【摘要】：新生兒缺氧缺血性腦病是常見的新生兒顱腦性損傷之一,由于圍生期窒息、缺氧所引起的腦缺氧缺血性損害。目前對HIBD的發(fā)病機(jī)制尚不明確,臨床上尚無完整統(tǒng)一的治療方案。而中醫(yī)藥在治療兒童腦病方面有了突破性的進(jìn)展,特別是針刺療法,在治療HIE后遺癥方面,療效顯著。目的:“靳三針頭穴”(腦三針、顳三針、智三針)臨床治療兒童腦病包括精神發(fā)育遲滯、自閉癥、注意力缺陷、多動癥等30余年,療效肯定,而針刺對HIE的機(jī)制研究尚未明確,故深入研究針刺治療HIE的機(jī)制是十分必要的。近年來,自噬是研究神經(jīng)系統(tǒng)性疾病的新方向,許多研究提示在機(jī)體發(fā)生缺氧缺血性損傷亦有線粒體自噬的存在,線粒體自噬作為一種自我保護(hù)機(jī)制被發(fā)現(xiàn)可以改善HIE腦組織病理變化。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),針刺可促進(jìn)HIBD模型幼鼠自噬相關(guān)蛋白Beclin-1,LC3的表達(dá),同時由研究表明,針刺可通過提高BNIP3蛋白水平誘導(dǎo)線粒體自噬的表達(dá)。而本實(shí)驗(yàn)沿用前期實(shí)驗(yàn)缺氧缺血性腦損傷宮內(nèi)窘迫新生大鼠的模型,提高了新生大鼠的存活率,保證該模型下制備的HIBD大鼠缺氧缺血程度的一致性,研究針刺在加入雷帕霉素、3-MA自噬完全被抑制和過分激活下的作用情況,表明針刺對線粒體自噬的促進(jìn)作用在針刺修復(fù)神經(jīng)元中的重要程度。方法:通過模擬人類圍生期宮內(nèi)窘迫而延遲剖宮產(chǎn)術(shù)的造模方法構(gòu)建宮內(nèi)窘迫HIBD大鼠模型。設(shè)置模型組,針刺組,激活劑組,抑制劑組,針刺加激活劑組,針刺加抑制劑組,于新生大鼠出生后第14天,開始腹腔注射雷帕霉素、3-MA及針刺干預(yù),針刺組、針刺及激活劑組、針刺加抑制劑組每天針刺干預(yù),模型組、激活劑組、激活劑組針刺組等其他2組干預(yù)時進(jìn)行空抓對照;激活劑組、抑制劑組、針刺加激活劑組及針刺加抑制劑組每天腹腔注射相應(yīng)的溶液,模型組及針刺組每天腹腔注射生理鹽水。干預(yù)14天結(jié)束后,即是大鼠出生后28天為取材時間點(diǎn),并采用HE染色觀察各組中腦組織形態(tài)的改變,Western Blot檢測各樣本中自噬相關(guān)蛋白Beclin-1,P62的含量,并用透射電鏡檢測觀察自噬體的結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1、HE染色HE染色結(jié)果示模型組大鼠全腦細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)排列稍紊亂,細(xì)胞間隙變寬。針刺組:組織細(xì)胞排列較緊湊,壞死細(xì)胞減少,一些神經(jīng)元形態(tài)接近正常。激活劑組:細(xì)胞間隙稍大,神經(jīng)細(xì)胞排列略紊亂,但程度較模型組明顯減輕。抑制劑組:細(xì)胞層數(shù)減少,神經(jīng)元核固縮深染,細(xì)胞排列分散,大腦全層未見到正常形態(tài)的神經(jīng)元。針刺加激活劑組:組織細(xì)胞排列相對緊湊,可見一些結(jié)構(gòu)紊亂的細(xì)胞。針刺加抑制劑組:大鼠神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞排列分散。2、Western Blot檢測結(jié)果Beclin-1表達(dá)結(jié)果:與模型組相比,針刺組Beclin-1蛋白含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明針刺可促進(jìn)自噬相關(guān)蛋白Beclin-1的表達(dá);與模型組相比,激活劑組Beclin-1的表達(dá)效果無差異。抑制劑組Beclin-1的表達(dá)顯著,降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明抑制劑可有效抑制Beclin-1的表達(dá),抑制自噬;與激活劑相比,針刺加激活劑組Beclin-1表達(dá)顯著升高,說明針刺可顯著促進(jìn)Beclin-1的表達(dá);P62表達(dá)的結(jié)果:與模型組相比,針刺組P62表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)表明針刺可促進(jìn)自噬,而P62是一個自噬負(fù)反饋的指標(biāo),自噬越高,含量越低;與模型組相比,激活劑組自噬水平上調(diào)而使P62含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,抑制劑組P62表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、透射電鏡觀察各組自噬體結(jié)果模型組神經(jīng)元細(xì)胞核邊緣稍規(guī)則,自噬小體偶見;針刺組神經(jīng)元細(xì)胞,核大正圓,可見細(xì)胞周圍空泡狀的自噬溶酶體;激活劑組神經(jīng)元細(xì)胞邊緣規(guī)則,可見散在自噬體,自噬體數(shù)量相較于模型組增加;抑制劑組可見神經(jīng)元細(xì)胞邊緣不規(guī)則,與周邊組織邊界不清,幾乎沒有自噬小體;針刺加激活劑組神經(jīng)元細(xì)胞邊緣規(guī)則,核大正圓,可見自噬小體;針刺加抑制劑組神經(jīng)元細(xì)胞邊緣不規(guī)則,未見自噬小體。結(jié)論:(1)本課題沿用前期實(shí)驗(yàn)鉗夾雙側(cè)子宮動脈造成宮內(nèi)窘迫新生大鼠的模型,保證HIBD模型制備的一致性。(2)采用自噬激活劑(雷帕霉素)及抑制劑(3-MA)、靳三針頭穴干預(yù)HIBD新生大鼠,在自噬過度激活和抑制情況下,針刺干預(yù)腦組織中的自噬相關(guān)蛋白Beclin-1,P62有不同的表達(dá)。(3)從透射電鏡觀察自噬小體的結(jié)果看,針刺可以促進(jìn)HIBD大鼠腦組織的線粒體自噬小體表達(dá)增加。
【圖文】：

