【摘要】：目的 本實驗擬運用中醫(yī)的理論和方法建立一種新的病證動物模型——胃虛水停證動物模型，并用中醫(yī)多方對比的方法來反證該動物模型，為中醫(yī)證候的客觀化及經(jīng)方的臨床運用提供科學(xué)依據(jù)。 方法 1、運用中醫(yī)的病因?qū)W理論，采用大量多次灌服冰水、吹風(fēng)加饑餓的方法，建立胃虛水停動物模型。實驗用昆明種小鼠，40只，雌雄各半，體重22-28g，隨機分為空白對照組和模型組兩個組。實驗組每天用冰水灌胃6次，上下午各三次；每次灌胃前給小鼠用電風(fēng)扇吹風(fēng)15分鐘，每次灌胃后再用電風(fēng)扇吹風(fēng)15分鐘；每天上午和下午各斷食一次，但不斷水，連續(xù)造模14天�？瞻捉M為健康小鼠，每天給以常規(guī)飲食。在建立動物模型完成后一周處死動物進行指標檢測。采用飲水量差值測定法測定飲水量，食物量差值測量進食量，用B超機檢查胃部的液體潴留情況，采用考馬斯亮蘭顯色法測定胃竇一氧化氮(NO)的含量,以硝酸還原酶法測定組織勻漿中的NO含量。同時,嚴格按照試劑盒說明書測定蛋白含量，觀察胃解剖結(jié)構(gòu)病理切片。 2、選用茯苓甘草湯、七味白術(shù)散、痛瀉要方三方，以對比治療的方法來反證該病證動物模型。實驗造模同第一個實驗，采用飲水量差值測定法測定飲水量，食物量差值測量進食量，斷頭取血檢測血液中的血漿胃動素、血管活性腸肽，用SPSS軟件處理統(tǒng)計資料。 3、運用傷寒論治水三方（茯苓甘草湯、苓桂術(shù)甘湯、苓桂甘棗湯）對胃虛水停證模型進行對比治療，以驗證茯苓甘草湯的療效。實驗用昆明種小鼠72只，隨機分為空白對照組、模型組、痛瀉要方組、七味白術(shù)散組、茯苓甘草湯組、嗎丁啉組，實驗造模同第一個實驗，造模完成后，給各組動物用相應(yīng)的中藥湯劑（傷寒論治水三方煎液）灌胃治療，然后采用飲水量差值測定法測定飲水量，食物量差值測量進食量，斷頭取血檢測血液中的血漿及胃竇組織中胃動素、血清中和胃竇組織中胃泌素，用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）測定胃竇組織中胃動素受體和胃泌素受體mRNA的表達。 4、運用傷寒論治水三方（茯苓甘草湯、苓桂術(shù)甘湯、苓桂甘棗湯）對胃虛水停證進行預(yù)防性治療，以了解三方對胃虛水停證模型的預(yù)防效果。。造模方法同第一個實驗，在每次造模前一個小時，用茯苓甘草湯、苓桂術(shù)甘湯、苓桂甘棗湯、嗎丁啉按小鼠體重每天給以12ml/kg的相應(yīng)藥物灌胃，直到造模結(jié)束。然后觀察小鼠體征（精神狀態(tài)、活動度、飲食量、體重變化、大小便、鼠毛光澤度、胃部外形等）并測定血液胃動素、胃泌素含量。 結(jié)果 1、觀察小鼠體征及檢測指標發(fā)現(xiàn)，在造模第7天，有部分小鼠出現(xiàn)嘔吐，呃逆，胃部出現(xiàn)輕微脹滿，胃部觸診聽診有振水感，在第10天，接近半數(shù)動物出現(xiàn)嘔吐、呃逆，表現(xiàn)有精神萎靡不振，怕冷，喜群臥，活動量明顯減少，消瘦，對外界刺激反應(yīng)不靈敏。在建立模型后的一周內(nèi)，模型組小鼠毛色略顯干枯、大便無明顯改變，個別有便溏征象。模型組小鼠的日均飲水量非常顯著少于空白對照組（P0.01），模型組小鼠的飲食量非常顯著下降，少于空白組小鼠（P0.01）。模型組小鼠的胃中甲基橙殘留率非常顯著高于空白對照組（P0.01）。B超顯示，模型組小鼠胃內(nèi)有大量液體潴留而未排空，而空白組小鼠胃內(nèi)則僅有少量液體。模型組小鼠的胃竇NO含量非常顯著高于空白組（P0.01）。模型組小鼠胃較空白組顯得脹滿，最明顯的是胃底部位。肉眼觀察，切開后的模型組小鼠胃無明顯器質(zhì)性上的改變，可以看到胃黏膜無明顯潰瘍點，，無糜爛斑塊，黏膜顏色比空白對照組偏白。光鏡下可以見到模型組小鼠的胃底細胞為鱗狀上皮細胞，細胞增生明顯，胃底和胃竇細胞間質(zhì)中有少量炎癥細胞浸潤，但程度輕微，沒有見到其它明顯病理學(xué)改變。