發(fā)布時間：2020-03-29 05:38

【摘要】：高齡生育逐年增加已經(jīng)成為一個全球性的趨勢,而我國在2016年1月1日全面二胎政策的實施致使國內(nèi)高齡母親生育的問題尤為突出。母親高齡生育帶來的負面效應(yīng)有很多,比如子代的唐氏綜合癥、精神障礙等患病率比適齡生育更高,并且大樣本量的流行病學(xué)研究表明母親高齡生育對于子代的智力發(fā)育有負面影響。本實驗室已經(jīng)通過Morris水迷宮實驗在SD大鼠證明母親高齡生育引起子代學(xué)習(xí)記憶能力降低,但是在目前在小鼠模型上尚無相關(guān)數(shù)據(jù)。智力的發(fā)育與位于大腦丘腦與內(nèi)側(cè)顳葉之間的海馬體相關(guān),而海馬體中主要由神經(jīng)元細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞發(fā)揮其學(xué)習(xí)記憶功能。神經(jīng)元通過接受、整合、傳到和輸出信息實現(xiàn)信息的交換,可通過微管關(guān)聯(lián)蛋白2(microtubule-associated proteins 2,MAP2)標(biāo)記;而作為神經(jīng)膠質(zhì)細胞主要組成部分的星形膠質(zhì)細胞對于維持神經(jīng)元的生長、發(fā)育和生存發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,可通過膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)標(biāo)記。因此,海馬的發(fā)育或功能異常將引起學(xué)習(xí)記憶功能改變。熱休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)是一組高度保守的蛋白質(zhì),對于新生多肽的正確折疊以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成和穩(wěn)定具有重要作用。熱激同源蛋白70(heat shock cognate protein 70,HSC70)是Hsps家族的一個主要的結(jié)構(gòu)性活性成員,不同于熱休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)在細胞處于應(yīng)激環(huán)境時高表達以發(fā)揮應(yīng)激保護作用,HSC70在正常細胞中呈基礎(chǔ)性表達,從而維持細胞的基本形態(tài)和功能。HSC70在神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達,其表達隨著神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育出現(xiàn)時間和空間改變,提示其參與神經(jīng)發(fā)育。本文研究C57BL/6雌鼠高齡生育對于子代學(xué)習(xí)記憶的影響,檢測神經(jīng)發(fā)育過程中高齡生育子代海馬HSC70的表達特征,為高齡生育相關(guān)的醫(yī)學(xué)研究和生育指導(dǎo)提供新的思路。方法1.實驗動物和分組:選用清潔級C57BL/6小鼠。分別取高齡雌鼠(11月齡)和青年雌鼠(3月齡)與隨機選擇的3月齡雄鼠單獨合籠。待雌鼠懷孕后,將雄鼠與雌鼠分籠。雌鼠分娩后,將高齡雌鼠所生育仔鼠標(biāo)記為高齡組,青年雌鼠所生的仔鼠標(biāo)記為青年組。對待檢測小鼠稱重。2.Morris水迷宮檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力:小鼠出生后28天(postnatal 28,P28)為腦發(fā)育成熟期,出生后60天(postnatal 60,P60)為成年期。將仔鼠分為兩組,第一組飼養(yǎng)至P28進行水迷宮檢測,第二組飼養(yǎng)至P60進行水迷宮檢測,分別記錄其實驗前體重及定位航行實驗與空間探索實驗中的相關(guān)指標(biāo)。3.免疫組織化學(xué)熒光染色檢測海馬中HSC70蛋白表達:對P28青年組與高齡組處死后取全腦組織進行免疫組織化學(xué)染色,檢測HSC70、MAP2、GFAP在海馬區(qū)表達,在共聚焦顯微鏡下觀察并用Image-Pro Plus軟件測定熒光強度值。4.Western blot檢測發(fā)育過程中海馬Hsc70蛋白表達:青年組、高齡組出生后1、3、7、14、21、28、60天處死后取海馬組織,進行Western blot對小鼠在生長過程中海馬中Hsc70蛋白表達情況進行動態(tài)的檢測。5.Western blot檢測水迷宮訓(xùn)練前后海馬HSC70和HSP70蛋白表達:對P28青年組的小鼠水迷宮前后海馬中HSC70與HSP70的蛋白表達變化進行檢測。6.