【摘要】：高齡生育逐年增加已經(jīng)成為一個(gè)全球性的趨勢(shì),而我國在2016年1月1日全面二胎政策的實(shí)施致使國內(nèi)高齡母親生育的問題尤為突出。母親高齡生育帶來的負(fù)面效應(yīng)有很多,比如子代的唐氏綜合癥、精神障礙等患病率比適齡生育更高,并且大樣本量的流行病學(xué)研究表明母親高齡生育對(duì)于子代的智力發(fā)育有負(fù)面影響。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)在SD大鼠證明母親高齡生育引起子代學(xué)習(xí)記憶能力降低,但是在目前在小鼠模型上尚無相關(guān)數(shù)據(jù)。智力的發(fā)育與位于大腦丘腦與內(nèi)側(cè)顳葉之間的海馬體相關(guān),而海馬體中主要由神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮其學(xué)習(xí)記憶功能。神經(jīng)元通過接受、整合、傳到和輸出信息實(shí)現(xiàn)信息的交換,可通過微管關(guān)聯(lián)蛋白2(microtubule-associated proteins 2,MAP2)標(biāo)記;而作為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要組成部分的星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)于維持神經(jīng)元的生長、發(fā)育和生存發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,可通過膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)標(biāo)記。因此,海馬的發(fā)育或功能異常將引起學(xué)習(xí)記憶功能改變。熱休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)是一組高度保守的蛋白質(zhì),對(duì)于新生多肽的正確折疊以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成和穩(wěn)定具有重要作用。熱激同源蛋白70(heat shock cognate protein 70,HSC70)是Hsps家族的一個(gè)主要的結(jié)構(gòu)性活性成員,不同于熱休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)在細(xì)胞處于應(yīng)激環(huán)境時(shí)高表達(dá)以發(fā)揮應(yīng)激保護(hù)作用,HSC70在正常細(xì)胞中呈基礎(chǔ)性表達(dá),從而維持細(xì)胞的基本形態(tài)和功能。HSC70在神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達(dá),其表達(dá)隨著神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育出現(xiàn)時(shí)間和空間改變,提示其參與神經(jīng)發(fā)育。本文研究C57BL/6雌鼠高齡生育對(duì)于子代學(xué)習(xí)記憶的影響,檢測(cè)神經(jīng)發(fā)育過程中高齡生育子代海馬HSC70的表達(dá)特征,為高齡生育相關(guān)的醫(yī)學(xué)研究和生育指導(dǎo)提供新的思路。方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組:選用清潔級(jí)C57BL/6小鼠。分別取高齡雌鼠(11月齡)和青年雌鼠(3月齡)與隨機(jī)選擇的3月齡雄鼠單獨(dú)合籠。待雌鼠懷孕后,將雄鼠與雌鼠分籠。雌鼠分娩后,將高齡雌鼠所生育仔鼠標(biāo)記為高齡組,青年雌鼠所生的仔鼠標(biāo)記為青年組。對(duì)待檢測(cè)小鼠稱重。2.Morris水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力:小鼠出生后28天(postnatal 28,P28)為腦發(fā)育成熟期,出生后60天(postnatal 60,P60)為成年期。將仔鼠分為兩組,第一組飼養(yǎng)至P28進(jìn)行水迷宮檢測(cè),第二組飼養(yǎng)至P60進(jìn)行水迷宮檢測(cè),分別記錄其實(shí)驗(yàn)前體重及定位航行實(shí)驗(yàn)與空間探索實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)指標(biāo)。3.免疫組織化學(xué)熒光染色檢測(cè)海馬中HSC70蛋白表達(dá):對(duì)P28青年組與高齡組處死后取全腦組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測(cè)HSC70、MAP2、GFAP在海馬區(qū)表達(dá),在共聚焦顯微鏡下觀察并用Image-Pro Plus軟件測(cè)定熒光強(qiáng)度值。4.Western blot檢測(cè)發(fā)育過程中海馬Hsc70蛋白表達(dá):青年組、高齡組出生后1、3、7、14、21、28、60天處死后取海馬組織,進(jìn)行Western blot對(duì)小鼠在生長過程中海馬中Hsc70蛋白表達(dá)情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)的檢測(cè)。5.Western blot檢測(cè)水迷宮訓(xùn)練前后海馬HSC70和HSP70蛋白表達(dá):對(duì)P28青年組的小鼠水迷宮前后海馬中HSC70與HSP70的蛋白表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè)。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:本文中所涉及的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)由SPSS17.0軟件分析。