【摘要】：血小板是機體生理性止血和動脈血栓形成的重要調(diào)控細胞,血小板的功能不足或是過度活化會導致嚴重的出血和血栓性疾病。探究血小板活化分子機制,闡明出血或血栓性疾病的機制,能為血小板功能缺陷相關疾病提供新的治療靶點。動脈血栓形成包括血栓的發(fā)生、發(fā)展以及穩(wěn)定三個階段,三個階段皆主要依賴血小板活化,但其活化機制各不相同。以往的研究認為,血小板的粘附受體(GPIb-V-IX,GPVI,整合素αIIbβ3)介導血小板在破損的血管內(nèi)皮基質(zhì)上滾動,粘附,活化的血小板通過分泌生理刺激劑(ADP,血栓烷A2,凝血酶),促進鄰近血小板激活聚集。整合素αIIbβ3調(diào)控血小板的分泌,聚集,以及血栓的粘附和穩(wěn)定。而對于整合素αIIbβ3如何結合血小板的生理刺激劑,動態(tài)參與血栓穩(wěn)定性的機制所知甚少。Shp2是由PTPN1I基因編碼的含有兩個SH2結構域的蛋白酪氨酸磷酸酶,在多種生長因子,激素及細胞因子等應答中都發(fā)揮了重要的生物學作用。PTPN11基因突變常導致努曼綜合征和豹皮綜合征,這些患者常伴隨嚴重的出血、瘀斑表征。以往的研究認為,Shp2通過與血小板表面PECAM-1受體胞內(nèi)段磷酸化的ITIM結合,參與抑制性的GPVI信號通路,此外,Shp2敲除小鼠血小板在纖維蛋白原表面的鋪展增強,但Shp2調(diào)控血小板活化的具體機制尚不清楚,我們提出假設:Shp2通過調(diào)控整合素αIIbβ3介導的血小板活化和分泌,從而參與血栓形成和穩(wěn)定過程。本研究利用基因敲除小鼠,補充了Shp2在血小板活化和血栓穩(wěn)定中的未知作用。結果可以概括為以下幾點:(1)在三氯化鐵誘導的腸系膜動脈血栓模型中,Shp2敲除小鼠的動脈血栓阻塞時間與野生型小鼠相當,但血栓的穩(wěn)定性顯著提升,不穩(wěn)定栓子脫落的數(shù)目降低。(2)在體外全血微灌流模擬體內(nèi)不同血流速度下的血栓形成實驗中,我們發(fā)現(xiàn)在病理流速條件下(3000 s-1),Shp2缺失血小板在膠原表面形成的血栓,穩(wěn)定性顯著增加且呈現(xiàn)為持續(xù)增長的狀態(tài);在血栓穩(wěn)定實驗中,Shp2缺失血小板在膠原表面形成的血栓表現(xiàn)為增強的剪切應力抵御能力,證明Shp2負向調(diào)控病理流速下的動脈血栓穩(wěn)定性。(3)檢測血小板聚集和釋放功能后發(fā)現(xiàn),Shp2的缺失不影響血小板在膠原、凝血酶和ADP刺激時的聚集和釋放,但增加了血小板在血栓烷A2類似物U46619刺激時致密顆粒釋放,且增加的二相釋放特異性依賴于血栓烷A2/TP信號通路。P2Y12受體和整合素αIIbβ3的阻斷,消除了 Shp2缺失血小板在U46619刺激時增強的致密顆粒釋放。(4)Shp2缺失血小板在纖維蛋白原表面的鋪展面積較野生型血小板增加,ADP的水解酶apyrase則有效地抑制了 Shp2缺失血小板在纖維蛋白原表面的鋪展。因此,Shp2負向調(diào)控整合素αIIbβ3由外向內(nèi)信號介導的血小板分泌功能。(5)在分子機制方面,我們發(fā)現(xiàn)Shp2抑制整合素αIIbβ3的晚期-由外向內(nèi)信號,Shp2的缺失使得Akt的磷酸化水平增加,并且通過Calmodulin調(diào)控Akt磷酸化進而影響整合素ααIIbβ3介導的由外向內(nèi)信號和血小板分泌功能。Calmodulin抑制劑W-7或Akt抑制劑SH-6有效地消除Shp2缺失血小板與野生型血小板在U46619刺激時致密顆粒釋放的差異,以及下游Akt磷酸化水平差異。因此,Shp2影響Akt磷酸化水平,參與整合素由外向內(nèi)信號和致密顆粒釋放。綜上所述,Shp2是參與血小板活化以及血栓穩(wěn)定性的重要信號分子,Shp2不參與血栓的初始粘附和長大,但通過整合素αIIbβ3由外向內(nèi)信號,繼發(fā)生成的刺激劑協(xié)同參與血小板分泌和血栓穩(wěn)定。
【圖文】：

血途徑參與動脈血栓提供了有效接觸平面。維生素ｋ依賴的凝血因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、逡逑Ｘ和抗凝因子Ｃ和Ｓ通過其Ｇｌａ結構域，與血小板表面外翻的磷脂酰絲氨酸膜緊逡逑密結合９１邋（圖３）。凝血因子Ｖ，作為蛋白酶的輔助因子，，但通過自身的Ｃ２結構逡逑域和ＰＳ膜結合。這些凝血因子發(fā)揮支架作用，與血漿中諸多凝血分子相互作用，逡逑增強了凝血過程９１，９２。凝血因子Ｘ９３和凝血因子ＸＩＩ９４可以直接與纖維蛋白相互作逡逑用，改變纖維蛋白凝塊結構。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶因子ＸＩＩＩ交聯(lián)纖維蛋白，增加結合的逡逑穩(wěn)定９５。此外，凝血因子ＸＩＩＩ交聯(lián)ａ２－ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ限制血纖維蛋白溶酶介導的纖維逡逑蛋白溶解１４，９６。諸多凝血蛋白和凝血蛋白催化酶受體敲除的小鼠體內(nèi)體外血栓模逡逑型都表現(xiàn)為血栓形成障礙，血栓穩(wěn)定性降低，皆提示了凝血蛋白在動脈血栓形成逡逑中的重要作用（表２）邋１９。逡逑．灥Ｖ，彳逡逑Ｔｉｓｓｕｅ邋ｆａｃｔｏｒ邐ＧＰＶ！邋

血流剪切率呈現(xiàn)為梯度模型，剪切率加速區(qū)域，緊接著是剪切率減速區(qū)域，可以逡逑促進血小板沉積到血栓形成的表面，在后狹窄區(qū)域形成的降低的剪切應力為血小逡逑板的累積和聚集提供了理想的流動環(huán)境（圖４）。逡逑６７逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 ;Shp2-mediated molecular signaling in control of embryonic stem cell self-renewal and differentiation[J];Cell Research;2007年01期

本文編號：2635773