【摘要】：目的:載脂蛋白M(apoM)是高密度脂蛋白(HDL)的組成部分之一,且前期研究表明apoM可能通過(guò)24-脫氫膽固醇還原酶(DHCR24)途徑抑制TNF-α誘導(dǎo)的白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達(dá)。本研究旨在探究apoM是否通過(guò)DHCR24途徑發(fā)揮抗炎作用。方法:(1)應(yīng)用陰性對(duì)照慢病毒和攜帶apoM基因的慢病毒分別轉(zhuǎn)染EA.hy926細(xì)胞。獲得穩(wěn)定表達(dá)apoM的細(xì)胞株后提取總RNA和蛋白,檢測(cè)攜帶apoM基因的慢病毒感染的EA.hy926細(xì)胞(apoM~(Tg)細(xì)胞)和陰性對(duì)照慢病毒感染的EA.hy926細(xì)胞(apoM~(TgN)細(xì)胞)中apoM mRNA與蛋白表達(dá)水平。(2)將病毒轉(zhuǎn)染后的apoM~(TgN)細(xì)胞和apoM~(Tg)細(xì)胞傳代培養(yǎng),并各以6×10~6個(gè)/ml的密度均勻鋪入兩塊六孔板中(即對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組),待細(xì)胞完全貼壁后,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組中分別加入PBS與10ng/ml的TNF-α處理3h、6h,均提取總RNA檢測(cè)B類Ⅰ型清道夫受體(SR-B1)、DHCR24以及IL-1β、MCP-1的mRNA表達(dá)水平。(3)將病毒轉(zhuǎn)染后的apoM~(TgN)細(xì)胞和apoM~(Tg)細(xì)胞傳代培養(yǎng),并各以6×10~6個(gè)/ml的密度均勻鋪入四塊六孔板中(即對(duì)照組A、B與實(shí)驗(yàn)組C、D),待細(xì)胞完全貼壁后,對(duì)照組A、實(shí)驗(yàn)組C與對(duì)照組B、實(shí)驗(yàn)組D中分別加入無(wú)水乙醇與10 uM的BLT-1(SR-B1抑制劑)處理12h,然后在所有的對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組中均加入10 ng/ml的TNF-α處理6h,均提取總RNA檢測(cè)DHCR24、IL-1β、MCP-1的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:(1)apoM~(Tg)細(xì)胞中apoM mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于apoM~(TgN)細(xì)胞。(2)生理情況下或炎癥刺激作用下,apoM~(Tg)細(xì)胞中SR-B1、DHCR24 mRNA表達(dá)水平顯著高于apoM~(TgN)細(xì)胞;生理情況下,apoM~(Tg)細(xì)胞與apoM~(TgN)細(xì)胞的IL-1β、MCP-1的mRNA表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;炎癥刺激作用下,apoM~(Tg)細(xì)胞中IL-1β、MCP-1的mRNA表達(dá)水平顯著低于apoM~(TgN)細(xì)胞。(3)apoM~(Tg)細(xì)胞中DHCR24 mRNA表達(dá)水平顯著高于apoM~(TgN)細(xì)胞;apoM~(Tg)細(xì)胞經(jīng)BLT-1處理12后,DHCR24 mRNA表達(dá)水平顯著下降,而IL-1β、MCP-1的mRNA表達(dá)水平并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:apoM能顯著增加SR-B1和DHCR24的表達(dá),并且通過(guò)SR-B1受體上調(diào)DHCR24的表達(dá),然而并非通過(guò)該途徑抑制TNF-α誘導(dǎo)的IL-1β、MCP-1的表達(dá),即apoM可能通過(guò)其他途徑發(fā)揮其抗炎作用。apoM可通過(guò)SR-B1上調(diào)DHCR24發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。
【圖文】：

1.EA.hy926 細(xì)胞過(guò)表達(dá) ApoM 在生理情況或炎癥刺激條件下對(duì) SR-B1、DHCR24 mRNA 表達(dá)水平的影響應(yīng)用陰性對(duì)照慢病毒和攜帶 apoM 基因的慢病毒分別轉(zhuǎn)染 EA.hy926 細(xì)胞（購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)）（圖 1），其是一種人臍靜脈內(nèi)皮融合細(xì)胞，它是在聚乙二醇（PEG）作用下，將原代人臍靜脈細(xì)胞和 A549 細(xì)胞（人肺癌細(xì)胞株）融合，使其能無(wú)限傳代。獲得穩(wěn)定表達(dá) ApoM 的細(xì)胞株后提取總 RNA 與總蛋白，檢測(cè)攜帶 apoM 基因的慢病毒感染的 EA.hy926 細(xì)胞（apoMTg細(xì)胞）和陰性對(duì)照慢病毒感染的 EA.hy926 細(xì)胞（apoMTgN細(xì)胞）中 ApoM mRNA 與蛋白表達(dá)水平（圖 2）。將 apoMTgN細(xì)胞和 apoMTg細(xì)胞傳代培養(yǎng)，并各以 6×106個(gè)/ml 的密度均勻鋪入兩塊六孔板中（即對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組），待細(xì)胞完全貼壁后，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組中分別加入 PBS 與 10ng/ml 的 TNF-α 處理 6h，均提取總 RNA 檢測(cè) SR-B1、DHCR24 的表達(dá)水平（圖 3）。

圖 2. apoMTgN細(xì)胞與 apoMTg細(xì)胞中 ApoM mRNA 與蛋白表達(dá)水平注：EA.hy926 細(xì)胞經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后 apoMTg細(xì)胞較 apoMTgN細(xì)胞顯著過(guò)表達(dá) Apo蛋白（左），apoMTg細(xì)胞較 apoMTgN細(xì)胞顯著高表達(dá) ApoM mRNA（右），具有顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=6，，****p<0.0001）。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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1 王燦燦;王U

本文編號(hào)：2614197