發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 19:06

【摘要】：白色念珠菌是一種最普遍的致病性真菌。本文研究了三種與白色念珠菌生長(zhǎng)相關(guān)蛋白,分別是支架蛋白Iqg1,Septin蛋白Cdc3,以及腺苷酸環(huán)化酶Cyr1。詳細(xì)研究了 Iqg1在白色念珠菌形態(tài)發(fā)生中的作用,Cdc3的磷酸化對(duì)白色念珠菌菌絲生長(zhǎng)的影響。并對(duì)Cyr1的不同功能區(qū)段進(jìn)行了蛋白表達(dá)、純化和結(jié)晶實(shí)驗(yàn)。白色念珠菌Iqg1是一種支架蛋白,在很多生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本文主要研究了 Iqg1與Sec3、Hof1之間的相互作用關(guān)系。通過(guò)離體蛋白結(jié)合試驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)Iqg1的Gap-C功能區(qū)段與Sec3的N端有直接的相互作用,在Iqg1敲除菌株中,Sec3-GFP的極性分布完全消失,表明Iqg1直接影響Sec3在細(xì)胞內(nèi)的分布,即Iqg1與Sec3之間功能上也相互影響,這些結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了離體蛋白結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果。同樣地,在離體蛋白結(jié)合試驗(yàn)中,我們也檢測(cè)到Iqg1與Hof1之間的相互作用。通過(guò)對(duì)Hof1-GFP的Time-lapse microscopy觀察,我們發(fā)現(xiàn)在野生型菌株中Hof1-GFP的極性分布在30分鐘后完全消失,而在Iqg1敲除菌株中Hof1-GFP的極性分布在120分鐘后依然不消失,表明Iqg1直接影響Hof1的極性分布與蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。該結(jié)果也進(jìn)一步驗(yàn)證了上述離體蛋白結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果。Septin環(huán)的架構(gòu)轉(zhuǎn)變是白色念珠菌細(xì)胞分裂的關(guān)鍵。Cdc3是Septin環(huán)中的重要一員,所以在白色念珠菌細(xì)胞分裂等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn)Cdc3有被磷酸化的現(xiàn)象。為了探討Cdc3磷酸化的生理意義,我們構(gòu)建了 Cdc3的磷酸化氨基酸位點(diǎn)的突變體。結(jié)果表明,把Cdc3的磷酸化氨基酸位點(diǎn)突變成模擬磷酸化的氨基酸后,跟野生型菌株相比,突變體菌株在菌絲生長(zhǎng)條件下形成的菌絲比較短而粗,表明Cdc3的磷酸化可能在白色念珠菌的菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。環(huán)腺苷酸-蛋白激酶A信號(hào)通路(cAMP-PKApathway)是白色念珠菌調(diào)節(jié)菌絲生長(zhǎng)的重要信號(hào)通路,腺苷酸環(huán)化酶在該信號(hào)通路中起著信號(hào)受體的關(guān)鍵性作用。為了更好地研究其功能,本實(shí)驗(yàn)對(duì)Cyr1四個(gè)主要功能區(qū)段進(jìn)行了離體表達(dá)和純化,并發(fā)現(xiàn)Cyr1的NRA和PP2C功能區(qū)與菌絲生長(zhǎng)相關(guān)蛋白的Pho81的ANK功能區(qū)發(fā)生直接相互作用。
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R379.4

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本文編號(hào)：2597136