【摘要】：目的存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)可以誘導(dǎo)細(xì)胞毒性和炎癥相關(guān)的反應(yīng)。然而,在產(chǎn)前胎兒中LPS參與誘導(dǎo)的心臟畸形的機(jī)制仍然是未知的。本課題利用早期雞胚為模型,探索LPS影響胚胎早期心管發(fā)育的細(xì)胞及其分子機(jī)制。方法首先對(duì)人及老鼠腸道菌群紊亂后內(nèi)毒素水平進(jìn)行檢測(cè),利用雞胚LPS處理后,HH10期觀察其心管發(fā)育情況;其次在HH7、HH10期取材,利用免疫熒光、原位雜交、Q-PCR、Western blot、電穿孔轉(zhuǎn)染-移植等方法,觀察LPS環(huán)境下胚胎早期心管發(fā)育中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá),心肌細(xì)胞遷移、分化情況,心肌細(xì)胞的增殖凋亡情況及ROS水平等的改變,探索LPS對(duì)心管發(fā)育的影響機(jī)制。并結(jié)合體外原代培養(yǎng)及H9c2細(xì)胞培養(yǎng)探索LPS誘導(dǎo)ROS水平升高參與心管畸形的機(jī)制。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)在腸道菌群紊亂的孕婦體內(nèi)內(nèi)毒素水平有升高趨勢(shì)。隨即,我們又在腸道菌群紊亂的小鼠身上得到進(jìn)一步驗(yàn)證。在雞胚HH10時(shí)期,LPS暴露增加了心管不融合的發(fā)生率�；蜣D(zhuǎn)染和組織移植的遷移軌跡表明,LPS暴露限制了心臟祖細(xì)胞向兩側(cè)生心區(qū)的細(xì)胞遷移。體外培養(yǎng)的心臟前體細(xì)胞表明LPS可以抑制細(xì)胞向周?chē)w移。從細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)中也得到了類(lèi)似的觀察結(jié)果,即使H9c2細(xì)胞暴露于LPS中培養(yǎng)。在暴露于LPS的胚胎中,Nkx2.5和GATA5的表達(dá)受到干擾,當(dāng)心管融合發(fā)生時(shí),這些基因與心肌細(xì)胞分化相關(guān)。另外,pHIS3、ccaspase3免疫組織學(xué)染色表明,在雞胚的早期心管中,細(xì)胞增殖減少,細(xì)胞凋亡增多。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞流式凋亡檢測(cè),pHIS3免疫組織染色和Hochest/PI染色得出類(lèi)似的結(jié)論。LPS暴露也導(dǎo)致了過(guò)量ROS的產(chǎn)生,這可能會(huì)損害發(fā)育中的胚胎的心臟前體細(xì)胞。最后,通過(guò)添加抗氧化劑,可以部分逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的心管不融合。結(jié)論總之,這些結(jié)果表明,在雞胚發(fā)育過(guò)程中,LPS誘導(dǎo)的心管不融合與過(guò)量的ROS產(chǎn)生相關(guān)。
【圖文】：

LPS組成

南大學(xué)碩士學(xué)位論文 腸道微生物產(chǎn)生的內(nèi)毒素增加心管不融合發(fā)生率的機(jī)制研究 HH4 期的原條開(kāi)始出現(xiàn)第一生心區(qū)的細(xì)胞，在 HH5-HH6 期時(shí)，這些細(xì)胞遷到頭部?jī)蓚?cè)的臟壁中胚層，，這兩部分被稱(chēng)為心臟新月體，而心臟新月體會(huì)發(fā)育線(xiàn)性心管[25]。在 HH7 階段，心臟前體細(xì)胞開(kāi)始從臟壁中胚層分離，通過(guò) EMT程和遷移形成雙邊性心管，此后不久，心管開(kāi)始融合，在 HH10 期，心管開(kāi)始動(dòng)[26]（圖 2）。在鼠胚發(fā)育過(guò)程中的 E7.0 天，心臟前體細(xì)胞開(kāi)始向前外側(cè)方遷移形成一個(gè)新月，新月包含兩種類(lèi)型的祖細(xì)胞:第一生心區(qū)(first heart fields，HF)和第二生心區(qū)(second heart fields，SHF)。在 E8.0 天, 來(lái)自第一生心區(qū)的心前體細(xì)胞融合在胚胎的中線(xiàn),建筑原始心管[27]。此時(shí)，心臟的原基正式形成，著胚胎的發(fā)育，心管開(kāi)始進(jìn)一步分化形成心房，心室，心臟瓣膜等一系列結(jié)構(gòu)，終形成復(fù)雜的心臟。人類(lèi)早期心管的發(fā)生與雞胚大致相似。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2619361