【摘要】：目的:觀察淫羊藿苷(Icariin,ICA)聯(lián)合左旋多巴(L-3,4-Dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)對(duì)6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)誘導(dǎo)的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型的作用。方法:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):由6-OHDA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷模型,實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為空白組、6-OHDA(100μM)組、6-OHDA+ICA(0.1μM)組、6-OHDA+L-DOPA(50μM)組、6-OHDA+L-DOPA(100μM)組、6-OHDA+ICA+L-DOPA(50μM)組和6-OHDA+ICA+L-DOPA(100μM)組。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力。比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LDH活性。蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)相關(guān)凋亡基因BAX和Bcl2蛋白的表達(dá)水平。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):SD大鼠中腦炓質(zhì)單側(cè)注射6-OHDA(8μg)制備帕金森病模型,實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為六組:空白組、ICA(20 mg/kg)組、模型組(6-OHDA,8μg)、6-OHDA+ICA(20 mg/kg)組、6-OHDA+L-DOPA(25 mg/kg)組、6-OHDA+ICA(20 mg/kg)+L-DOPA(25 mg/kg)組。大鼠連續(xù)腹腔注射L-DOPA和灌胃ICA,每天一次共21天。用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表達(dá),觀察給藥第7、21天對(duì)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元的數(shù)量變化。高效液相電化學(xué)法檢測(cè)大鼠紋狀體DA,二羥苯乙酸(dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC),高香草酸(homovanillic acid,HVA)的含量。行為學(xué)檢測(cè)異常不自主動(dòng)作(abnormal involuntary movement,AIM),前肢運(yùn)動(dòng)功能測(cè)定(跨步實(shí)驗(yàn))和轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)。蛋白免疫印跡法(Western blotting)測(cè)定中腦黑質(zhì)炎癥因子COX-2,IL-1β和TNF-α的蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):與空白組比較,6-OHDA組PC12細(xì)胞數(shù)量急劇減少,細(xì)胞內(nèi)LDH明顯增多,Bax/Bcl-2比例顯著升高;經(jīng)ICA處理后,PC12細(xì)胞數(shù)量有所增加,細(xì)胞內(nèi)LDH減少;經(jīng)L-DOPA處理后,細(xì)胞內(nèi)LDH,Bax/Bcl-2比例沒(méi)有變化;經(jīng)ICA聯(lián)合L-DOPA處理后,PC12細(xì)胞數(shù)量明顯增加,細(xì)胞內(nèi)LDH和Bax/Bcl-2比例明顯減少(P0.05)。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):與空白組相比,模型組DA神經(jīng)元明顯減少,DA及其代謝產(chǎn)物均減少,大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力明顯下降,COX-2,IL-1β和TNF-α蛋白的表達(dá)升高;經(jīng)ICA處理后,DA神經(jīng)元增多,大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力有所提高;經(jīng)L-DOPA處理后,DA神經(jīng)元和大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力沒(méi)有變化,AIM評(píng)分和前肢運(yùn)動(dòng)功能明顯增加;經(jīng)ICA聯(lián)合L-DOPA處理后,DA神經(jīng)元明顯增多,大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力明顯增強(qiáng),AIM評(píng)分顯著下降,前肢運(yùn)動(dòng)功能有所增加,COX-2,IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)減少(P0.05)。結(jié)論:ICA聯(lián)合L-DOPA對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的PD大鼠有保護(hù)作用,ICA對(duì)長(zhǎng)期服用L-DOPA所致的異動(dòng)癥有改善作用。
【圖文】：

圖 1 ICA 聯(lián)合 L-DOPA 改善 6-OHDA 誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞*P<0.05，與 6-OHDA 組比#P <0.05，，與 6-OHDA+ICA 組比(50 μM)組比χP<0.05，與 6-OHDA+L-DOPA(100 μM)組比ΨFig. 1 ICA combined with L-DOPAprotected against 6-O( x ±SD, n=3). *P<0.05 vs control;#P <0.05 vs 6-OHDA; ωP<vs 6-OHDA+L-DOPA(50μM);ΨP<0.05 vs 6-OHDA+L-DOP圖（A & B & C & D）MTT 檢測(cè)結(jié)果；圖（E）LDH 檢測(cè)

21圖 3 ICA 聯(lián)合 L-DOPA 減少黑質(zhì) DA 神經(jīng)元的損失( x ±SD, n=66-OHDA 組比#P <0.05，與 6-OHDA+ICA 組比ωP<0.05，與 6-OHDAFig. 3 ICA combined with L-DOPAprotected DA neurons from 6-neurotoxicity in vivo ( x ±SD, n=6). *P<0.05 vs control;#P <0.05 vs 66-OHDA+ICA;ΨP<0.05 vs 6-OHDA+L-DOPA.圖（A & C）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果；圖（B & D）轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2632196