抑郁核心癥狀的兩項行為學(xué)指標(biāo):體質(zhì)量和曠場行為都顯著下降,提示造模成功。2.WB檢測結(jié)果提示:慢性不可預(yù)知應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)誘導(dǎo)JNK、c-jun、p-c-jun整體上調(diào),提示CUMS模型激活了 JNK信號通路。3.針刺和氟西汀干預(yù)可以明顯改善CUMS大鼠的抑郁樣行為。4.WB檢測結(jié)果提示:造模后各干預(yù)組的JNK、c-jun、p-c-jun不同程度下調(diào),說明慢性不可預(yù)知應(yīng)激狀態(tài)下JNK信號通路表達(dá)的異常可被針刺或氟西汀調(diào)節(jié)。5.JNK信號通路阻斷劑SP600125對JNK信號通路的阻斷作用發(fā)生在JNK磷酸化之后,位于磷酸化上游的JNK未受到SP600125的影響;氟西汀同樣未見作用于JNK蛋白而是干預(yù)了下游的c-jun和p-c-jun的表達(dá)。針刺干預(yù)對JNK信號通路上的JNK、c-Jun、p-c-Jun全程發(fā)揮下調(diào)作用。6.SP600125、氟西汀和針刺在抑制JNK信號通路磷酸化水平上具有協(xié)同作用。創(chuàng)新點:1.在本團(tuán)隊前期工作的基礎(chǔ)上,證實了 CUMS大鼠JNK信號通路JNK、c-jun、p-c-jun表達(dá)的異常可被針刺調(diào)節(jié)。2.本研究結(jié)果證實:針刺與氟西汀對抑郁模型JNK信號通路作用的差異性表達(dá)在JNK磷酸化之后,針刺對JNK信號通路的干預(yù)節(jié)點位于氟西汀干預(yù)的上游。3.本研究結(jié)果證實:SP600125、氟西汀和針刺在抑制JNK信號通路磷酸化水平上具有協(xié)同作用,這種作用體現(xiàn)在行為學(xué)和信號通路指標(biāo)上。
【圖文】：

ＤＭＳＯ組比較，ＳＰ組、氟西汀＋ＳＰＳ１、針刺＋ＳＰ組沒有顯著改變（Ｐ＞０．０５）。與氟西汀逡逑組比較，鋱兩�。樱薪M顯著下降（Ｐ＜０．０１）；與針刺組比較，針刺＋ＳＰ組顯著下降（Ｐ＜０．０１邋）。逡逑見圖１。逡逑０天和２１天體質(zhì)量（ｇ）逡逑Ｂｏｄｙ邋Ｗｅｉｇｈｔ（ｇ）逡逑４００邋－Ｉ逡逑▲▲邋▲▲逡逑３００．邐：邐＝由桰南逡逑－Ｉ邋ＩｈＩＩｉｉＩ邐ｌｌｌｌｉＭｌｉｉｌ逡逑０天均值邐２１天逡逑□空白組ａ模型組Ｈ邋ＤＭＳＯ組曰Ｓ丨５組口氟西汀組□氟西汀＋ＳＰ組Ｓ針刺組Ｅ針刺＋Ｓ丨５組逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｍｏｄｅｌ邐Ｉ＇ｌｘ邐Ｉ：ｌｘ＋ＳＰ邐Ａｃｕ邐Ａｃｕ＋ＳＰ逡逑圖１各組大鼠實驗０天和２１天體質(zhì)量的對比（［±ｓ，６只大鼠／組）逡逑＊＊ｐ＜ｏ．ｏｉ與空白組比較；ｈｐｃａｏｉ與模型組比較。逡逑２．２各組大鼠曠場實驗（水１＇：）逡逑實驗０天，各組之Ｎ沒奮顯著差異（Ｐ＞0．0５）。實驗２１天，與空白組比較，各組逡逑均下降（Ｐ＜０．０１）。與模型組比較，ＳＰ組、氟西汀組沒有顯著差異（Ｐ＞０．０５），針刺組逡逑品著上升（Ｐ＜０．０１）。與ＤＭＳＯ組比較，ＳＰ組、氟西汀組沒有顯著差異（Ｐ＞０．０５），針逡逑刺組顯著上升（Ｐ＜０．０１）。４邋ＳＰ組比較，，氟西汀組、針刺＋ＳＰ組沒有顯著差異逡逑（Ｐ＞０．０５），氟西�。樱薪M、針刺組顯著上升（Ｐ＜０．０１）。與氟西汀組比較，氟西�。樱绣义希常峰澹义�

逡逑組顯著上升（Ｐ＜０．０５）；與針刺組比較，針刺＋ＳＰ組顯著下降（Ｐ＜０．０５）。見圖２。逡逑各組大鼠曠場試驗水平運動得分逡逑１00邋］邐Ｔｈｅ邋ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ邋ｍｏｔｉｏｎ邋ｓｃｏｒｅｓ逡逑８０邋－邋ｔ邐丁邋Ｔ逡逑４0■邋ｓ邋途}插澹徨濉濉義希疤戾危玻碧戾義峽誑瞻鬃椋履Ｐ妥椋猓洌恚螅鎰椋攏迂咀椋胺魍∽椋胺魍。櫻兇椋嵴氪套榭謖氪蹋櫻兇殄義希茫錚睿簦潁錚戾澹停錚洌澹戾危疲椋危疲歟櫻繡危粒悖蹂澹粒悖酰櫻繡義賢跡哺髯櫬笫罌醭∈笛樗皆碩梅值謀冉希

本文編號：2669421