胃底與胃竇都沒有發(fā)現(xiàn)明顯胃粘膜細胞腸化生等器質(zhì)性病理改變。 2、通過對茯苓甘草湯、七味白術(shù)散、痛瀉藥方的對比治療發(fā)現(xiàn)，茯苓甘草湯組進食量和飲水量較模型組和另外兩個藥物組增加明顯，活動度明顯增高。5天的治療已經(jīng)使動物基本恢復(fù)正常狀態(tài)。茯苓甘草湯對小鼠胃排空的治療作用優(yōu)于七味白術(shù)散、痛瀉要方、嗎丁啉；茯苓甘草湯對血漿胃動素升高作用顯著高于七味白術(shù)散組、痛瀉要方組（（P0.01或P0.05），也高于嗎丁啉組，而表現(xiàn)出與空白對照組無明顯差異。但對于對腸道蠕動有顯著抑制作用的血管活性腸肽的降低作用則沒有七味白術(shù)散、痛瀉要方顯著，非常顯著高于空白對照組（P0.01）。 3、通過對傷寒論治水三方的對比治療發(fā)現(xiàn)，傷寒論治水三方組小鼠的飲水量和進食量都比模型組顯著增加（P0.01或P0.05），以茯苓甘草湯組增加最明顯（P0.01）。在血漿胃動素方面各治療組的胃動素水平都比模型組顯著增加（P0.01或P0.05），只有茯苓甘草湯的胃動素水平與空白對照組無顯著差異，苓桂甘棗湯組胃動素水平非常顯著低于空白對照組（P0.01），苓桂術(shù)甘湯組胃動素水平非常顯著高于模型組但低于空白對照組水平（P0.05）。在胃竇組織胃動素方面，顯示出與血漿胃動素相似的變化。在血清和胃竇組織胃泌素方面，各治療組的胃泌素水平均比模型組升高，茯苓甘草湯升高胃泌素的作用最明顯。在胃動素受體mRNA的表達方面，與空白對照組相比，模型組的mRNA表達非常顯著降低（P0.01）；與模型組相比，治水三方組的mRNA表達非常顯著增高（P0.01），以茯苓甘草湯增高最為顯著。在胃泌素受體mRNA的表達方面，與空白對照組相比，模型組的mRNA表達呈現(xiàn)非常顯著升高（P0.01），與模型組相比，茯苓甘草湯的mRNA表達非常顯著降低，苓桂術(shù)甘湯的mRNA表達也顯著降低，苓桂甘棗湯的mRNA表達與模型組無顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 4、通過傷寒論治水三方對胃虛水停動物模型的預(yù)防實驗發(fā)現(xiàn)，模型組在造模第7天有小鼠出現(xiàn)呃逆，嘔吐，胃部觸診聽診有振水感，在第10天，大約有半數(shù)出現(xiàn)嘔吐、呃逆，表現(xiàn)有精神萎靡不振，怕冷，喜群居而臥，活動量明顯減少，消瘦，對外界刺激反應(yīng)不靈敏，小鼠毛色略顯干枯、大便無明顯改變，個別有便溏征象。經(jīng)預(yù)防治療的治水三方組小鼠整體情況比模型組好。茯苓甘草湯組進食量與飲水量較模型組與另外兩個藥物組明顯增強，小鼠活動度雖然有所下降，但仍時不時能與其他小鼠嬉戲、追逐，顯示出較為活躍的生命征象，毛色尚光滑不打卷，對外界刺激反應(yīng)仍然靈敏，比較喜歡實驗者從鼠籠外丟進籠內(nèi)的食物。另外兩個中藥物組小鼠整體情況尚可，進食與飲水尚可，毛色光澤度有所下降，尚能四處活動覓食，對外界刺激反應(yīng)比模型組好。嗎丁啉組整體情況不佳，精神萎靡，但比模型組稍好，癥狀輕微。除嗎丁啉組以外，各預(yù)防組小鼠血漿及組織中MTL含量均比模型組和空白對照升高，以茯苓甘草湯升高最顯著；在血清胃泌素方面，各治療組的胃泌素均比模型組非常顯著升高（P0.01），而且都低于空白對照組，以茯苓甘草湯升高胃泌素的效果最顯著。 結(jié)論 本實驗運用中醫(yī)理論成功建立胃虛水停證動物模型，該模型造模步驟簡便、材料易得、實驗儀器要求不高、實驗環(huán)境易于控制、造模所需時間較短，疾病表現(xiàn)符合胃動力障礙中胃內(nèi)液體排空時間延長的臨床特點，傷寒論治水三方對該模型有一定的治療作用和預(yù)防作用，其中茯苓甘草湯的作用最顯著，為茯苓甘草湯治療胃虛水停證提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R285.5

