【摘要】：【目的】利用Red同源重組系統(tǒng),通過二步PCR法建立一種適合鼠疫耶爾森菌s RNA和大片段染色體基因敲除的方法�！痉椒ā康谝徊絇CR先擴(kuò)增出目的基因的上、下游同源臂(600 1000 bp)及卡那抗性盒,再以上、下游同源臂及卡那抗性盒等摩爾混合物為模板,通過融合PCR獲得含上下游同源臂及卡那抗性盒的線性突變盒,再將此突變盒的PCR產(chǎn)物電轉(zhuǎn)到含有pKD46質(zhì)粒的鼠疫201菌株,在阿拉伯糖的誘導(dǎo)下,p KD46質(zhì)粒表達(dá)Red重組酶,促使卡那抗性盒替換目的基因,最后對(duì)獲得的重組克隆進(jìn)行PCR鑒定�！窘Y(jié)果】本研究通過兩步PCR法構(gòu)建600 1000 bp的同源臂,提高了同源重組效率,并將鼠疫菌sRNA RyhB1(108 bp)和RyhB2(106 bp)和染色體大片段47-2(10.4 kb)、47-3(21.6 kb)、47-3a(9.2 kb)及47-3b(6.1 kb)成功敲除�！窘Y(jié)論】基于Red重組系統(tǒng)構(gòu)建的二步法突變技術(shù),是一種簡(jiǎn)單、高效的精確修飾鼠疫菌s RNA及大片段染色體的方法,適合于鼠疫菌全基因組的基因敲除,為鼠疫菌基因表達(dá)與調(diào)控、致病和毒力等研究提供有力的工具。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;鼠疫譯叢1979年第1卷總目錄[J];地方病譯叢;1979年04期

2 ;美幫樭j_在黑煃江省甘南~#空投^6有鼠疫h(yuǎn)菌的小田鼠的X1告[J];科學(xué)通報(bào);1952年S1期

3 于永敏，劉進(jìn)，，王忠云;沈陽萬國(guó)鼠疫研究會(huì)始末[J];中國(guó)科技史料;1995年04期

4 申晶,楊桂榮,宋志忠,顧鋒;鼠疫菌通過植物后營(yíng)養(yǎng)需求的研究[J];中國(guó)地方病防治雜志;1997年01期

5 孟昭禮;;鼠疫[J];科學(xué)大眾;1957年08期

6 俞東征;鼠疫——我們身邊的危險(xiǎn)[J];知識(shí)就是力量;2001年06期

7 谷春廣,張春華,叢顯斌,閆衛(wèi)東,徐國(guó)鑫,王忠惠,岳明祥,趙銘山,張晶仁;吉林西北部草原鼠疫菌表型性狀的研究[J];中國(guó)地方病防治雜志;2000年04期

8 唐玉珍,尹家祥,羅大文,唐永朝,曾建芬,江明;兩種鼠疫菌培養(yǎng)基現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用效果評(píng)價(jià)[J];地方病通報(bào);2001年04期

9 張濤;徐冬蕾;;鼠疫菌研究進(jìn)展[J];中國(guó)地方病防治雜志;2006年05期

10 熱娜·吐爾地;布仁明德;戴翔;劉成全;孫石;張渝疆;;新疆準(zhǔn)噶爾盆地鼠疫菌生化和毒力測(cè)定[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2006年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前9條

1 張濤;李麗;趙建華;;鼠疫研究概述[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)新發(fā)和再發(fā)傳染病2012年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

2 王信惠;阿不力米提;史建勇;布仁明德;甫拉提;安文嚴(yán);李東會(huì);木合亞提;蔣衛(wèi);廖力夫;雷剛;;灰倉鼠在新疆溫泉縣阿拉套山鼠疫自然疫源地調(diào)查中的檢菌應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

3 薛強(qiáng);王靜;鄒明強(qiáng);李錦豐;王楠;周朋;邱月明;陳彥長(zhǎng);;應(yīng)用微流控芯片快速檢測(cè)血清中鼠疫抗體[A];第三屆全國(guó)微全分析系統(tǒng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

4 戴二黑;;鼠疫耶爾森菌基因組重排譜分型的研究[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 魏東;王國(guó)治;;鼠疫F1蛋白原核分泌性表達(dá)及鑒定[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