技術(shù)路線圖2.2.1.2機(jī)制圖
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R245;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉孝橋;;單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂治療HIE的臨床療效及對神經(jīng)行為的影響[J];中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2015年24期

2 嚴(yán)汀華;張經(jīng)義;林惠芳;盧穗萬;闕敢波;;高壓氧對新生兒缺氧缺血性腦病的療效及預(yù)后研究[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2015年29期

3 姜莉;李宇寧;余唯琪;曾格霞;楊學(xué)梅;;高壓氧治療新生兒缺氧缺血性腦病120例療效觀察[J];內(nèi)科;2015年04期

4 閻云蕓;;鼠神經(jīng)生長因子對新生兒缺氧缺血性腦病患兒血清神經(jīng)肽Y和神經(jīng)元特異性烯醇化酶水平的影響及療效觀察[J];中國藥師;2015年08期

5 鄭曉鳳;馬蓉霞;張方信;;自噬調(diào)控劑研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年14期

6 唐英;尚清;;針刺聯(lián)合穴位注射治療新生兒缺氧缺血性腦病:隨機(jī)對照研究[J];中國針灸;2015年07期

7 劉向紅;郎玉潔;;鼠神經(jīng)生長因子對新生兒缺氧缺血性腦病的安全性及療效[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2015年13期

8 王志舒;譚曉榮;劉洹洹;;線粒體自噬調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2015年06期

9 何鵬;;用針灸療法治療腦癱的效果研究[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2015年11期

10 岑惠玲;賴春華;;胞二磷膽堿聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂治療新生兒缺氧缺血性腦病神經(jīng)行為的效果對比[J];中國實(shí)用醫(yī)藥;2015年15期

相關(guān)會議論文 前6條

1 欒佐;劉衛(wèi)鵬;屈素清;胡曉紅;汪兆艷;賀聲;劉翠青;肖敏;;人神經(jīng)前體細(xì)胞移植治療新生兒獲得性腦損傷的臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

2 王輝;閆炳蒼;郭延昭;樵成;;補(bǔ)益藥配合穴位埋線對小兒腦癱坐位運(yùn)動功能的影響[A];第二十九次全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)大會暨“小兒感染性疾病的中醫(yī)藥防治”培訓(xùn)班論文匯編[C];2012年

3 吳凡;劉東明;邱兆熊;安俊英;黃曉紅;劉峰;;淺述按摩推拿對小兒腦性癱瘓的治療[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第八屆全國康復(fù)治療學(xué)術(shù)年會資料及論文匯編[C];2011年

4 馬丙祥;李華偉;;中醫(yī)治療方法在小兒腦癱康復(fù)中應(yīng)用現(xiàn)狀 存在問題及對策探討[A];第25屆全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)研討會暨中醫(yī)藥高等教育兒科教學(xué)研究會會議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

5 劉東明;徐烈忠;吳凡;邱兆熊;張穎;王紅英;;淺述按摩推拿對小兒腦性癱瘓的治療作用[A];第十二次全國推拿學(xué)術(shù)年會暨推拿手法調(diào)治亞健康臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2011年

6 湯亞南;趙鳳臨;魏玲;;亞低溫對新生兒缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用隨機(jī)對照試驗(yàn)Meta分析[A];全國圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李星兒;針刺對宮內(nèi)窘迫缺氧缺血性腦損傷大鼠新生神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 向陽;老齡小鼠急性心肌梗塞后心臟破裂心室重構(gòu)的分子機(jī)制及NF-κB的靶向干預(yù)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高玲莉;電針神庭、百會對缺血性腦卒中認(rèn)知障礙大鼠自噬網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的影響[D];河南中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 唐華兵;人臍血單核細(xì)胞不同移植時間對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉龍琳;針刺對全腦缺氧缺血大鼠海馬區(qū)自噬相關(guān)蛋白的影響研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 于論;新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬檢測及雷帕霉素對預(yù)后的干預(yù)[D];蘇州大學(xué);2014年

5 曹勇;針刺對HIBD模型大鼠遠(yuǎn)期行為學(xué)及Ca~(2+)濃度、LDH活性的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

6 邵明玉;自噬誘導(dǎo)劑海藻糖對鉛暴露幼鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[D];吉林大學(xué);2013年

7 郭強(qiáng);大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞自噬及3-甲基腺嘌呤作用的研究[D];吉林大學(xué);2012年

8 武明明;載脂蛋白E基因多態(tài)性與星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后興奮性氨基酸變化的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

9 鄔俏璇;Syncytin在妊娠期高血壓疾病胎盤組織中的表達(dá)及與圍生結(jié)局的相關(guān)性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

10 卜笑松;人胚神經(jīng)干細(xì)胞植入新生鼠側(cè)腦室后遷移與分化的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

，

本文編號：2599700