【摘要】：目的:通過實(shí)驗(yàn)研究明確夾脊電針對脊髓損傷大鼠NLRP3炎癥小體活化及運(yùn)動(dòng)功能的影響,闡明夾脊電針通過調(diào)控P2X7R抑制NLRP3炎癥小體活化,降低脊髓損傷后炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制,為夾脊電針臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)研究分為四部分。實(shí)驗(yàn)一:觀察夾脊電針對SCI大鼠運(yùn)動(dòng)功能及脊髓組織病理形態(tài)學(xué)的影響。采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只雌性SD大鼠分成假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)和夾脊電針組(EA)3組,每組根據(jù)術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn)分為2個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠,分別給予相應(yīng)的處置或治療。運(yùn)用BBB:評分法觀察各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能;HE染色觀察各組大鼠脊髓組織病理形態(tài)學(xué)變化。明確夾脊電針對SCI大鼠行為學(xué)和形態(tài)學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)二:觀察夾脊電針對SCI大鼠脊髓組織促炎性因子IL-18和IL-lβ表達(dá)的影響。采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只雌性SD大鼠分成假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)和夾脊電針組(EA)3組,每組根據(jù)術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn)分為2個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠,分別給予相應(yīng)的處置或治療。ELISA法檢測大鼠脊髓組織IL-18和IL-1β表達(dá)。明確夾脊電針對SCI大鼠脊髓組織促炎性因子表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)三:觀察夾脊電針對SCI大鼠脊髓組織NLRP3炎癥小體活化的影響。采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只雌性SD大鼠分成假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)和夾脊電針組(EA)3組,每組根據(jù)術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn)分為2個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠,分別給予相應(yīng)的處置或治療。IHC法檢測大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1表達(dá)。明確夾脊電針抑制SCI大鼠脊髓組織NLRP3炎癥小體活化的作用。實(shí)驗(yàn)四:觀察夾脊電針對SCI大鼠脊髓組織P2X7受體表達(dá)及NLRP3炎癥小體活化的影響。采用隨機(jī)數(shù)字表法將48只大鼠分成假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)、夾脊電針組(EA)和BBG注射組(BBG)共4組,每組根據(jù)術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn)分為2個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠,分別給予相應(yīng)的處置或治療。IHC法檢測大鼠脊髓組織P2X7R表達(dá);Western blot 法檢測大鼠脊髓組織 P2X7R、NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表達(dá)。從P2X7受體介導(dǎo)NLRP3炎癥小體活化角度揭示夾脊電針改善SCI大鼠炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:(1)BBB評分法觀察各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能:Sham組大鼠術(shù)后未見明顯運(yùn)動(dòng)功能障礙,術(shù)后3d、7dBBB評分均為21分。Model組大鼠術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重的后肢運(yùn)動(dòng)功能障礙,術(shù)后3d、7dBBB評分均明顯降低,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。EA組大鼠術(shù)后3d、7dBBB評分有所升高,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)HE染色觀察各組大鼠脊髓組織病理形態(tài)學(xué)變化:Sham組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)完整,灰質(zhì)和白質(zhì)界限清晰,細(xì)胞核形態(tài)正常,核仁大而清晰,未見炎性細(xì)胞浸潤、出血壞死、組織水腫等。Model組3d時(shí)大鼠脊髓組織可見明顯斑片狀出血,組織疏松,有空泡形成,僅見殘存的神經(jīng)細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)改變明顯,胞體變小,胞核固縮,可見大量炎性細(xì)胞浸潤,可見部分漿細(xì)胞呈核固縮、核染色加深,偏于細(xì)胞一側(cè),膠質(zhì)細(xì)胞增多。EA組3d時(shí)大鼠脊髓組織病理改變與Model組類似,可見點(diǎn)片狀小出血灶,組織疏松,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較Model組增多,炎性細(xì)胞浸潤及膠質(zhì)細(xì)胞增多情況較Model組減輕。