6 常婭莉;吳智遠(yuǎn);祁芝珍;焦磊;韓少波;戴瑞霞;胡麗娜;卜培英;王秉翔;;鼠疫基因工程疫苗有穩(wěn)定的免疫學(xué)應(yīng)答和保護(hù)[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

7 陳貴春;海榮;張志凱;董黎;姚光海;龔曉俊;劉昭兵;黃紅武;;貴州省鼠疫耶爾森菌生物學(xué)特征研究[A];貴州省科學(xué)技術(shù)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文集（2004年度）[C];2004年

8 宋亞軍;;鼠疫耶爾森氏菌比較與進(jìn)化基因組學(xué)研究[A];2006中國(guó)微生物學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

9 董興齊;張洪英;彭和碧;Chu C.May;;鼠疫菌—新質(zhì)粒的限制性酶切圖譜[A];西部大開發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 前屆衛(wèi)生部鼠疫專家咨詢委員會(huì)委員 樊振亞教授;鼠疫：可防 可控 可治[N];保健時(shí)報(bào);2005年

2 李偉;中蒙聯(lián)手開展鼠疫等病原監(jiān)測(cè)研究[N];中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào);2007年

3 馬曉華;鼠疫之戰(zhàn)[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2009年

4 崔尚金;聚焦老而不朽的人畜共患病：鼠疫[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

5 賀雄 北京市疾控中心副主任 夏連續(xù) 劉汀;鼠疫來臨科學(xué)防控不恐慌[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 金振婭;嚴(yán)防鼠疫[N];光明日?qǐng)?bào);2010年

7 楊順義;鼠疫與旅行[N];中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào)(中國(guó)出入境檢驗(yàn)疫報(bào));2002年

8 自治區(qū)地方病防治研究所供稿;提高防護(hù)意識(shí) 消除鼠疫危害[N];西藏日?qǐng)?bào);2003年

9 崔尚金;聚焦老而不朽的人畜共患�。菏笠遊N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

10 記者 樂紹延;731部隊(duì)研制細(xì)菌武器新證據(jù)被發(fā)現(xiàn)[N];人民日?qǐng)?bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 郭辰儀;鼠疫自然疫源地局部生態(tài)與鼠疫菌基因組變異的關(guān)聯(lián)分析[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

2 李艷君;鼠疫耶爾森氏菌基因組多態(tài)性研究及快速鑒定溯源系統(tǒng)的建立[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

3 周蕾;鼠疫耶爾森氏菌密度感應(yīng)系統(tǒng)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

4 楊慧盈;一、鼠疫菌毒力相關(guān)蛋白與人蛋白相互作用的初步研究 二、鼠疫菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)內(nèi)蛋白相互作用及LcrG調(diào)控的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

5 李蓓;鼠疫耶爾森氏菌候選疫苗靶標(biāo)的篩選與初步驗(yàn)證[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 譚亞芳;鼠疫耶爾森氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白YopK在致病機(jī)制中的作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

7 戴二黑;鼠疫耶爾森氏菌基因分型與適應(yīng)性微進(jìn)化研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

8 畢玉晶;鼠疫耶爾森氏菌YscW對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞生物效應(yīng)的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

9 柯躍華;鼠疫菌蛋白YpkA和人蛋白VASP的相互作用和功能研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

10 曲識(shí);鼠疫菌毒力調(diào)節(jié)因子Hfq及CRP作用機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊明新;近代福建鼠疫研究[D];福建師范大學(xué);2006年

2 尹可欣;基于鞭毛蛋白佐劑的鼠疫炭疽聯(lián)合疫苗初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

3 張皙;東北解放區(qū)鼠疫流行與防治述論（1945—1949）[D];吉林大學(xué);2016年

4 范艷曉;鼠疫耶爾森氏菌降解其分泌的鼠毒素研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

5 王曉晨;基于上轉(zhuǎn)發(fā)光技術(shù)對(duì)鼠疫菌在感染鼠臟器中的分布及致病關(guān)聯(lián)的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 王金龍;戰(zhàn)后中蘇合作下的蒙東地區(qū)鼠疫防治[D];廣西民族大學(xué);2016年

7 劉軼然;示蹤鼠疫菌構(gòu)建及吞噬細(xì)胞對(duì)其吞噬能力的觀察[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

8 姜慧;1942年河套地區(qū)鼠疫研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2012年

9 王娜;中國(guó)鼠疫菌單核苷酸多態(tài)性研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2011年

10 尤敬民;1911年直隸鼠疫防治研究[D];河北師范大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2623059