【摘要】：第一部分構(gòu)建痤瘡大鼠炎癥模型目的:以痤瘡丙酸桿菌(P.acnes)混懸液外耳廓皮下注射構(gòu)建痤瘡大鼠炎癥模型。方法:將21只6~8周齡、體重250±30g健康雌性SD大鼠,采用隨機數(shù)字法分為空白組(BC組)、痤瘡模型組(AC組)和生理鹽水組(NS組),每組7只。BC組不予任何處理,另兩組大鼠均于實驗第1天分別予P.acnes混懸液和生理鹽水50ul在雙側(cè)外耳廓中央皮下注射1次,24小時后從大體觀察三組大鼠注射前后耳廓皮膚變化,并用無菌針頭挑取AC組耳廓腫脹部位組織,接種于血平板,厭氧罐中培養(yǎng)48h,證明為P.acnes感染。三組大鼠均于第7天處死,取局部皮膚行組織病理學(xué)觀察,并采用熒光定量PCR(RT-PCR)測定三組大鼠右側(cè)耳廓組織中TNF-α、MMP-2表達水平。結(jié)果:大體觀:BC組大鼠無變化;AC組大鼠雙側(cè)耳廓于注射24小時后局部出現(xiàn)紅腫,1周后紅腫未消退,并出現(xiàn)紅色丘疹;NS組大鼠雙側(cè)耳廓注射24小時后局部出現(xiàn)腫脹,1周后腫脹完全消退。微生物檢測:AC組鏡下可見P.acnes生長,證實為P.acnes感染。組織病理:BC組可見表皮、真皮及皮下組織,結(jié)構(gòu)清楚,未見明顯炎癥細胞浸潤;AC組見皮下組織結(jié)構(gòu)消失,炎癥細胞彌漫性浸潤,部分形成膿腫,部分毛囊口擴張,皮脂腺消失;NS組皮膚各層結(jié)構(gòu)清楚,未見明顯炎癥細胞浸潤�；驒z測:三組大鼠耳廓組織內(nèi)均可檢測到TNF-α、MMP-2基因;NS組與BC組比較,TNF-α、MMP-2基因水平指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);AC組較NS組TNF-α基因水平增高,指標差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),AC組較NS組MMP-2基因水平增高,指標差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:以P.acne混懸液外耳廓皮下注射可成功構(gòu)建痤瘡大鼠炎癥模型。第二部分h AMSCs培養(yǎng)上清液對痤瘡大鼠炎癥模型TNF-α和MMP-2基因表達的影響目的:明確人h AMSCs培養(yǎng)上清液中是否存在抗炎因子IL-10;觀察h AMSCs培養(yǎng)上清液對痤瘡大鼠炎癥模型TNF-α和MMP-2基因表達的影響并初步探討其可能的抗炎機制。方法:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法對h AMSCs培養(yǎng)上清液中的抗炎因子IL-10進行濃度測定。將49只6~8周齡、體重250±30g健康雌性SD大鼠按隨機數(shù)字法分為空白組(BC組)、生理鹽水組(NS組)、痤瘡模型組(AC組)、痤瘡模型未治療組(P組)、h AMSCs培養(yǎng)上清液注射治療組(H1組)、h AMSCs培養(yǎng)上清液涂搽治療組(H2組)、異維A酸紅霉素凝膠涂搽治療組(YW組),共7組,每組7只。BC組無處理,AC組和NS組處理同第一部分。P組:于第1天在SD大鼠雙側(cè)外耳廓中央皮下注射予P.ance混懸液50μl,1周后成功構(gòu)建痤瘡大鼠炎癥模型,之后不予任何處理,再觀察4周后處死;H1組:在建模1周后雙側(cè)外耳廓中央皮下注射h AMSCs培養(yǎng)上清液25μl治療,2次/周;H2組于構(gòu)建模型1周后雙側(cè)外耳廓涂搽h AMSCs培養(yǎng)上清液治療,1次/日;YW組于構(gòu)建模型1周后雙側(cè)外耳廓涂搽異維A酸紅霉素凝膠治療,1次/日;H1組、H2組、YW組治均在治療4周后處死。RT-PCR測定各組耳廓組織中TNF-α和MMP-2基因表達水平。結(jié)果:1.h AMSCs培養(yǎng)上清液中IL-10的濃度為281.22±10.35pg/ml。2.大體上觀察大鼠耳廓局部皮膚變化:BC組、NS組、AC組變化同第一部分。P組:建模1周后雙側(cè)大鼠耳廓腫脹,少量紅色丘疹,觀察4周后雙側(cè)耳廓丘疹明顯增多增大,丘疹表面緊張發(fā)亮;H1組治療4周后耳廓皮損基本消退;H2組治療4周后耳廓皮損基本消退;YW組治療4周后耳廓皮損完全消退。3.H1組較AC組TNF-α、MMP-2基因水平均低,各指標差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);H2組較AC組TNF-α、MMP-2基因表達水平均低,各指標差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);P組較AC組TNF-α、MMP-2基因水平均高,各指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);H1組較H2組TNF-α、MMP-2基因水平表達均低,各指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);YW組較H1組、H2組TNF-α、MMP-2基因水平表達均低,各指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.通過h AMSCs上清液干預(yù)可減輕痤瘡大鼠耳廓炎癥反應(yīng),其機制可能是通過其含有的IL-10、TIMPs分別抑制TNF-α、MMP-2的表達,從而改善痤瘡炎性皮損。2.h AMSCs上清液局部注射與涂搽對于痤瘡大鼠炎癥療效無明顯差異。
【圖文】：

圖 5a 圖 5b2.3 耳廓組織病理觀察2.3.1 耳廓組織病理學(xué)改變BC 組：表皮、真皮及皮下組織，結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯炎癥細胞AC 組：表皮角化過度，部分毛囊口擴張，毛囊皮脂腺周圍及真漫性浸潤，皮脂腺消失。NS 組：皮膚各層結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯炎癥細胞浸潤。（圖 6）

圖 5a 圖 5b2.3 耳廓組織病理觀察2.3.1 耳廓組織病理學(xué)改變BC 組：表皮、真皮及皮下組織，結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯炎癥細胞浸潤。AC 組：表皮角化過度，部分毛囊口擴張，毛囊皮脂腺周圍及真皮內(nèi)炎癥細胞彌漫性浸潤，，皮脂腺消失。NS 組：皮膚各層結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯炎癥細胞浸潤。（圖 6）
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R758.733;R-332

【參考文獻】

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本文編號：2598765