本文關(guān)鍵詞：江蘇省不同口岸白紋伊蚊遺傳特征分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過對(duì)不同基因型的分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行比較,選出最適合對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行鑒定和遺傳分析的分子標(biāo)記技術(shù)。并對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊進(jìn)行溯源性分析,揭示白紋伊蚊的分布與地理距離和港口地域的相關(guān)性及其遺傳特征。 方法提取江蘇省十個(gè)口岸白紋伊蚊的DNA,將提取的線粒體DNA通過PCR對(duì)CoI基因進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在MEGA上通過ClustalW Multiple alignment模塊將堿基對(duì)齊并構(gòu)建鄰近法進(jìn)化樹；將核糖體DNA的ITS基因連接到質(zhì)粒載體中,經(jīng)克隆后進(jìn)行測(cè)序,通過測(cè)序結(jié)果構(gòu)建進(jìn)化樹并進(jìn)行Mantel檢驗(yàn)；對(duì)基因組核DNA用AFLP技術(shù)進(jìn)行分析：通過高頻/低頻剪切酶(EcoRI/MseI)對(duì)核DNA進(jìn)行酶切和連接,通過優(yōu)化過的十對(duì)選擇性引物進(jìn)行再次擴(kuò)增后,經(jīng)毛細(xì)管電泳構(gòu)建“0”“1”矩陣,通過NTSYS軟件計(jì)算遺傳相似性系數(shù)和進(jìn)行Mantel檢驗(yàn),并構(gòu)建UPGMA進(jìn)化樹。通過rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析對(duì)江蘇省不同口岸的白紋伊蚊進(jìn)行同源性分析。 結(jié)果通過三種方法對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊進(jìn)行鑒定和同源性分析：1.通過對(duì)mtDNA-COI基因進(jìn)行擴(kuò)增可以很好的對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行鑒定,但同源性較高,堿基差異較少,通過進(jìn)化樹分析遺傳差異較小,對(duì)不同地區(qū)的白紋伊蚊不能被很好的區(qū)分；2.核糖體DNA的ITS基因通過克隆測(cè)序后構(gòu)建的進(jìn)化樹表明江蘇省不同口岸的白紋伊蚊基因序列分為兩支,其中,連云港的白紋伊蚊與其他地區(qū)的差異較大,單獨(dú)聚成一支；在另一支中,無錫的白紋伊蚊單獨(dú)為一支,常州、泰州、徐州和揚(yáng)州進(jìn)一步分化成一個(gè)小分支,而常州和泰州的白紋伊蚊在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分化為一個(gè)較遠(yuǎn)的小分支；3.對(duì)核DNA進(jìn)行AFLP分析,通過毛細(xì)管電泳篩選出了最適合進(jìn)行白紋伊蚊AFLP分析的十對(duì)引物組合,共擴(kuò)增396條清晰可辨的基因片段,其中包括共有的位點(diǎn)31個(gè),有差異的位點(diǎn)365個(gè),多態(tài)性百分率為92.2%,多態(tài)性位點(diǎn)豐富,能很好的對(duì)白紋伊蚊的遺傳差異進(jìn)行區(qū)分。對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊通過AFLP分析和ITS基因檢測(cè)的Mantel檢驗(yàn)結(jié)果表明,白紋伊蚊的遺傳距離與地理距離不呈線性相關(guān)。而UPGMA進(jìn)化樹在相似性系數(shù)0.66處可以將江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊分為三支,常州、淮安、南京、南通、蘇州、泰州、徐州、揚(yáng)州八個(gè)地區(qū)的白紋伊蚊為一支,無錫和連云港各自分為一支。 結(jié)論實(shí)驗(yàn)表明rDNA-ITS基因的擴(kuò)增和核DNA的AFLP分析均能對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行同源性分析,但AFLP分析是對(duì)全基因組進(jìn)行分析,能更好的反映出白紋伊蚊的遺傳差異。并揭示了不同口岸的白紋伊蚊的遺傳距離與地理距離沒有相關(guān)性,而與港口的地域性密切相關(guān),為進(jìn)一步的研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：白紋伊蚊 AFLP ITS COI 溯源分析 沃爾巴克氏體
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R384.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 注釋說明清單15-17
• 引言17-18
• 第一部分 通過三種不同的分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)江蘇不同口岸白紋伊蚊進(jìn)行遺傳特征分析18-54
• 1.1 前言18-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料21-25
• 1.2.1 蚊蟲標(biāo)本的采集21-22
• 1.2.2 主要儀器22-23
• 1.2.3 主要試劑23-24
• 1.2.4 主要溶液的配置24-25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法25-37
• 1.3.1 mtDNA-COI基因擴(kuò)增與溯源分析25-27
• 1.3.1.1 DNA的提取25-26
