【摘要】：本論文共分為四章內(nèi)容。第一章文獻(xiàn)研究較為系統(tǒng)地總結(jié)了丹參莖葉的資源性化學(xué)成分和藥理學(xué)作用,為丹參莖葉資源開發(fā)利用及其產(chǎn)業(yè)化提供了科學(xué)依據(jù)�；诂F(xiàn)代研究,對非嚙齒類模式生物果蠅、秀麗隱桿線蟲和斑馬魚在藥物篩選與藥效評價中的優(yōu)勢以及應(yīng)用進(jìn)行了綜述,為非嚙齒類模式生物平臺的建立與開發(fā)提供了有力的參考與借鑒。第二章基于果蠅和線蟲模型的丹參莖葉抗衰老資源價值評價研究1.采用UPLC法對丹參根部提取物(SM)、丹參莖葉提取物(DJ)、丹參根部總酚酸部位(SMPA)和丹參莖葉總酚酸部位(DJPA)中酚酸類成分原兒茶醛、丹參素、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C進(jìn)行了含量測定,酚酸類成分的總含量分別為13.58%、12.04%、66.31%和66.32%,結(jié)果表明丹參根和莖葉中的酚酸類成分總量相當(dāng)。2.利用模式生物果蠅,以壽命為指標(biāo),評價丹參根及丹參莖葉的提取物和總酚酸的抗衰老活性。進(jìn)食量實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,各組均無顯著性差異,提示各藥物的濃度設(shè)定均為合理,且丹參莖葉提取物和丹參提取物對果蠅的進(jìn)食量無干預(yù)作用;與對照組相比,SM、DJ、SMPA和DJPA處理后果蠅壽命均得到不同程度的延長,提示丹參根及莖葉的提取物和總酚酸部位具有顯著的抗衰老活性;經(jīng)過6.0 mmol·L-1 PQ或0.6%SDS的氧化損傷,與對照組相比,7d后模型組果蠅的存活率顯著降低(P0.001);與模型組相比,各組給藥果蠅的存活率均無顯著變化,提示丹參根部及地上莖葉的提取物和總酚酸都無法逆轉(zhuǎn)0.6%SDS或6.0 mmol·L-1 PQ造成的致死率。3.利用模式生物果蠅,以體重,超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活力,氧化損傷后存活率,腸道上皮細(xì)胞凋亡數(shù)為指標(biāo),探究丹參根及丹參莖葉的提取物和總酚酸的抗衰老作用機(jī)制。結(jié)果表明,丹參根及莖葉的提取物和總酚酸部位具有抗氧化活性,均能使果蠅的SOD、CAT活力發(fā)生不同程度的提高(P0.05),這可能是提高果蠅壽命的原因之一;各組果蠅體重?zé)o顯著性差異,說明丹參根及莖葉提取物和總酚酸部位對果蠅的體質(zhì)量無顯著影響;丹參莖葉提取物對于百草枯(PQ)誘導(dǎo)的快速老化模型具有一定的保護(hù)作用,能夠降低中腸的腸上皮細(xì)胞凋亡率(P0.05),減少中腸成腸干細(xì)胞數(shù)(P0.05),表明丹參莖葉具有顯著抗腸道老化作用,這可能是其延長壽命的原因之一。4.利用模式生物秀麗隱桿線蟲,以壽命為指標(biāo),評價丹參根及丹參莖葉的提取物和總酚酸的抗衰老活性。與對照組相比,50μg·mL-1的SM,100μg·mL-1的DJ,25μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1的 SMPA,25 μg·mL-1、50 μg·mL-1的 DJPA 均能不同程度地延長線蟲的平均壽命和最高壽命(P0.05或P0.01)。5.以線蟲為模式生物,以腸道活性氧含量、頭部擺動、身體彎曲頻率、咽泵行為、過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性和抗氧化相關(guān)基因表達(dá)量為指標(biāo),探究丹參根及丹參莖葉的提取物和總酚酸的抗衰老作用機(jī)制。結(jié)果顯示,與對照組相比,各給藥組線蟲頭部擺動頻率、咽泵運動頻率和身體彎曲頻率均無顯著差異,DJ處理后,線蟲體內(nèi)sod-1、ctl-2、mtl-1、mtl-2、hsp-16.1和hsp-16.2基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào),SM處理后,線蟲體內(nèi)的sod-1、sod-2、ctl-2和mtl-1基因表達(dá)顯著上調(diào)。與對照組相比,百草枯處理后,模型組線蟲出現(xiàn)腸道的ROS含量顯著提升(P0.01),頭部擺動頻率和咽泵行為均無顯著差異,身體彎曲頻率顯著上升(P0.05),CAT和SOD活力顯著下降(P0.01);與模型組相比,丹參根部提取物和丹參莖葉提取物處理后,線蟲腸道ROS含量顯著降低(P0.05或P0.01),身體彎曲頻率顯著降低(p0.05),CAT相對活力顯著提升(P0.05)。表明丹參根及莖葉提取物和總酚酸具有抗氧化活性,丹參莖葉的抗衰老活性可能與上調(diào)氧化應(yīng)激相關(guān)基因sod-1、ctl-2和mtl-1的表達(dá)有關(guān)。第三章基于果蠅代謝紊亂模型的丹參莖葉資源價值評價研究1.采用高糖誘導(dǎo)的果蠅代謝紊亂模型,以進(jìn)食量,體重,葡萄糖、三酰甘油和蛋白質(zhì)的含量,成蛹時間為指標(biāo),對丹參莖葉進(jìn)行活性評價。