【摘要】：[目的]建立大鼠深、低體溫停循環(huán)模型,提取腦組織海馬區(qū)miRNA,在miRNA水平討深低溫對腦保護(hù)的機(jī)制。[方法]選用昆明醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室提供的健康成年清潔級(Sprague-Dawley,SD)大鼠28只,體重410-620g左右,雌雄不限。隨機(jī)分為3組,每組6只,分別為常溫停循環(huán)組(NTCA)、亞低溫循環(huán)組(HCA)、深低溫循環(huán)組(DHCA),5只作為體外循環(huán)預(yù)沖液的配置,其余5只為假手術(shù)組(不停循環(huán))。具體操作如下:常溫停循環(huán)(NTCA)組:體外循環(huán)建立成功后,通過可調(diào)節(jié)溫度的水箱維持其肛溫(36.8℃-37℃)下體外循環(huán)10min,再停循環(huán)10min。亞低溫停循環(huán)(HCA)組:體外循環(huán)建立成功后,通過變溫水箱、冰袋、冰屑等降溫手段使大鼠肛溫迅速降至≤28℃下體外循環(huán)(Cardiopulmonary bypass,CPB)10min,維持此溫度再停循環(huán)10min。深低溫停循環(huán)(DHCA)組:體外循環(huán)建立成功后,通過變溫水箱、冰袋、冰屑等降溫手段使大鼠肛溫迅速降至≤20℃下CPB1Omin,維持在此溫度下再停循環(huán)10min。然后快速斷頭提取腦組織,分離大鼠海馬標(biāo)本提取總RNA,利用基因芯片技術(shù)及Q-PCR技術(shù)檢測miRNA的表達(dá)變化情況,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析。[結(jié)果]深低溫循環(huán)組內(nèi)海馬區(qū)一共有38個(gè)miRNAs表達(dá)改變,其中有14 個(gè)表達(dá)差異明顯,包括 rno-miR-34c-5p、rno-miR-493-3p、rno-miR-204-3p、rno-miR-183-5p、rno-miR-204-5p、rno-miR-448-5p、rno-miR-764-5p、rno-miR-1298、rno-miR-448-3p、rno-miR-182、rno-miR-497-5P、rno-let-7c-5a 等,對這些 miRNAs 靶點(diǎn)的預(yù)測分析揭示DHCA的生理過程涉及多個(gè)靶點(diǎn)參與和生物學(xué)功能。[結(jié)論]DHCA后腦損傷涉及到一系列miRNAs的表達(dá)的變化,可為深低溫停循環(huán)腦損傷的機(jī)制提供新的科學(xué)依據(jù)及研究方向。
【圖文】：

屑等降溫手段使大鼠肛溫迅速降至夕0°Ｃ下ＣＰＢｌＯｍｉｍ維持此溫度再停循環(huán)ｌＯｍｉｎ。逡逑１－４－６標(biāo)本提取逡逑三組標(biāo)本停循環(huán)ｌＯｍｉｎ后，迅速斷頭打開顱骨，據(jù)大鼠腦解剖圖（圖２）對腦組逡逑織定位，通過駢胝體切斷左右兩側(cè)大腦半球，分離顳葉后顯露海馬組織逡逑（圖３），顯微鑷夾取海馬組織，放入做好標(biāo)記的凍存管保存于－８０°Ｃ恒溫冰箱。腦組織逡逑在常溫下能耐受的缺血缺氧安全時(shí)間窗為５－８ｍｉｎ，，本實(shí)驗(yàn)中我們選擇停循環(huán)ｌＯｍｉｎ，逡逑ｌＯｍｉｎ的時(shí)限已經(jīng)超過了常溫下腦組織缺血的耐受時(shí)間極限，并且海馬組織作為腦缺血逡逑缺氧最敏感部位，因此以這個(gè)缺血缺氧時(shí)間的海馬組織進(jìn)行研究更具有可比性、差異性，逡逑對探討缺血性腦損傷早期的發(fā)病機(jī)理和研究更具有價(jià)值。逡逑：＾邋；＼Ｍ邋１％邋ｉ邋？逡逑＾邐４邋——悐？邐？逡逑圖２大鼠腦海馬解剖直視圖邐圖３大鼠海馬組織逡逑１－５數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)用ＳＰＳＳ邋ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＶ１９．０統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，統(tǒng)計(jì)量以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)逡逑差（又±ｓ）表示，根據(jù)實(shí)驗(yàn)資料及要求，兩組間比較用獨(dú)立樣本ｔ檢驗(yàn)，三組及組的以逡逑上組件比較用單因素方差分析并行組間比較

三組標(biāo)本停循環(huán)ｌＯｍｉｎ后，迅速斷頭打開顱骨，據(jù)大鼠腦解剖圖（圖２）對腦組逡逑織定位，通過駢胝體切斷左右兩側(cè)大腦半球，分離顳葉后顯露海馬組織逡逑（圖３），顯微鑷夾取海馬組織，放入做好標(biāo)記的凍存管保存于－８０°Ｃ恒溫冰箱。腦組織逡逑在常溫下能耐受的缺血缺氧安全時(shí)間窗為５－８ｍｉｎ，本實(shí)驗(yàn)中我們選擇停循環(huán)ｌＯｍｉｎ，逡逑ｌＯｍｉｎ的時(shí)限已經(jīng)超過了常溫下腦組織缺血的耐受時(shí)間極限，并且海馬組織作為腦缺血逡逑缺氧最敏感部位，因此以這個(gè)缺血缺氧時(shí)間的海馬組織進(jìn)行研究更具有可比性、差異性，逡逑對探討缺血性腦損傷早期的發(fā)病機(jī)理和研究更具有價(jià)值。逡逑：＾邋；＼Ｍ邋１％邋ｉ邋？逡逑＾邐４邋——悐？邐？逡逑圖２大鼠腦海馬解剖直視圖邐圖３大鼠海馬組織逡逑１－５數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)用ＳＰＳＳ邋ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＶ１９．０統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，統(tǒng)計(jì)量以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)逡逑差（又±ｓ）表示，根據(jù)實(shí)驗(yàn)資料及要求，兩組間比較用獨(dú)立樣本ｔ檢驗(yàn)，三組及組的以逡逑上組件比較用單因素方差分析并行組間比較，若實(shí)驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在運(yùn)用ＬＳＤ－ｔ逡逑進(jìn)行組間的兩兩比較，Ｐ＜0．0５有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑１３逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R338

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2637709