【摘要】：1.呼吸道感染病人臨床分離c KP和hv KP的毒力基因、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、血清殺菌效果與生物膜形成的關(guān)系背景:臨床常見的肺炎克雷伯菌被醫(yī)生和微生物學(xué)家稱之為普通肺炎克雷伯菌(c KP)。高毒力肺炎克雷伯菌(hv KP)以莢膜多糖等為主要毒力因子,具有較強(qiáng)的抗血清殺傷作用的能力和生物膜形成能力。本研收集呼吸道感染病人臨床分離的c KP和hv KP菌株,檢測(cè)毒力基因、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、血清殺菌效果與生物膜形成的關(guān)系。材料和方法:本實(shí)驗(yàn)共收集到肺炎克雷伯菌96株,分離于呼吸道感染患者的痰液。對(duì)菌株進(jìn)行了拉絲試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)和ESBL確證試驗(yàn)。PCR反應(yīng)檢測(cè)毒力基因。NHS檢測(cè)血清殺菌作用,微孔板法檢測(cè)生物膜形成能力。結(jié)果:96株臨床分離肺炎克雷伯菌株有39株(40.6%)通過拉絲試驗(yàn)被確定hv KP菌株,57株為c KP菌株。藥敏實(shí)驗(yàn)顯示,c KP菌株的耐藥程度明顯高于hv KP株。c KP株攜帶ESBL的菌株數(shù)量(28/57[49.1%])高于hv KP株(11/39[28.2%])。此外,在c KP菌株中檢測(cè)到一種或多種類型的ESBL基因,而在hv KP菌株只檢測(cè)到單一的ESBL基因。在hv KP菌株中多種肺炎克雷伯菌毒力基因如K1、K2、Rmp A、Uge、Kfu和產(chǎn)氣菌素等的檢出率高于c KP菌株。但是,FIM-1基因和Mr KD3基因的檢出率沒有很大差異。在c KP株和hv KP株中,ESBL的產(chǎn)出與生物膜形成(both P0.05)密切相關(guān),與血清殺菌作用(both P0.05)也高度相關(guān)。但是,在產(chǎn)生ESBL的c KP菌株和hv KP菌株之間生物膜形成和血清殺菌作用沒有表現(xiàn)明顯差異(both P0.05)。結(jié)論:雖然hv KP株中包含更多的毒力基因,但與產(chǎn)生ESBL的c KP菌株相比,生物膜形成能力和血清殺菌作用并沒有任何明顯的區(qū)別。2.測(cè)定水楊酸鈉和N-乙酰半胱氨酸對(duì)莢膜多糖生物合成、生物膜形成以及K1型和K2型hm Kp菌株已形成的生物膜的影響背景:肺炎克雷伯菌攜帶大量的CPS能防止細(xì)菌免受吞噬細(xì)胞的吞噬和血清因子的殺傷作用并且可以富集細(xì)菌形成生物膜。因此,我們需要一個(gè)可以減少CPS產(chǎn)生的一種化學(xué)藥劑,可以作為hv KP細(xì)菌感染的一個(gè)有效的輔助治療手段。實(shí)驗(yàn)的主要目的是評(píng)估水楊酸鈉和N-乙酰半胱氨酸對(duì)莢膜多糖生物合成、生物膜形成以及K1型和K2型hv KP菌株已形成的生物膜的影響。材料和方法:臨床分離hv KP的K1和K2型菌株被用于以下研究:SAL和NAC在高黏液表型肺炎克雷伯菌、CPS形成、K1和K2基因表達(dá)、生物膜形成和對(duì)已形成的生物膜的影響。結(jié)果:SAL可以明顯降低細(xì)菌黏性和CPS濃度。此外,實(shí)時(shí)定量PCR分析表明,SAL下調(diào)了CPS合成基因的m RNA水平。而NAC既不影響細(xì)菌黏度也不影響CPS合成基因的表達(dá)。SAL和NAC都可以抑制生物膜形成并清除已成熟的生物。SAL在濃度為48%(5μg/ml)和84%(100μg/ml)時(shí)可以抑制生物膜形成,在濃度12%(5μg/ml)和濃度51%(100μg/ml)時(shí)可以清除已成熟的生物膜。NAC在濃度為9%和26%(0.5 and 1 mg/ml)時(shí)可以抑制生物膜的形成,在濃度38%和49%(0.5and 1 mg/ml)時(shí)可以清除已成熟的生物膜�？梢�,比起抑制生物膜形成,NAC對(duì)成熟生物膜的清除作用占主導(dǎo)地位。SAL和NAC聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于抑制生物膜的合成和對(duì)成熟生物膜的清除作用有更加顯著的效果。結(jié)論:SAL可以抑制hv KP菌株生物膜的形成但是對(duì)于已成熟生物膜的清除作用較小。NAC可以很好的破壞已成熟的hv KP株生物膜但是對(duì)于抑制生物膜的形成作用較小。因此,SAL和NAC的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于抑制生物膜形成和清除已成熟生物膜兩方面都有很好的效果。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2624437