【摘要】：生物樣品成分復(fù)雜、珍貴、稀缺、易失活,給生物樣品分析帶來了極大挑戰(zhàn)。因而生物分析對(duì)分析方法的靈敏度和選擇性都提出了更高的要求,即分析方法要具備簡(jiǎn)便、高效、樣品用量少、受基質(zhì)干擾程度小等特點(diǎn)。固相微萃取(SPME)具有樣品用量少、萃取效率高、選擇性高等特點(diǎn),與高效液相色譜(HPLC)技術(shù)聯(lián)用適用于多種復(fù)雜生物體系分析。生物傳感技術(shù)具有不需樣品分離、高靈敏、分析快速等特點(diǎn),適用于特征生物分子的分析。針對(duì)血藥定量分析及腫瘤生物標(biāo)志物分析兩大基本生物分析問題,本論文分別建立了新型固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用方法和熒光生物傳感器。主要研究?jī)?nèi)容如下:1.通過原位聚合法,以微量吸頭為載體制備聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(MAA-co-EGDMA)整體小柱用于水樣及血漿中育亨賓微萃取。在聚合物的制備過程中,對(duì)制備條件進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化。甲基丙烯酸(MAA)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)分別作為功能單體和交聯(lián)劑,二者摩爾比為1:6;甲醇-二甲基亞砜(7:3)作為混合致孔劑。同時(shí),對(duì)聚合物的萃取條件包括洗滌溶劑、上樣速率、上樣體積和樣品溶液pH分別進(jìn)行了優(yōu)化,以期獲得對(duì)育亨賓良好的萃取效果;最后與HPLC聯(lián)用,用于血漿中育亨賓定量分析。結(jié)果表明,建立的方法靈敏度好,檢測(cè)限低至0.5 ng·mL~(-1);在1.0~2000 ng·mL~(-1)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r~2=0.998),方法重復(fù)性良好(RSD%為2.5%)。用于血漿中育亨賓定量分析,回收率良好(97.9~103.8%)。2.上皮細(xì)胞粘附分子(EpCAM)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要作用,被認(rèn)為是腫瘤診斷、預(yù)后和治療的一種腫瘤信號(hào)分子之一。基于適配體與目標(biāo)分子的特異性識(shí)別結(jié)合能力以及toehold輔助的DNA循環(huán)擴(kuò)增原理,我們建立了一種用于EpCAM靈敏檢測(cè)的無酶熒光生物傳感器。當(dāng)目標(biāo)分子EpCAM存在時(shí),由于其與適配體的特異性結(jié)合,探針a從適配體/探針a復(fù)合物釋放,引發(fā)toehold介導(dǎo)的鏈置換反應(yīng)。通過探針a的循環(huán)利用,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)擴(kuò)增。本方法用于EpCAM檢測(cè)獲得了良好的選擇性和較高的靈敏度,檢測(cè)限低至0.1 ng·mL~(-1)。同時(shí),該方法成功用于加標(biāo)人血清中EpCAM的檢測(cè),回收率在97.9-103.8%之間。此外,通過選擇相應(yīng)的適配體,該方法還可拓展應(yīng)用于其他目標(biāo)物的靈敏檢測(cè)。
【圖文】：

圖 2-1 育亨賓（a）和吲哚（b）化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig. 2-1 The chemical structures of yohimbine (a) and indole (b，， 已有 HPLC[24]、LC-MS[25, 26]及 UPLC-MS[27]進(jìn)行育亨賓分獲得了較低的檢測(cè)限。然而，生物樣品（如血液）含有大量

圖 2-2 聚（MAA-co-EGDMA）整體柱的制備及萃取流程示意圖Fig. 2-2 Schematic diagrams of preparation processes and extraction procedures.2.2.4 固相微萃取
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2624393