【參考文獻】

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1 鄭小偉;李玲玲;傅鴻彰;章娜英;;模擬“遲脈”實驗動物模型的研究[J];浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1990年06期

2 馬健,孟澍江,申冬珠,陸平成;解毒涼營護陰法阻斷溫病氣營傳變的實驗研究[J];中國醫(yī)藥學(xué)報;1991年01期

3 沙建飛;胃動力中藥初探[J];中國醫(yī)藥學(xué)報;1993年06期

4 李桂賢,賈煜;中醫(yī)對胃動力障礙的研究現(xiàn)狀[J];廣西中醫(yī)藥;2002年04期

5 任麗梅,張堅,栗鵬,劉文軍;功能性消化不良患者胃竇壁內(nèi)NO含量與胃排空關(guān)系的探討[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年S1期

6 吳建新,孟祥軍,李定國,陸漢明;胃動力障礙的治療現(xiàn)狀與研究進展[J];臨床內(nèi)科雜志;2002年S1期

7 何旭東;徐章;侯曉華;;不同水溫下飲水負荷試驗測定功能性消化不良患者胃感覺功能的研究[J];臨床內(nèi)科雜志;2007年06期

8 鄭天珍,李偉,瞿頌義,何地英,丁永輝,衛(wèi)玉玲;補氣類中藥對大鼠離體胃平滑肌條的作用[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1998年03期

9 張慶祥;于少泓;孫廣仁;楊勇;于梅;;哮喘病寒飲蘊肺證大鼠病理模型的建立與評價[J];山東中醫(yī)雜志;2006年02期

10 張亞聲,劉小弟,翁雪松;慢性胃炎用調(diào)氣活血法治療后的胃動力變化——附86例患者胃排空功能療效分析[J];上海中醫(yī)藥雜志;2001年07期

本文編號：2599821