【摘要】：目的:研究鞭毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白172(Intraflagellar transport protein 172,IFT172)在小鼠生精細(xì)胞中的功能以及精子鞭毛形成過(guò)程和生育能力中的作用。方法:1、將成年的Ift172~(flox/flox)雌性小鼠與Stra8-iCre雄性小鼠雜交,建立的Ift172生精細(xì)胞條件敲除小鼠為實(shí)驗(yàn)組小鼠,以野生型小鼠為對(duì)照。2、用10對(duì)六周以上的Ift172條件敲除雄鼠或野生型雄鼠分別與成年的野生型雌鼠交配兩個(gè)月以上,評(píng)估其生育力及繁殖能力。3、收集附睪精子,精子計(jì)數(shù),檢測(cè)精子活力,光鏡下觀察精子形態(tài)。4、收集小鼠睪丸和附睪進(jìn)行HE染色,觀察精子發(fā)生過(guò)程的各個(gè)階段。5、透射電鏡(TEM)觀察兩組小鼠精子的超微結(jié)構(gòu)。6、蛋白印跡(Western Blot)檢測(cè)IFT25、IFT27、IFT81、AKAP4、ODF2、SPAG16L等相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。7、分離小鼠睪丸生精細(xì)胞,免疫熒光染色染色檢測(cè)IFT172的定位以及Ift172條件敲除小鼠體內(nèi)IFT172敲除水平,并觀察精子中纖維鞘蛋白AKAP4和外周致密纖維蛋白ODF2的定位。結(jié)果:Ift172~(flox/flox);Stra8-iCre條件敲除小鼠都能夠生長(zhǎng)至成年。1、與正常的小鼠相比較,Ift172~(flox/flox);Stra8-iCre條件敲除小鼠的睪丸重量/體重比例沒(méi)有明顯差別。其中有六成的成年雄性純合子小鼠是不育的。2、組織學(xué)檢測(cè)顯示,與野生型小鼠相比,Ift172~(flox/flox);Stra8-iCre條件敲除小鼠的精子形成階段發(fā)生異常。3、Ift172被敲除后,小鼠附睪中僅殘存少量發(fā)育完全的精子,大部分精子出現(xiàn)精子尾卷曲。且精子數(shù)目比野生型小鼠減少了10倍左右,精子活力較野生型小鼠有明顯降低。4、與野生型小鼠相比,在Ift172條件敲除小鼠的睪丸內(nèi),其他的幾種IFT家族B復(fù)合物的成員IFT20、IFT25、IFT27和IFT81以及IFT家族A復(fù)合物中的IFT140的表達(dá)水平?jīng)]有明顯的變化。此外,軸絲蛋白SPAG16L的表達(dá)量也沒(méi)有明顯變化。但是外周致密纖維結(jié)構(gòu)蛋白ODF2以及線粒體鞘蛋白AKAP4的表達(dá)量顯著下降。5、免疫熒光染色結(jié)果顯示,在野生型小鼠中IFT172定位在生精細(xì)胞中定位在長(zhǎng)形精子細(xì)胞的精子領(lǐng)處,而AKAP4和ODF2在Ift172條件敲除小鼠精子中的定位與野生型小鼠相比沒(méi)有明顯改變。結(jié)論:IFT172在生精細(xì)胞中表達(dá)量減少導(dǎo)致小鼠精子數(shù)目、活力以及生育能力下降,IFT172是一個(gè)對(duì)于雄性小鼠的生育能力以及精子發(fā)生所必需的蛋白,它很可能參與精子發(fā)生過(guò)程中特殊的結(jié)構(gòu)蛋白的運(yùn)輸和組裝。
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R321.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2649023