水迷宮實(shí)驗(yàn)的定位航行實(shí)驗(yàn)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的多因素方差分析。當(dāng)兩組樣本進(jìn)行比較時(shí),如果成正態(tài)分布且方差齊則運(yùn)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);成正態(tài)分布但方差不齊時(shí)運(yùn)用校正t檢驗(yàn);不滿足正態(tài)分布時(shí)運(yùn)用秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。結(jié)果1.小鼠體重:P28青年組與高齡組小鼠體重均值分別為16.98±1.11 g和16.05±1.15 g;P60青年組與高齡組小鼠體重均值為27.21±1.64 g和26.37±1.74 g,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.Morris水迷宮結(jié)果:定位航行實(shí)驗(yàn)中隨著第1天到第6天訓(xùn)練時(shí)間延長,高齡組和青年組(P28和P60)到達(dá)平臺(tái)的潛伏期均顯著降低(P0.05)。在訓(xùn)練第6天,高齡組潛伏期在P28明顯比青年組長(P0.05),而在P60與青年組則無顯著差異(P0.05);高齡組的游泳路程在P28和P60與青年組相比均無顯著差異(P0.05)。第七天空間探索實(shí)驗(yàn)時(shí),高齡組的目標(biāo)象限時(shí)間百分比在P28和P60均顯著低于青年組(P0.05);且高齡組穿越平臺(tái)次數(shù)在P28和P60顯著低于青年組(P0.05)。3.免疫組織化學(xué)熒光染色結(jié)果:HSC70在小鼠腦內(nèi)廣泛表達(dá),包括皮層、海馬等腦區(qū),在神經(jīng)元(MAP2陽性染色)和星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP陽性染色)上均有表達(dá),主要表達(dá)在胞漿;高齡組海馬CA3區(qū)中HSC70蛋白表達(dá)較青年組降低。4.Western blot結(jié)果:青年組與高齡組在出生后1、3、7、14、21、28、60天檢測(cè)海馬HSC70蛋白表達(dá),隨著海馬發(fā)育HSC70蛋白表達(dá)量逐漸增加,在28天達(dá)到峰值,第60天表達(dá)量有所下降;P28高齡組海馬中HSC70蛋白表達(dá)量顯著低于青年組(P0.001),P60的青年組與高齡組海馬中HSC70蛋白表達(dá)量無顯著性差異(P0.05);P28與P60的青年組小鼠經(jīng)過水迷宮實(shí)驗(yàn)后海馬中HSC70蛋白的表達(dá)量與水迷宮前均無顯著性差異(P0.05),水迷宮實(shí)驗(yàn)后海馬中HSP70蛋白的表達(dá)量與水迷宮前相比顯著性增高(P0.05)。結(jié)論1.高齡雌性小鼠生育子代學(xué)習(xí)記憶能力下降。2.隨著神經(jīng)發(fā)育,小鼠海馬中HSC70表達(dá)逐漸增高,到腦發(fā)育成熟期到達(dá)最高點(diǎn)。3.高齡雌鼠生育的子代小鼠在腦發(fā)育成熟期海馬中HSC70表達(dá)低于青年生育子代,成年期兩者無差異。
【圖文】：

圖 1 定位航行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)逃避潛伏期A：P28 青年組與高齡組的逃避潛伏期。B：P60 青年組與高齡組的逃避潛伏期。（*：P < 0.05）B．游泳路程隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，P28 和 P60 的青年組與高齡組找到平臺(tái)的游泳距離均呈下降趨勢(shì)。P28 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺(tái)的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2A），P60 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺(tái)的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2B）。

圖 1 定位航行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)逃避潛伏期A：P28 青年組與高齡組的逃避潛伏期。B：P60 青年組與高齡組的逃避潛伏期。（*：P < 0.05）B．游泳路程隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，P28 和 P60 的青年組與高齡組找到平臺(tái)的游泳距離均呈下降趨勢(shì)。P28 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺(tái)的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，圖 2A），P60 小鼠在第 3、4、5 天高齡組找到平臺(tái)的游泳距離顯著高于青年組（重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的多因素方差分析，P < 0.05，，圖 2B）。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R338

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 唐守現(xiàn);基于MRI的阿爾茨海默氏病海馬結(jié)構(gòu)形態(tài)和功能研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 仰園;全面二孩政策下中國人口總量的預(yù)測(cè)[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2605534