【摘要】：糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)已經(jīng)逐漸成為終末期腎臟病(End-Stage Renal Disease,ESRD)最常見的病因,同時(shí)也是最難控制的糖尿病并發(fā)癥。DN發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,糖代謝異常、腎臟血流動(dòng)力學(xué)改變、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及遺傳易感性等多重因素都有參與DN的發(fā)病。目前主流觀點(diǎn)認(rèn)為DN是一種足細(xì)胞病。超過20%足細(xì)胞丟失可導(dǎo)致不可逆的腎小球損傷,引起進(jìn)展性蛋白尿,并逐漸出現(xiàn)腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化,最終引起終末期腎臟病。近年來隨著對(duì)DN發(fā)病機(jī)制的探索,越來越多的研究強(qiáng)調(diào)了炎癥在DN發(fā)病中的關(guān)鍵作用。更重要的是,炎性因子可通過不同的作用機(jī)制損害腎臟結(jié)構(gòu)及功能。其中炎性因子損傷足細(xì)胞的現(xiàn)象日益受到關(guān)注。MicroRNA是一種長度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈微小RNA(MicroRNA,miRNA),在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)。miRNA在DN發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵作用已經(jīng)得到廣泛認(rèn)識(shí),為DN的診斷和防治提供了新的靶點(diǎn)。改變介導(dǎo)DN病變的特定miRNA表達(dá)可能是防治DN發(fā)生發(fā)展的有效方法。我們團(tuán)隊(duì)前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-138在DN患者體內(nèi)表達(dá)升高,而目前尚未見miR-138參與DN發(fā)病機(jī)制的報(bào)道。目的:1.明確miR-138在db/db小鼠腎組織中的表達(dá)及其與尿蛋白的關(guān)系。2.在db/db小鼠腎組織中驗(yàn)證miR-138能否通過調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá)誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷。3.在db/db小鼠腎組織中探討miR-138 siRNA對(duì)足細(xì)胞損傷的緩解作用。方法:5周齡實(shí)驗(yàn)小鼠根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容隨機(jī)分為以下四組:(1)db/m組,12只db/m小鼠,不予任何干預(yù);(2)db/db組,20只db/db小鼠,分別于10周齡和14周齡處死小鼠后給剩余小鼠尾靜脈注射與慢病毒等體積生理鹽水;(3)vehicle組,20只db/db小鼠,分別于10周齡和14周齡處死小鼠后給剩余小鼠尾靜脈注射miR-138無關(guān)序列慢病毒3×10~7 TU/只;(4)si-miR組,20只db/db小鼠,分別于10周齡和14周齡處死小鼠后給剩余小鼠尾靜脈注射miR-138 siRNA慢病毒3×10~7 TU/只。從6周齡起定期檢測小鼠血糖和體重,并收集血尿標(biāo)本檢測尿蛋白和血肌酐。分別于10周齡、14周齡、18周齡和22周齡處死小鼠,收集相應(yīng)血、尿和腎組織標(biāo)本標(biāo)本,行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR,q RT-PCR)檢測miR-138的表達(dá)水平,采用western blotting檢測nephrin、podocin、desmin、IL-6和IL-18的表達(dá)水平,免疫熒光檢測podocin表達(dá)變化,PAS染色和電鏡觀察腎臟的組織結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1.隨著時(shí)間增加,db/db小鼠血糖、體重、血肌酐、尿白蛋白水平均逐漸增加,且高于同周齡db/m小鼠(p0.05),db/db小鼠給予miR-138 siRNA處理后,體重和血糖水平無明顯變化(p0.05),而血肌酐和尿白蛋白水平下降(p0.05)。2.與db/m小鼠相比,db/db小鼠腎組織中miR-138的表達(dá)水平增加(p0.05),且miR-138的表達(dá)水平與尿白蛋白/肌酐比值水平呈正相關(guān)(R~2=0.64,p0.01)。3.與db/m小鼠相比,db/db小鼠腎組織中IL-6和IL-18的表達(dá)增加,給予miR-138 siRNA處理后,db/db小鼠腎組織中IL-6和IL-18的表達(dá)減少。4.與db/m小鼠相比,db/db小鼠腎組織中nephrin和pococin表達(dá)減少,而desmin表達(dá)增加;給予miR-138 siRNA處理后,db/db小鼠腎組織中nephrin和pococin表達(dá)增加,而desmin表達(dá)減少。5.PAS染色和電鏡結(jié)果顯示,與db/m小鼠相比,db/db小鼠逐漸出現(xiàn)腎小球肥大、系膜增生、硬化、基底膜增厚和足突融合等病理改變,db/db小鼠給予miR-138 siRNA處理后,上述病理改變減輕。結(jié)論:1.在db/db小鼠腎組織中miR-138表達(dá)增加,且miR-138表達(dá)水平與尿白蛋白/肌酐比值水平呈正相關(guān),提示miR-138具有成為DN新型生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的潛能。2.在db/db小鼠腎組織中miR-138可能通過上調(diào)炎癥因子IL-6和IL-18的表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷。3.在db/db小鼠腎組織中miR-138 siRNA可能通過下調(diào)炎癥因子IL-6和IL-18的表達(dá)進(jìn)而對(duì)足細(xì)胞損傷具有緩解作用,為尋找DN的治療靶點(diǎn)提供新的依據(jù)。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠一般指標(biāo)的比較小鼠血糖水平的比較實(shí)驗(yàn)期間 db/m 小鼠的血糖水平維持在較穩(wěn)定水平，三組、vehicle 組和 si-miR 組）的血糖水平均隨時(shí)間增加而逐漸 小鼠相比，其余三組 db/db 小鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血糖水平均升。si-miR 組小鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血糖水平與同周齡 db/db 組和 v差異（p>0.05）。（詳見圖 1.1）。

圖 1.2 各組小鼠體重水平的比較（*與 db/m 小鼠相比，P<0.05）小鼠血肌酐水平的比較個(gè)實(shí)驗(yàn)期間 db/m 小鼠的血肌酐水平維持在較穩(wěn)定水平，db/小鼠血肌酐水平隨時(shí)間增加而逐漸升高。6 周齡時(shí)各組小鼠血學(xué)差異（p>0.05），而三組 db/db 小鼠 10 周齡及以后各個(gè)時(shí)間高于 db/m 組小鼠（p<0.05）。si-miR 組小鼠在 6 周齡和 10 周同周齡 db/db 組和 vehicle 組小鼠相比均無差異（p>0.05）；1與同周齡 db/db 組和 vehicle 組小鼠相比有所下降，，但無統(tǒng)計(jì)），18 周齡和 22 周齡時(shí)血肌酐水平與同周齡 db/db 組和 vehi下降（p<0.05）。（詳見圖 1.3）。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Montserrat B Duran-Salgado;Alberto F Rubio-Guerra;;Diabetic nephropathy and inflammation[J];World Journal of Diabetes;2014年03期

本文編號(hào)：2660016