發(fā)布時(shí)間：2020-04-24 00:01

【摘要】：近年來惡性腫瘤免疫治療療效顯著,但機(jī)體免疫系統(tǒng)中各免疫細(xì)胞亞群的相互干擾是限制腫瘤免疫治療效果的關(guān)鍵因素,因此從多個(gè)途徑對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行干預(yù),是癌癥免疫療法的新思路。骨髓來源的抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs),是免疫抑制細(xì)胞成員中生物學(xué)功能復(fù)雜的重要的亞群,MDSCs能在惡性腫瘤患者體內(nèi)迅速積累,抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮免疫功能,幫助惡性腫瘤細(xì)胞免疫逃逸,而且與乳腺癌患者預(yù)后不良密切相關(guān),但是由于MDSCs在惡性腫瘤患者體內(nèi)的積聚機(jī)制尚不明晰,從而限制了針對(duì)腫瘤相關(guān)MDSCs靶向藥物的研發(fā)。本研究以4T1細(xì)胞系構(gòu)建小鼠乳腺癌模型。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠腫瘤移植重建過程中脾臟免疫細(xì)胞亞群比例以及數(shù)量的變化。利用密度梯度離心法分離小鼠脾臟MDSCs細(xì)胞亞群。使用RT-PCR和Western blot技術(shù)篩選荷瘤鼠MDSCs與淋巴細(xì)胞差異基因和蛋白。結(jié)果表明,荷瘤小鼠脾臟MDSCs細(xì)胞亞群比例(53.7±3.7 vs 3.2±0.8)%和絕對(duì)數(shù)量(57±5.8 vs 0.31±0.01)×10~7顯著增加,淋巴細(xì)胞亞群比例(53.7±3.7 vs 3.2±0.8)%顯著降低,絕對(duì)細(xì)胞數(shù)量顯著增加。密度為1.084g/m~3的OptiPrep~(TM)分離液,在800g離心力下離心30min后,分離液上層淋巴細(xì)胞比例為(62.5±3.2)%,分離液下層MDSCs細(xì)胞比例為(71.7±4.2)%。(3)在健康小鼠脾臟免疫細(xì)胞分離過程中,B220~+細(xì)胞富集在分離液上層(53.2±4.6)%,CD3~+T富集在分離液下層(75.3±7.6)%。4T1小鼠脾臟MDSC中高表達(dá)Cyclin E、STAT3、Bcl-2,而淋巴細(xì)胞高表達(dá)Caspase 3、Cleaved-PARP。小鼠腫瘤移植重建過程中脾臟MDSCs細(xì)胞Cyclin E、STAT3、Bcl-2表達(dá)量高于淋巴細(xì)胞,Caspase 3、Cleaved-PARP表達(dá)量低于淋巴細(xì)胞。
【圖文】：

輕輕向上提起，用剪刀貼著表剝離下來，將得到的腫瘤塊放入倒有 PB，取出小鼠脾臟與肝（注意動(dòng)作輕柔，保持向下取出小鼠的肺（保持完整），將得到器官raphpad Prism 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行制圖分析，數(shù)-wayANOVA 分析，組間兩兩比較采用 SN0.01 為差異極顯著。劑麻醉效果藥后，在合適的劑量（1.6-2.2mg/20g）范會(huì)加長；但低于 1.6 mg / 20 g 時(shí)麻醉效果心跳加速、四肢疲軟；而高劑量（高于 2果，可得出 20 g 的小鼠最佳麻醉劑劑量為小鼠手術(shù)時(shí)間約為 70 min，手術(shù)時(shí)間充足

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 天測量小鼠腫瘤體積大小一次，，每隔 7 天解剖一部分小鼠（5 只每組），稱量器官。隨著移植后腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的增殖，第四與第五乳腺之間的淋巴結(jié)逐漸腫大且毛細(xì)血管密度顯著增加，7 天后出現(xiàn)明顯的腫瘤腫塊，前 15 天腫瘤體積以及腫瘤增長緩慢，15 天之后腫瘤體積及重量迅速增長；脾臟的體積以及重量也隨著腫瘤細(xì)增殖而增長，并且脾臟重量的增長速率與腫瘤重量在前 30 天內(nèi)，呈正相關(guān)（結(jié)果 1 A、B、C 所示）；肺臟以及肝臟的體積以及重量隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展并沒有顯著化。值得注意的是，本試驗(yàn)所使用的小鼠腫瘤模型在移植 4T1 細(xì)胞 30 天后，腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，隨著時(shí)間的增加，轉(zhuǎn)移部位逐漸增加，乳腺、肺、腎臟、胸腔膜是最常轉(zhuǎn)移部位；肝臟以及脾臟轉(zhuǎn)移現(xiàn)象比較少見，多出現(xiàn)在小鼠腫瘤長度至 2cm 左右，病變區(qū)特征為組織呈灰白色，且與正常組織界限分明。如圖 1D 所示。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.51;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2638300