• 1.3.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR擴(kuò)增26-27
• 1.3.1.3 測(cè)序和溯源分析27
• 1.3.2 蚊蟲rDNA-ITS基因分析27-31
• 1.3.2.1 rDNA-ITS的PCR產(chǎn)物擴(kuò)增27-28
• 1.3.2.2 驗(yàn)證28
• 1.3.2.3 割膠純化28-29
• 1.3.2.4 連接載體29
• 1.3.2.5 化學(xué)轉(zhuǎn)化(外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌)29
• 1.3.2.6 克隆29-30
• 1.3.2.7 提取質(zhì)粒30
• 1.3.2.8 質(zhì)粒驗(yàn)證30-31
• 1.3.2.9 溯源分析31
• 1.3.2.10 遺傳距離與地理距離的Mantel檢驗(yàn)31
• 1.3.3 核DNA的AFLP分析31-37
• 1.3.3.1 接頭制備31-32
• 1.3.3.2 酶切和連接32
• 1.3.3.3 預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)32-33
• 1.3.3.4 初步對(duì)選擇性擴(kuò)增反應(yīng)引物組合進(jìn)行篩選33-35
• 1.3.3.5 選擇性擴(kuò)增反應(yīng)引物組合的二次篩選35-37
• 1.3.3.6 江蘇不同地區(qū)蚊蟲的選擇性擴(kuò)增反應(yīng)37
• 1.3.3.7 遺傳關(guān)系Mantel檢驗(yàn)和聚類分析37
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-51
• 1.4.1 mtDNA-COI基因擴(kuò)增與溯源分析37-40
• 1.4.1.1 DNA的提取結(jié)果37-38
• 1.4.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR擴(kuò)增38-39
• 1.4.1.3 測(cè)序和溯源分析39-40
• 1.4.2 蚊蟲rDNA-ITS基因測(cè)序與溯源分析40-44
• 1.4.2.1 rDNA-ITS的PCR產(chǎn)物擴(kuò)增40
• 1.4.2.2 rDNA-ITS基因的克隆40-41
• 1.4.2.3 質(zhì)粒驗(yàn)證41
• 1.4.2.4 測(cè)序和溯源分析41-44
• 1.4.3 AFLP分析44-51
• 1.4.3.1 預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)44-45
• 1.4.3.2 選擇性擴(kuò)增反應(yīng)引物組合的初步篩選45-46
• 1.4.3.3 選擇性擴(kuò)增反應(yīng)引物組合的二次篩選46-47
• 1.4.3.4 江蘇不同地區(qū)蚊蟲的選擇性擴(kuò)增反應(yīng)47-49
• 1.4.3.5 遺傳相似性系數(shù)及Mantel檢驗(yàn)49-50
• 1.4.3.6 聚類分析50-51
• 1.5 討論51-54
• 第二部分 白紋伊蚊體內(nèi)共生菌沃爾巴克氏體的研究54-62
• 2.1 前言54
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料54-56
• 2.2.1 蚊蟲標(biāo)本的采集54-55
• 2.2.2 主要儀器55
• 2.2.3 主要試劑55-56
• 2.2.4 主要溶液56
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法56-57
• 2.3.1 不同口岸白紋伊蚊mtDNA-COI基因擴(kuò)增56
• 2.3.1.1 DNA的提取56
• 2.3.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR擴(kuò)增56
• 2.3.2 不同口岸白紋伊蚊體內(nèi)Wolbachia的wsp基因擴(kuò)增56-57
• 2.3.4 Wolbachia的測(cè)序和遺傳分析57
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-61
• 2.4.1 mtDNA-COI基因擴(kuò)增與溯源分析57-59
• 2.4.1.1 DNA的提取結(jié)果57-58
• 2.4.1.2 線粒體DNA的CoI基因擴(kuò)增58-59
• 2.4.2 白紋伊蚊Wolbachia的wsp基因檢測(cè)59
• 2.4.3 檢出的白紋伊蚊Wolbachia wsp序列測(cè)定和溯源性分析59-61
• 2.5 討論61-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 附錄A 毛細(xì)管電泳結(jié)果68-72
• 附錄B PCR 2.1 vertor72-73
• 后記和致謝73-74
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果74
• 在讀研宄生期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文74
• 參與的主要課題74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 馬雅軍;吳靜;馬穎;;基于rDNA-ITS2序列的中國(guó)按蚊屬塞蚊亞屬部分種類的系統(tǒng)發(fā)育研究(雙翅目:蚊科)[J];昆蟲分類學(xué)報(bào);2011年04期

2 潘曉玲;劉起勇;奚志勇;;基于昆蟲共生菌沃爾巴克氏體的蚊媒和蚊媒病控制研究進(jìn)展[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2014年01期

  本文關(guān)鍵詞：江蘇省不同口岸白紋伊蚊遺傳特征分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260791