【摘要】：目的了解云南省西南地區(qū)蝙蝠及其體表寄生蟲的巴爾通體流行分布情況和攜帶情況,并研究其遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育進化分析,為滇西南地區(qū)巴爾通體宿主及傳播媒介的研究提供科學(xué)依據(jù)。方法本次研究選取的調(diào)查地為云南省西南地區(qū),采用網(wǎng)捕法捕捉蝙蝠后,采集蝙蝠體表寄生蟲并進行形態(tài)學(xué)分類;對蝙蝠進行無菌解剖,取其脾和血液,將蝙蝠標(biāo)本做好標(biāo)記后放置液氮罐中帶回實驗室,置于-80℃冰箱凍存待檢。將所采集的蝙蝠體表寄生蟲和蝙蝠脾臟組織樣品在嚴(yán)格無菌條件下研磨制成組織懸液,依據(jù)TIANamp Genomic DNA Kit試劑盒相關(guān)操作對蝙蝠體表寄生蟲和蝙蝠脾臟、血塊(血液離心后棄血清)三類標(biāo)本分別提取DNA。首先蝙蝠體表寄生蟲用節(jié)肢動物線粒體細胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)的通用引物進行擴增鑒定吸血昆蟲種類,然后用巴爾通體引物對三類標(biāo)本分別擴增gltA、16S~23S rRNA ITS、groEL、fts Z、16S rRNA基因。將獲得的三類標(biāo)本中陽性標(biāo)本送測序,對得到的陽性序列利用DNAstar軟件包中的SeqMan軟件進行序列拼接、編輯及校正;用Clustal X(1.83)軟件進行堿基配對以及核苷酸和推導(dǎo)氨基酸序列同源性分析;應(yīng)用MEGA軟件鄰接法(neighbor-joining)分別對不同基因構(gòu)建系統(tǒng)進化樹分析其系統(tǒng)發(fā)育進化關(guān)系。結(jié)果本次研究在云南省西南地區(qū)的7個州市12個縣區(qū)捕獲蝙蝠共有三種,分別是菊頭蝠、水鼠耳蝠和棕果蝠;蝙蝠體表寄生蟲共有6種71批1052只,包括蛛蠅、蝠蠅、跳蚤、革螨、蜱和小粉蝶的卵。另采集到355份蝙蝠脾臟組織和231份蝙蝠血塊標(biāo)本。經(jīng)各基因引物對PCR擴增后得到50批蝙蝠體表寄生蟲陽性,感染率為70.42%(50/71);12份蝙蝠血塊和13份蝙蝠脾臟標(biāo)本存在巴爾通體感染,感染率分別為5.19%(12/231)和3.66%(13/355)。所測陽性標(biāo)本經(jīng)系統(tǒng)進化分析與以下四種巴爾通體親緣性相近:五日熱巴爾通體(Bartonella quintana)、文森巴爾通體伯格霍夫亞種(Bartonella vinsonii subsp.Berkhoffii)、Bartonella australis和克氏巴爾通體(Bartonella clarridgeiae),大多為一些為未定種的巴爾通體。此外通過其他微生物的檢測得到部分立克次體屬和埃立克體屬陽性序列。綜上所述,可以看出蝙蝠體表寄生蟲攜帶巴爾通體的種類與宿主蝙蝠有很大關(guān)系,陽性率也因標(biāo)本的不同和引物的不同存在差異,另外蝙蝠及其體表寄生蟲標(biāo)本感染的巴爾通體基因型存在差異,不同蝙蝠種類攜帶不同的巴爾通體,表明了巴爾通體的宿主特異性。結(jié)論本研究調(diào)查首次發(fā)現(xiàn)云南省西南地區(qū)蝙蝠及其體表寄生蟲存在巴爾通體的感染且巴爾通體基因型類別多樣,其中相近的有四種巴爾通體基因型,存在三種對人致病的基因型,研究結(jié)果為云南省巴爾通體疾病的監(jiān)測和防治提供了理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

滇西南地區(qū)蝙蝠及其體表寄生蟲巴爾通體的感染調(diào)查 大理大學(xué)碩士學(xué)位論文3.結(jié)果與分析3.1標(biāo)本采集點此次采集地區(qū)包括云南省西南地區(qū)的 7 個州市 12 個縣區(qū)的采集點，包括大理州的祥云縣，楚雄州的雙柏縣，保山市的隆陽區(qū)、騰沖縣、潞江鎮(zhèn)，德宏州的芒市和畹町鎮(zhèn)，臨滄市的永德縣和南傘鎮(zhèn)，普洱市的墨江縣和孟連縣，西雙版納州的勐臘縣。這些采樣點的緯度從 N21°27′開始至 N25°29′，經(jīng)度從 E98°03′開始至 E101°41′，，山地眾多，海拔高低相差很大，具體采集點自然情況見下圖 3-1 和表 3-1。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R378

【參考文獻】

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本文編號：2649577