實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組果蠅體內(nèi)葡萄糖、三酰甘油水平顯著上升(P0.05);與模型組相比,達(dá)美康陽性藥物組、丹參莖葉提取物中劑量組和高劑量組果蠅體內(nèi)的葡萄糖水平顯著降低(P0.05或P0.01),陽性藥物組和丹參莖葉提取物高劑量組果蠅體內(nèi)的三酰甘油水平顯著下降(P0.05 或 P0.01)。2.采用果蠅代謝紊亂模型,以氧化應(yīng)激和參與血糖調(diào)節(jié)的相關(guān)基因表達(dá)量為指標(biāo),對果蠅的代謝物進(jìn)行分析,探究丹參莖葉對果蠅代謝紊亂模型的作用機(jī)制。結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組果蠅的dFOXO、Ilp5和l(2)efl基因表達(dá)顯著下調(diào),upd2基因顯著上調(diào);與模型組相比,陽性藥物組果蠅dFOXO、l(2)efl基因顯著上調(diào);丹參根部提取物組Ilp5基因顯著上調(diào),srl和upd2基因顯著下調(diào);丹參莖葉提取物組Ilp5和l(2)efl基因表達(dá)顯著上調(diào),upd2基因顯著下調(diào)。與模型組相比,丹參莖葉提取物處理后,果蠅的代謝水平有所回調(diào),分析得到17個潛在生物標(biāo)志物和4個主要代謝通路。提示丹參莖葉提取物在果蠅體內(nèi)可能是通過調(diào)節(jié)dFOXO、Ilp5、l(2)efl和upd2的表達(dá)量,影響組氨酸代謝、甘油磷脂代謝、戊糖和葡萄糖醛酸鹽相互作用和甘油酯代謝等代謝通路,從而調(diào)節(jié)果蠅的糖脂代謝。第四章基于斑馬魚模型的丹參莖葉資源價值評價研究1.用25 μmol·L-1的潑尼松龍誘導(dǎo)建立斑馬魚骨質(zhì)疏松模型,以斑馬魚頭部骨骼染色面積和染色光密度值為指標(biāo),以15 μg·mL-1依替膦酸二鈉為陽性藥,探討丹參莖葉提取物(12.5、25、50、100、200μg·mL-1 對斑馬魚骨質(zhì)疏松模型的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組斑馬魚頭部骨骼染色面積和染色光密度值顯著減少(P0.01);與模型組比較,陽性藥物組和丹參莖葉提取物100 μg·mL-1組能夠使斑馬魚頭部骨骼染色面積顯著增加(P0.05),陽性藥物組和丹參莖葉提取物50、100和200 μg·mL-1組染色光密度值顯著增加(P0.01或P0.05),表明丹參莖葉提取物具有顯著的抗骨質(zhì)疏松活性。2.利用苯肼誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型,以抗血栓效率為指標(biāo),以阿司匹林為陽性藥,評價丹參莖葉的活血化瘀作用。結(jié)果表明,與對照組相比,模型組斑馬魚的尾部靜脈形成了顯著的血栓,心臟紅細(xì)胞染色強(qiáng)度顯著降低;模型組相比,陽性藥物組和丹參莖葉提取物50～200μg·mL-1組心臟紅細(xì)胞染色強(qiáng)度和抗血栓效率顯著提升(P0.05或P0.001),丹參莖葉提取物的EC50為57.17 μg·mL-1,提示丹參莖葉提取物能有效抑制該模型斑馬魚的血栓形成。用VEGF受體酪氨酸激酶抑制劑Ⅱ誘導(dǎo)斑馬魚血管缺損模型,和節(jié)間血管完整指數(shù)為指標(biāo),評價丹參莖葉的促血管生成作用。結(jié)果表明,與對照組相比,模型組斑馬魚節(jié)間血管指數(shù)顯著降低,kdrl、flt-1、vWF和VEGF-A的表達(dá)量顯著下調(diào);與模型組相比,丹參莖葉能夠使斑馬魚節(jié)間血管數(shù)顯著增加(P0.05或P0.01),上調(diào)kdrl、flt-1、vWF和VEGF-A的基因表達(dá)量。提示丹參莖葉提取物具有顯著的促血管生成作用,其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血管新生相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖１－２－１果蠅雌雄對比圖逡逑Ｆｉｇ．邋１－２－１邋Ｃｏｎｔｒａｓｔ邋ｏｆ邋ｍａｌｅ邋ａｎｄ邋ｆｅｍａｌｅ邋ｆｌｙ逡逑１．．４

３實驗結(jié)果逡逑３．１丹參莖葉對果蠅進(jìn)食量的影響逡逑由圖２－１－２所示，與Ｎ組相比，，各組果蠅的進(jìn)食量均無顯著性差異，結(jié)果提示各組藥逡逑物的濃度設(shè)定均在合理范圍內(nèi)，且丹參莖葉對果蠅的進(jìn)食無顯著的干預(yù)作用。逡逑０．１２－１邐逡逑？邋Ｉ邋Ｔ邋１邋Ｉ邋Ｔ逡逑｜邋００８＇＾邋Ｉ邋Ｉ邋ｌｌｌ＾ｌｌｌｌｌ逡逑０．０４－邐｜邐Ｍ邋ｊ邐：逡逑＜逡逑０邋００ＩＬｒｌ琴琴＿丨？丨丨丨NＬｒｌｌ逡逑—逡逑圖２－２－１不同藥物對果蠅進(jìn)食量的影響土邋＼邋ｎ邋＝邋３）逡逑Ｆｉｇ．邋２－２－１邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｄｒｕｇｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｉｎｔａｋｅ邋ｏｆ邋ｆｒｕｉｔ邋ｆｌｉｅｓ邋（Ｆ邋土邋？邋＝邋３）逡逑２７逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2657126