本文關(guān)鍵詞：BMSCs對(duì)早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷模型腦內(nèi)炎癥環(huán)境的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植對(duì)早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷模型大鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)水平及活化小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的影響,同時(shí)評(píng)估大鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)行為功能。探討B(tài)MSCs修復(fù)早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的可能機(jī)制。方法：1.取EGFP (enhanced green fluorescent protein, EGFP)轉(zhuǎn)基因大鼠的脛、股骨骨髓,采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)、純化BMSCs;熒光倒置顯微鏡下觀察干細(xì)胞形態(tài)；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表型分子；CCK-8法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并與野生型BMSCs增殖情況相比較；分別向成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定EGFP-BMSCs;2.將3日齡清潔級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為三組：WMD模型組、BMSCs移植組和假手術(shù)組。WMD模型組和BMSCs移植組大鼠經(jīng)異氟烷麻醉后予雙線結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈并吸入氧濃度為6%的氧氮混合氣體2 h,制作早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷模型。假手術(shù)組大鼠麻醉后僅游離左側(cè)頸總動(dòng)脈,不做缺血缺氧處理。BMSCs移植組造模后經(jīng)左側(cè)腦室定位注射EGFP-BMSCs懸液2 μl(含細(xì)胞2×105個(gè)),WMD模型組造模后經(jīng)左側(cè)腦室定位注射2μlPBS,假手術(shù)組不予顱內(nèi)注射；3.干預(yù)7d后,采用HE染色法觀察腦組織病理改變、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠腦中ED-1陽性細(xì)胞數(shù)；干預(yù)7d、27d后,采用免疫熒光法檢測(cè)EGFP-BMSCs在大鼠腦部的定植情況；在分別干預(yù)6h、12 h、24 h、48 h、7 d后,采用ELISA和RT-PCR檢測(cè)各組大鼠腦組織中TNF-α、IL-1β含量及mRNA的表達(dá)水平；4.隨訪觀察大鼠至術(shù)后27d后,稱量并記錄術(shù)前、術(shù)后24h、48h、7d、27d的實(shí)驗(yàn)動(dòng)的體重,并在術(shù)后27d進(jìn)行動(dòng)物神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)評(píng)估各組大鼠的神經(jīng)功能情況；5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。正態(tài)分布計(jì)量資料以x±s表示,組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.獲得穩(wěn)定表達(dá)EGFP的BMSCs,以長(zhǎng)梭形為主,融合后呈漩渦狀排列；生長(zhǎng)曲線示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,與野生型BMSCs比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.023,P=0.982)；細(xì)胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表達(dá)率分別為99.4%、96.4%、0.171%、0.049%、0.038%；成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)后,分別予以油紅O、茜素紅、甲苯胺藍(lán)染色,結(jié)果均呈陽性；2.干預(yù)7d后,HE染色結(jié)果顯示W(wǎng)MD模型組的大鼠腦白質(zhì)區(qū)見部分細(xì)胞變性、壞死；BMSCs移植組的大鼠腦白質(zhì)區(qū)未見明顯細(xì)胞水腫、變性和壞死；假手術(shù)組大鼠腦部未見明顯異常。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示W(wǎng)MD模型組的大鼠腦內(nèi)ED-1陽性細(xì)胞數(shù)明顯多于BMSCs移植組,假手術(shù)組明顯少于BMSCs移植組和WMD模型組(LSD檢驗(yàn),P值均0.05)。免疫熒光觀察顯示EGFP-BMSCs存活并定植于腦組織,但在干預(yù)27d后,腦內(nèi)定植的細(xì)胞基本消失。干預(yù)6h、12 h、24 h、48 h和7d后,WMD模型組的大鼠腦內(nèi)TNF-α、IL-1β蛋白水平均在24 h達(dá)到峰值,隨后呈下降趨勢(shì),至7d時(shí)仍未降至正常水平；WMD模型組的大鼠在各時(shí)間點(diǎn)TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)水平顯著高于BMSCs移植組,假手術(shù)組TNF-α和IL-1p蛋白表達(dá)水平最低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(LSD檢驗(yàn),P值均0.05)。干預(yù)24 h后,WMD模型組TNF-α和IL-1β mRNA表達(dá)水平高于BMSCs移植組,假手術(shù)組表達(dá)水平明顯低于BMSCs移植組和WMD模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(LSD檢驗(yàn),P值均0.05)。3. BMSCs移植組大鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)功能發(fā)育及動(dòng)物體重較WMD模型組大鼠有所改善(LSD檢驗(yàn),P值均0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功獲得高純度、穩(wěn)定表達(dá)EGFP的BMSCs,干細(xì)胞特性不受EGFP影響,細(xì)胞定植后,示蹤效果良好；3日齡幼大鼠予缺血缺氧處理造成的腦損傷符合早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷病理學(xué)改變。BMSCs移植可以有效改善大鼠神經(jīng)功能恢復(fù),其修復(fù)缺氧缺血導(dǎo)致的腦白質(zhì)損傷可能與其抑制病變?cè)缙谛∧z質(zhì)細(xì)胞激活,通過旁分泌機(jī)制下調(diào)炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá),進(jìn)而減輕早期炎癥反應(yīng)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：早產(chǎn)兒 腦損傷 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 干細(xì)胞 炎癥因子 腦白質(zhì) 小膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 縮略詞(ABBREVIATION)11-13
• 前言13-15
• 第一章 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌效應(yīng)在修復(fù)新生兒缺氧缺血性腦損傷中的應(yīng)用15-22
• 第二章 材料與方法22-39
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組22
• 2. 主要實(shí)驗(yàn)儀器22-24
• 3. 主要實(shí)驗(yàn)試劑24-26
• 4. 主要試劑配制26-27
• 5. 實(shí)驗(yàn)方法27-39
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-45
• 1. BMSCs體外分離、培養(yǎng)與鑒定39-40
• 2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-45
• 第四章 討論45-50
• 1. BMSCS的培養(yǎng)及鑒定45-47
• 2. BMSCS移植對(duì)早產(chǎn)兒WMD模型腦內(nèi)炎癥環(huán)境的影響47-48
• 3. BMSCS移植對(duì)早產(chǎn)兒WMD模型遠(yuǎn)期神經(jīng)行為學(xué)的影響48-50
• 第五章 結(jié)論50-51
• 第六章 問題與展望51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 附圖59-62
• 致謝62-63
• 作者簡(jiǎn)介63

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本文編號(hào)：262052