本文關鍵詞：GPS2對血管發(fā)生的調控及其作用機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血管的發(fā)生不僅在機體正常發(fā)育過程中至關重要,也在諸如傷口愈合、心臟出血、腫瘤發(fā)生等疾病中發(fā)揮重要功能。血管的出現和成熟是一個極其復雜而又十分協調的過程,涉及到一系列受體的激活以及多種信號通路之間的精確調節(jié)和動態(tài)平衡。血管生成途徑及其調節(jié)機制的闡明有助于為臨床和醫(yī)藥研究提供新的診斷方案和作用靶點,為多種疾病提供新的治療手段。GPS2是G蛋白-MAPK信號通路的抑制因子,該蛋白高度保守,在人、鼠、斑馬魚等物種中都存在同源基因,小鼠與人的GPS2蛋白序列高度相似,長度均為327個氨基酸,僅存在8個氨基酸的差異。GPS2主要定位于細胞核,在細胞質中也有少量分布。GPS2在細胞核參與NCOR/SMRT轉錄抑制復合體的組裝,抑制NF-κB、AP1等轉錄因子的活性;另一方面,GPS2又可以與p300形成轉錄激活復合體,促進p53、HNF4α等轉錄因子的活性。在細胞質中,GPS2可以與TRAF2相互作用,并抑制TRAF2/Ubc13的酶活性,使得RIP1泛素化水平降低,進而JNK通路被抑制。在多種組織和細胞中均可以檢測到GPS2的表達,它以轉錄調節(jié)活性依賴與非依賴的方式參與炎癥、肥胖、胰島素耐受、膽汁酸合成、膽固醇代謝等多種生物學過程,但它在調控胚胎血管發(fā)生中的作用仍未見報道。本論文首先利用GPS2敲除小鼠模型,研究了GPS2對胚胎發(fā)育,尤其是胚胎期血管發(fā)生的影響,其次,在體外利用人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)進一步證明了GPS2對血管形成的調控作用。在對GPS2敲除小鼠的繁殖和胚胎解剖分析中,我們發(fā)現GPS2敲除小鼠胚胎致死,死亡起始時間為E10.5天。原位雜交技術及免疫熒光技術檢測結果顯示,GPS2在小鼠全胚都存在表達,Real-Time PCR結果表明GPS2在卵黃囊存在高表達。對GPS2敲除小鼠胚胎的異常表型進行分析發(fā)現GPS2敲除小鼠生長阻滯,卵黃囊血管和頭部血管發(fā)育異常,卵黃囊血管變細、分枝減少、致密性降低,頭部血管發(fā)育遲緩且無法形成成熟的血管叢。GPS2缺失能夠造成VEGF、PDGF、ANG、Notch等信號通路中的多種血管因子的表達下調。利用慢病毒在HUVEC細胞中干涉GPS2,該細胞的遷移能力和血管形成能力顯著下降。以上結果表明,GPS2在血管發(fā)生過程中有著非常重要的作用。綜上,我們發(fā)現GPS2敲除小鼠胚胎致死,死亡時間在E10.5-E14.5天,其卵黃囊血管和頭部血管發(fā)育障礙,GPS2缺失會抑制多種血管發(fā)生相關的信號通路,并且抑制體外HUVEC的遷移及成血管能力。本研究不僅拓展了對GPS2的功能認識,還可能揭示血管發(fā)生過程中新的調控機制。
【關鍵詞】：GPS2 血管生成 基因敲除 胚胎發(fā)育
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1.前言11-21
• 1.1 GPS2基因11-12
• 1.2 小鼠發(fā)育12-13
• 1.3 胚胎致死13-15
• 1.4 血管發(fā)育15-20
• 1.4.1 血管發(fā)育的程15-17
• 1.4.2 血管發(fā)育的相關調控機制17-20
• 1.5 實驗室前期工作及本研究的主要內容20-21
• 2.材料與方法21-28
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 細胞系、菌株以及質粒21
• 2.1.2 試劑21
• 2.1.3 儀器21-22
• 2.1.4 實驗動物22
• 2.2 方法22-28
• 2.2.1 小鼠基因組的提取及基因型的鑒定22
• 2.2.2 小鼠胚胎的解剖22-23
• 2.2.3 小鼠全胚原位雜交23-24
• 2.2.4 小鼠全胚免疫熒光24-25
• 2.2.5 胚胎造血分化研究25
• 2.2.6 細胞培養(yǎng)與轉染25-26
• 2.2.7 慢病毒包裝以及滴度鑒定26
• 2.2.8 慢病毒感染HUVEC細胞26
• 2.2.9 Western blot檢測26-27
• 2.2.10 細胞劃痕實驗27
• 2.2.11 Transwell實驗27
• 2.2.12 細胞成血管能力檢測27
• 2.2.13 流式檢測細胞增殖能力27-28
• 2.2.14 統(tǒng)計學分析28
• 3.結果28-42
• 3.1 GPS2基因敲除小鼠的鑒定及GPS2在小鼠胚胎中的表達情況28-30
• 3.2 GPS2基因敲除小鼠胚胎不同發(fā)育時期表型統(tǒng)計30-33
• 3.2.1 GPS2基因敲除小鼠胚胎各胚齡基因型及存活率統(tǒng)計30
• 3.2.2 GPS2敲除后小鼠卵黃囊血管異常30-32
• 3.2.3 GPS2敲除小鼠胚胎生長受阻32-33
• 3.3 GPS2敲除小鼠胚胎造血能力檢測33-34
• 3.4 GPS2敲除后小鼠卵黃囊血管發(fā)育障礙34-36
• 3.5 GPS2敲除后小鼠胚胎頭部血管發(fā)育障礙36-37
• 3.6 血管發(fā)生相關因子表達下調37-38
• 3.7 敲低GPS2抑制HUVEC的遷移能力38-41
• 3.8 敲低GPS2抑制HUVEC的成血管能力41-42
• 4.討論42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-55
• 附錄55-63
• 個人簡歷63-64
• 致謝64-66
• 綜述66-74
• 參考文獻72-74

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 徐國東;GPS2影響丙型肝炎病毒復制的分子機制研究[D];武漢大學;2013年

中國碩士學位論文全文數據庫 前2條

1 張園園;GPS2對AIB1轉錄活性的影響[D];大連理工大學;2013年

2 龐朋沙;GPS2的SUMO修飾及其相關功能的研究[D];大連理工大學;2012年

  本文關鍵詞：GPS2對血管發(fā)生的調控及其作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：260989