統(tǒng)計學(xué)分析:本文中所涉及的數(shù)據(jù)統(tǒng)計由SPSS17.0軟件分析。水迷宮實驗的定位航行實驗采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析。當(dāng)兩組樣本進行比較時,如果成正態(tài)分布且方差齊則運用兩獨立樣本t檢驗;成正態(tài)分布但方差不齊時運用校正t檢驗;不滿足正態(tài)分布時運用秩和檢驗。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。結(jié)果1.小鼠體重:P28青年組與高齡組小鼠體重均值分別為16.98±1.11 g和16.05±1.15 g;P60青年組與高齡組小鼠體重均值為27.21±1.64 g和26.37±1.74 g,均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.Morris水迷宮結(jié)果:定位航行實驗中隨著第1天到第6天訓(xùn)練時間延長,高齡組和青年組(P28和P60)到達平臺的潛伏期均顯著降低(P0.05)。在訓(xùn)練第6天,高齡組潛伏期在P28明顯比青年組長(P0.05),而在P60與青年組則無顯著差異(P0.05);高齡組的游泳路程在P28和P60與青年組相比均無顯著差異(P0.05)。第七天空間探索實驗時,高齡組的目標(biāo)象限時間百分比在P28和P60均顯著低于青年組(P0.05);且高齡組穿越平臺次數(shù)在P28和P60顯著低于青年組(P0.05)。3.免疫組織化學(xué)熒光染色結(jié)果:HSC70在小鼠腦內(nèi)廣泛表達,包括皮層、海馬等腦區(qū),在神經(jīng)元(MAP2陽性染色)和星形膠質(zhì)細胞(GFAP陽性染色)上均有表達,主要表達在胞漿;高齡組海馬CA3區(qū)中HSC70蛋白表達較青年組降低。4.Western blot結(jié)果:青年組與高齡組在出生后1、3、7、14、21、28、60天檢測海馬HSC70蛋白表達,隨著海馬發(fā)育HSC70蛋白表達量逐漸增加,在28天達到峰值,第60天表達量有所下降;P28高齡組海馬中HSC70蛋白表達量顯著低于青年組(P0.001),P60的青年組與高齡組海馬中HSC70蛋白表達量無顯著性差異(P0.05);P28與P60的青年組小鼠經(jīng)過水迷宮實驗后海馬中HSC70蛋白的表達量與水迷宮前均無顯著性差異(P0.05),水迷宮實驗后海馬中HSP70蛋白的表達量與水迷宮前相比顯著性增高(P0.05)。結(jié)論1.高齡雌性小鼠生育子代學(xué)習(xí)記憶能力下降。2.隨著神經(jīng)發(fā)育,小鼠海馬中HSC70表達逐漸增高,到腦發(fā)育成熟期到達最高點。3.高齡雌鼠生育的子代小鼠在腦發(fā)育成熟期海馬中HSC70表達低于青年生育子代,成年期兩者無差異。
【圖文】：

圖 1 定位航行實驗檢測逃避潛伏期A：P28 青年組與高齡組的逃避潛伏期。B：P60 青年組與高齡組的逃避潛伏期。（*：P < 0.05）B．游泳路程隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，P28 和 P60 的青年組與高齡組找到平臺的游泳距離均呈下降趨勢。P28 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2A），P60 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2B）。

圖 1 定位航行實驗檢測逃避潛伏期A：P28 青年組與高齡組的逃避潛伏期。B：P60 青年組與高齡組的逃避潛伏期。（*：P < 0.05）B．游泳路程隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，P28 和 P60 的青年組與高齡組找到平臺的游泳距離均呈下降趨勢。P28 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2A），P60 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，，圖 2B）。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R338

【參考文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 唐守現(xiàn);基于MRI的阿爾茨海默氏病海馬結(jié)構(gòu)形態(tài)和功能研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 仰園;全面二孩政策下中國人口總量的預(yù)測[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2017年

本文編號：2605534