【摘要】：目的以弓形蟲(chóng)ME-49感染人T白血病細(xì)胞株Jurkat T細(xì)胞和Molt-4 T細(xì)胞為模型,以NF-κB及其相關(guān)調(diào)控蛋白為研究對(duì)象,分析NF-κB信號(hào)通路中調(diào)控蛋白A20在弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)人白血病T細(xì)胞株增殖和凋亡中的作用機(jī)制以及ABIN1蛋白對(duì)Caspase8蛋白的調(diào)控作用,為弓形蟲(chóng)感染誘導(dǎo)人白血病T細(xì)胞株凋亡的機(jī)制提供較為明確的理論依據(jù)。方法1.Tunel,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Jurkat T與Molt-4 T細(xì)胞凋亡情況。2.免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)pNF-κB,A20,ABIN1的蛋白表達(dá)水平。3.慢病毒shRNA分別敲低Jurkat T與Molt-4 T細(xì)胞的A20與ABIN1基因,結(jié)合Western blotting技術(shù)檢測(cè)敲低后各蛋白表達(dá)情況。4.ABIN1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入Jurkat T與Molt-4 T細(xì)胞,結(jié)合Western blotting技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)后各蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1.在一定數(shù)量的弓形蟲(chóng)ME-49速殖子的作用下,Jurkat T與Molt-4 T細(xì)胞的增殖效應(yīng)被抑制,凋亡水平出現(xiàn)明顯增加,且隨速殖子數(shù)量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出現(xiàn)顯著增加。2.在弓形蟲(chóng)ME-49速殖子的作用下,Jurkat T細(xì)胞中的pNF-κB及ABIN1蛋白表達(dá)水平隨速殖子數(shù)量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出現(xiàn)顯著下調(diào)(P0.05),A20表達(dá)水平隨速殖子數(shù)量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而顯著上調(diào)(P0.05),Molt-4 T細(xì)胞中也出現(xiàn)類似的變化。3.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T細(xì)胞中的A20基因后,A20蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)顯著下調(diào),在數(shù)量為5×10~6的弓形蟲(chóng)速殖子的作用下,Jurkat T細(xì)胞pNF-κB以及ABIN1蛋白水平出現(xiàn)上調(diào)(P0.05),凋亡起始蛋白Caspase-8水平出現(xiàn)下調(diào)(P0.05),并且細(xì)胞凋亡水平出現(xiàn)下降,Molt-4 T細(xì)胞中也出現(xiàn)類似的變化。4.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T細(xì)胞中的ABIN1基因后,ABIN1蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)顯著下調(diào)(P0.05),在數(shù)量為5×10~6的弓形蟲(chóng)速殖子的作用下,Jurkat T細(xì)胞Caspase-8蛋白水平出現(xiàn)明顯上調(diào)(P0.05),并且細(xì)胞凋亡水平也出現(xiàn)明顯上升,Molt-4 T細(xì)胞中也出現(xiàn)類似的變化。5.將ABIN1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入Jurkat T細(xì)胞后,ABIN1蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)明顯上調(diào)(P0.05),在數(shù)量為5×10~6的弓形蟲(chóng)速殖子的作用下,Jurkat T細(xì)胞Caspase-8蛋白水平出現(xiàn)明顯下調(diào)(P0.05),并且細(xì)胞凋亡水平也出現(xiàn)明顯下降,Molt-4 T細(xì)胞中也出現(xiàn)類似的變化。結(jié)論1.ME-49型弓形蟲(chóng)感染下調(diào)T細(xì)胞株pNF-κB的表達(dá)水平,抑制T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其出現(xiàn)凋亡。2.ME-49型弓形蟲(chóng)上調(diào)A20蛋白水平來(lái)抑制NF-κB的活化,并下調(diào)ABIN1的表達(dá)水平。3.增加ABIN1蛋白可以下調(diào)Caspase-8蛋白的表達(dá)水平,并抵抗弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖 1-1.A20 結(jié)合 ABIN1 蛋白抑制效應(yīng)機(jī)制20 與細(xì)胞內(nèi)微生物感染A20 在 T、B 細(xì)胞中的表達(dá)差異20 蛋白在淋巴細(xì)胞中的分布存在明顯的差異。在 B 細(xì)胞中，尤其在 B 細(xì)胞淋巴達(dá)水平常呈低表達(dá)或缺失狀態(tài)，表現(xiàn)為誘導(dǎo)性表達(dá)[12-13]。當(dāng)外源性抗原，淋巴刺激 B 細(xì)胞時(shí)，B 細(xì)胞能大量誘導(dǎo) A20 合成，這往往與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[14]。，A20 水平比較穩(wěn)定，表現(xiàn)為組成性表達(dá)，影響著 T 細(xì)胞的增殖和分化[15]。當(dāng)活劑如 PHA、CD28 刺激 T 細(xì)胞后，A20 蛋白表達(dá)水平會(huì)顯著下調(diào)，這可能與ALT1（黏膜相關(guān)淋巴組織，Mucosal-associated lymphoid tissue）對(duì) A20 的切割們先前的研究證明伊馬替尼刺激后 T 細(xì)胞 A20 蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)上調(diào)，且 T

圖 1-2.A20 與 ABIN1 在不同治療模型中的表達(dá)水平20 的促凋亡效應(yīng) 不能直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡，但能通過(guò)抑制 NF-κB 相關(guān)抗凋亡蛋白表達(dá)間人發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞激活劑 PMA/IO 能上調(diào) A20 水平并誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋時(shí)間與 A20 蛋白表達(dá)量及細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)。對(duì)凋亡抑制蛋白 suA/IO 能下調(diào)其表達(dá)水平，并在 A20 被沉默后 survivin 表達(dá)水平出現(xiàn)上過(guò)下調(diào) survivin 表達(dá)水平來(lái)發(fā)揮間接促凋亡效應(yīng)。Kool[17]等發(fā)現(xiàn) A2中 CD40L 和 RANKL 等促增殖信號(hào)通路的敏感性顯著提高，并且凋 Bcl-x 的表達(dá)水平也在 A20 缺失的情況下明顯上調(diào)。同時(shí)，在缺乏 A胞中，，傳統(tǒng)和雙陰性 T 細(xì)胞出現(xiàn)自發(fā)性增殖，且能轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂?IFN-這些都與 A20 的缺失導(dǎo)致 NF-κB 過(guò)度活化相關(guān)。另外，Storz[18]等人
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 韓宇逸;張英;顧國(guó)平;尤建良;徐明;;惡性腫瘤患者NK細(xì)胞免疫狀態(tài)與弓形蟲(chóng)感染關(guān)系的研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2012年08期

2 武欣;孫黎;張力;劉正泉;羅強(qiáng);張林西;;弓形蟲(chóng)對(duì)4種腫瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2012年02期

3 楊占軍,謝順清,呂曉嫻;惡性腫瘤患者并發(fā)弓形蟲(chóng)感染抽樣調(diào)查[J];醫(yī)藥論壇雜志;2005年01期

本文編號(hào)：2624248