Model組7d時(shí)脊髓組織疏松嚴(yán)重,大量空泡形成,白質(zhì)呈空泡退變樣變化,殘存神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)一步減少,大量炎性細(xì)胞浸潤及膠質(zhì)細(xì)胞增生。EA組7d時(shí)可見組織結(jié)構(gòu)趨于完整,灰質(zhì)和白質(zhì)界限隱約可見,組織空泡少見,炎性細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞減少,取而代之以大量形狀不規(guī)則的神經(jīng)細(xì)胞,胞體及胞核正常。實(shí)驗(yàn)二:ELISA法檢測各組大鼠脊髓組織IL-1 8和IL-1β表達(dá)情況:Sham組大鼠脊髓組織可見少量IL-18和IL-lβ表達(dá),且術(shù)后3d、7d維持在穩(wěn)定水平。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),模型組大鼠脊髓組織IL-18和IL-1β表達(dá)升高,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。給予夾脊電針治療后,EA組大鼠脊髓組織IL-18和IL-lβ表達(dá)下降,術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn),與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)三:IHC檢測各組大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1表達(dá)情況:Sham組大鼠脊髓組織可見少量NLRP3、ASC、cleaved caspase-1在胞漿中呈棕黃色陽性表達(dá),且術(shù)后3d、7d維持在穩(wěn)定水平。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),模型組大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1陽性細(xì)胞平均光密度值升高,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。給予夾脊電針治療后,EA組大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1陽性細(xì)胞平均光密度值下降,術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)四:(1)IHC檢測各組大鼠脊髓組織P2X7R表達(dá)情況:Sham組大鼠脊髓組織可見少量P2X7R在胞漿中呈棕黃色陽性表達(dá),且術(shù)后3d、7d維持在穩(wěn)定水平。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),Model組大鼠脊髓組織P2X7R陽性細(xì)胞平均光密度值升高,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn),EA組大鼠脊髓組織P2X7R陽性細(xì)胞平均光密度值降低,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),BBG組大鼠脊髓組織P2X7R陽性細(xì)胞平均光密度值降低,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)Western blot檢測各組大鼠脊髓組織P2X7R、NLRP3、ASC和cleaved caspase-1蛋白表達(dá)情況Western blot檢測各組大鼠脊髓組織P2X7R蛋白表達(dá)情況:Sham組大鼠脊髓組織可見少量P2X7R蛋白表達(dá),且術(shù)后3d、7d維持在穩(wěn)定水平。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),Model組大鼠脊髓組織P2X7R蛋白表達(dá)升高,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn),EA組大鼠脊髓組織P2X7R蛋白表達(dá)降低,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),BBG組大鼠脊髓組織P2X7R蛋白表達(dá)降低,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot 檢測各組大鼠脊髓組織 NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表達(dá)情況:Sham組大鼠脊髓組織可見少量NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表達(dá),且術(shù)后3d、7d維持在穩(wěn)定水平。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),Model組大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表達(dá)升高,與Sham組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后3d、7d時(shí)間點(diǎn),EA組、BBG組大鼠脊髓組織NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表達(dá)降低,與Model組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)夾脊電針能夠改善SCI大鼠脊髓組織炎性損傷,促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù);(2)夾脊電針能夠下調(diào)SCI大鼠脊髓組織IL-18和IL-1β表達(dá),抑制微環(huán)境炎癥反應(yīng);(3)夾脊電針能夠抑制SCI大鼠脊髓組織NLRP3炎癥小體過度活化,下調(diào)促炎性因子的表達(dá);(4)夾脊電針可能通過調(diào)控SCI大鼠脊髓組織P2X7R表達(dá),抑制NLRP3炎癥小體過度活化,改善SCI大鼠炎性損傷。
【圖文】：

