本文關(guān)鍵詞：多克隆抗體介導(dǎo)的獲得性ADAMTS13缺陷小鼠模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:血栓性血小板減少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)是一種臨床上少見但嚴(yán)重危及患者生命的血栓性微血管病。其主要臨床特征為血小板計(jì)數(shù)減低、微血管病性溶血性貧血、神經(jīng)精神癥狀、腎臟損害和發(fā)熱。如前三者同時(shí)存在稱之為TTP“三聯(lián)癥”,若三聯(lián)癥基礎(chǔ)上合并腎臟損害和發(fā)熱則稱之為TTP“五聯(lián)征”。TTP的基本發(fā)病機(jī)制是血漿中裂解血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)的金屬蛋白酶ADAMTS13活性的嚴(yán)重減低。根據(jù)病因和發(fā)病機(jī)制的不同,TTP可以分為遺傳性TTP(Upshaw-Schulman綜合征)和獲得性TTP。其中,遺傳性TTP的ADAMTS13活性降低是由于ADAMTS13的基因突變所致,而獲得性TTP則是由于患者血漿中存在的針對(duì)ADAMTS13的自身抗體或抑制物導(dǎo)致的ADAMTS13活性降低。在美國,每年新發(fā)獲得性TTP比例為3-10例/百萬人群。據(jù)此推算,我國每年新增的獲得性TTP患者人數(shù)應(yīng)在5000人以上。在發(fā)現(xiàn)ADAMTS13的最初一段時(shí)間很多學(xué)者認(rèn)為單獨(dú)的ADAMTS13活性缺乏可以引發(fā)TTP。但隨著研究的深入,人們逐漸對(duì)上述觀點(diǎn)產(chǎn)生了質(zhì)疑。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用抗ADAMTS13的多克隆抗體ab71550來建立獲得性ADAMTS13缺陷的129×1/Sv J系小鼠模型,以進(jìn)一步探究單獨(dú)的獲得性ADAMTS13活性缺陷是否能夠?qū)е滦∈蟀l(fā)生TTP,抑或是ADAMTS13基因敲除小鼠一樣僅僅表現(xiàn)為體內(nèi)的高凝狀態(tài)。方法:1研究對(duì)象的選取和分組:選取7只129×1/Sv J系小鼠,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組3只,對(duì)照組4只。另取1只小鼠,增加實(shí)驗(yàn)組用藥劑量重復(fù)實(shí)驗(yàn)。2觀察和檢測項(xiàng)目:小鼠神經(jīng)精神改變、小鼠外周血涂片破碎紅細(xì)胞鏡檢、微量血血小板計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度測量、ADAMTS13活性測定(FRETS-VWF86熒光底物法)、UL-VWF多聚體分析(VWF垂直電泳法)和組織病理學(xué)分析。3標(biāo)本的采集與處理:采用小鼠內(nèi)眥靜脈取血方法,以檸檬酸鈉抗凝,離心后留取血漿,-70℃凍存?zhèn)溆�。另取微量血進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度測定,同時(shí)留取外周血涂片,顯微鏡觀察有無破碎紅細(xì)胞。共計(jì)采血5次,分別留取用藥前、用藥24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)的血液標(biāo)本備用。最后一次采血結(jié)束后,將小鼠麻醉并脫頸椎處死,解剖留取肝臟、腎臟、脾臟、心臟和腦組織,并將上述組織用福爾馬林固定,備用組織病理分析。4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(包括血小板計(jì)數(shù)、ADAMTS13活性及血紅蛋白濃度)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),符合正態(tài)性分布后以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x?s)表示。兩組間采用student t-test檢驗(yàn)方法,以P值0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(抗體用藥劑量均為600ug/kg)①神經(jīng)精神癥狀:整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠均未出現(xiàn)神經(jīng)精神癥狀改變。②外周血涂片:實(shí)驗(yàn)過程中,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物外周血涂片鏡檢均未發(fā)現(xiàn)破碎紅細(xì)胞。③血小板計(jì)數(shù)相關(guān)分析:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠在用藥前、用藥24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)的血小板計(jì)數(shù)無差別(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布,方差齊,P㧐0.05)。④血紅蛋白濃度分析:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠在用藥前、用藥24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)的血紅蛋白濃度無差別(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布,方差齊,P㧐0.05)。線形圖顯示實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間范圍內(nèi)實(shí)驗(yàn)組血紅蛋白濃度變化趨勢穩(wěn)于對(duì)照組。⑤血漿ADAMTS13活性測定:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠在用藥前ADAMTS13活性測定無差別(P㧐0.05);應(yīng)用藥物24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠ADAMTS13活性出現(xiàn)差別。線形圖顯示對(duì)照組ADAMTS13活性在實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間內(nèi)無明顯波動(dòng),實(shí)驗(yàn)組ADAMTS13活性在應(yīng)用抗體48h時(shí)降至最低,低至10%以下,此后逐漸恢復(fù)。(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布,方差齊,P㧐0.05)⑥VWF多聚體分析:對(duì)照組動(dòng)物體內(nèi)不存在超大分子量VWF(UL-VWF)多聚體,而實(shí)驗(yàn)組小鼠在應(yīng)用抗體48h時(shí)出現(xiàn)UL-VWF多聚體。⑦病理組織血檢測:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的肝臟、腎臟、心臟、脾臟和腦組織的病理組織分析中均未見微血栓形成。2增加實(shí)驗(yàn)組用藥劑量(1000ug/kg)小鼠于用藥48h采血過程中出現(xiàn)死亡。實(shí)驗(yàn)過程中小鼠未出現(xiàn)神經(jīng)精神癥狀;外周血無破碎紅細(xì)胞;血紅蛋白和血小板測定未見明顯波動(dòng);ADAMTS13活性較前進(jìn)一步降低;VWF電泳顯示存在UL-VWF;病理分析亦未發(fā)現(xiàn)微血栓形成。結(jié)論:抗ADAMTS13抗體ab71550能夠抑制129×1/Sv J小鼠血漿ADAMTS13的活性,并出現(xiàn)UL-VWF多聚體,但并未誘發(fā)血小板計(jì)數(shù)減低、微血管性溶血性貧血、神經(jīng)精神癥狀以及微血栓形成等TTP的相關(guān)改變。由此推斷:單獨(dú)抗體介導(dǎo)的獲得性ADAMTS13活性缺陷小鼠并不能發(fā)生TTP,TTP的發(fā)生的可能還需要其它遺傳和(或)環(huán)境因素的參與。
【關(guān)鍵詞】：血栓性血小板減少性紫癜 血管性血友病因子 ADAMTS13 抗體 動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R554.6;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-24
• 附表24-26
• 討論26-27
• 結(jié)論27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 綜述 血栓性血小板減少性紫癜動(dòng)物模型和臨床治療進(jìn)展30-45
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡歷46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周琛;李東;張凡;李翠萍;環(huán)亞紅;宋艷智;夏素琴;廖海英;隋雪梅;盧應(yīng)連;;血漿置換聯(lián)合利妥昔單抗治療特發(fā)性血栓性血小板減少性紫癜6例療效觀察[J];臨床血液學(xué)雜志;2014年01期

  本文關(guān)鍵詞：多克隆抗體介導(dǎo)的獲得性ADAMTS13缺陷小鼠模型的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260708