組７ｄ時(shí)可見組織結(jié)構(gòu)趨于完整，灰質(zhì)和白質(zhì)界限隱約可見，組織空泡少見，逡逑炎性細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞減少，取而代之以大量形狀不規(guī)則的神經(jīng)細(xì)胞，胞體逡逑及胞核正常。見圖２。逡逑Ｓｈａｍ邐Ｍｏｄｅｌ邐ＥＡ逡逑ｍｍｍ逡逑■ａｍ逡逑圖２各組大鼠脊髓組織ＨＥ染色檢測結(jié)果（２０0ｘ）逡逑注：黑色箭頭所示為神經(jīng)細(xì)胞；白色箭頭所示為炎性細(xì)胞；紅色箭頭所示為組織空逡逑泡。逡逑３９逡逑

差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／＞＜0．０５）。以上結(jié)果表明，脊髓損傷后大鼠脊髓組逡逑織促炎細(xì)胞因子ＩＬ－１８表達(dá)升高，可能參與了脊髓損傷后炎癥反應(yīng)，，給予逡逑夾脊電針治療能夠下調(diào)ＩＬ－１８表達(dá)，改善炎癥損傷。見表２、圖３。逡逑表２各組大鼠脊髓組織丨Ｌ－１８表達(dá)（ｐｇ／ｍｇ邋）逡逑組別邐ｎ邐３ｄ邐Ｔｄ邐逡逑Ｓｈａｍ邋組邐６邐６８．３５±１７．４０邐６９．０８±１８．２０逡逑Ｍｏｄｅｌ邋組邐６邐２６３．９７±３６＿６５＃邐２９７．５３土３１．３５＃逡逑ＥＡ邋組邐６邐２１９．０７±１３．２５＃邐１６５．０４±邋１９．６３＃＊逡逑Ｆ邐９０．４３８邐１３９．３７５逡逑邐Ｐ邐＜０．００１邐＜０．００１邐逡逑注：＂ＰＣＯ．Ｏ〗，與Ｓｈａｎｉ組比較；？ＰＣＯ．ＯＳ，與Ｍｏｄｅｌ組比較。逡逑４００１逡逑■■Ｓｈａｍ逡逑＃邐ｆ邐ｆｌｉ邋Ｍｏｄｅｌ逡逑３００－邐ｔ邐丨邐「ａ逡逑ｇ邐Ｔ邐＿邐＊邋ＥＡ逡逑Ｉ＂０＇邐＂邋Ｉ邋基逡逑Ｈｉ邋＿逡逑３ｄ邐７ｄ逡逑圖３各組大鼠脊毮組織丨Ｌ－】８表達(dá)（ｎ＝６）逡逑注：０．０５，與Ｓｈａｍ組比較；＊尸＜０．０５，與Ｍｏｄｅ丨組比較。逡逑４３逡逑
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R245;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 虞莉青;曹蓮瑛;謝菁;施茵;;電針聯(lián)合克羅米芬干預(yù)多囊卵巢綜合征促排卵助孕的療效研究[J];中國針灸;2018年03期

2 阮智;馬輝;陳磊;陳文禮;李燕;;丹參注射液聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂輔助治療康復(fù)期脊髓損傷患者的臨床療效及機(jī)制[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2018年07期

3 李向哲;王燦;吳勤峰;王彤;;脊髓損傷后腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子神經(jīng)生物學(xué)效應(yīng)的研究進(jìn)展[J];中國康復(fù)理論與實(shí)踐;2018年02期

4 偶禹萍;;夾脊電針療法聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練對不完全性脊髓損傷后雙下肢運(yùn)動(dòng)功能的影響[J];四川中醫(yī);2018年02期

5 楊林;徐軍美;王亞平;王鑫;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白2/4在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用及其研究進(jìn)展[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2018年02期

6 宋寶;李華東;李梅梅;;瞬時(shí)強(qiáng)電針結(jié)合腰椎側(cè)扳法治療腰椎間盤突出癥下肢麻木31例[J];中國針灸;2018年02期

7 方潔;;不同劑量右美托咪定對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織TNF-α、IL-1β及ICAM-1表達(dá)的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2018年03期

8 黃昊;王訓(xùn);吳靜;;針刺結(jié)合隔藥餅灸治療脊髓損傷神經(jīng)源性膀胱疾病臨床觀察[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2018年02期

9 周全;李海霞;王麗;劉仁斌;趙光桓;;益氣養(yǎng)陰活血湯對早期糖尿病腎病患者血清IL-17A、IL-18、TNF-α的影響[J];中藥材;2018年02期

10 金炳旭;符文杰;李諾;辛志雄;劉陳;;電針頭穴對腦癱患兒康復(fù)療效優(yōu)化參數(shù)研究[J];中國針灸;2018年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 馬睿杰;孫連珠;聶小峰;何克林;肖婷;朱城洪;;夾脊電針干預(yù)脊髓損傷大鼠OMgp表達(dá)的研究[A];2013浙江省針灸學(xué)會(huì)年會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 綦雪巍;夾脊電針聯(lián)合MP調(diào)控NMDAR/Calpain通路相關(guān)蛋白抑制ASCI大鼠微環(huán)境神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用機(jī)制研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 紀(jì)瑞華;P2X7受體在脊髓缺血再灌注損傷中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 霍會(huì)霞;頭電針配合夾脊電針治療脊髓損傷后下肢運(yùn)動(dòng)功能障礙的臨床觀察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 高瑜;夾脊電針治療腰椎間盤突出癥療效觀察及其對兔退變腰椎間盤BMP-2表達(dá)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2014年

本文編號：2631027