【摘要】：目的觀察MRL/lpr狼瘡鼠外周血及骨髓血液生成情況,骨髓微環(huán)境中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow masenchymal stem cells,BMMSCs)表面的粘附分子N-鈣黏蛋白的表達(dá)水平以及BMMSCs的造血調(diào)控作用。方法采集MRL/lpr狼瘡鼠外周血進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù);流式細(xì)胞術(shù)檢測和分析狼瘡鼠骨髓中髓系(CD11b+)、B淋系(B220+)、T淋系(CD3e+)、紅系(Ter119+)各系血細(xì)胞的比例;甲基纖維素半固體集落形成試驗(CFU)方法檢測狼瘡鼠骨髓中CFU-pre-B、BFU-E、CFU-GM數(shù)目。分離培養(yǎng)狼瘡鼠的BMMSCs后,Western blot檢測其N-鈣黏蛋白的表達(dá);分別用BMP/Smads通路的激動劑BMP-2和抑制劑Noggin處理BMMSCs后,觀察狼瘡鼠BMMSCs的N-鈣黏蛋白的表達(dá)變化。分別用MRL/lpr狼瘡小鼠和C57BL/6小鼠的BMMSCs作為飼養(yǎng)層細(xì)胞,加入磁珠分選的正常小鼠Sca-1+骨髓造血干細(xì)胞,共培養(yǎng)14天后,比較Sca-1+骨髓造血干細(xì)胞CFU-pre-B、CFU-GM、BFU-E集落形成情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測其向髓系(CD11b+)、B淋系(B220+)、T淋系(CD3e+)、紅系(Ter119+)各系血細(xì)胞分化的情況。結(jié)果與C57BL/6小鼠比較,狼瘡鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞計數(shù)和血細(xì)胞比容顯著降低(P0.01);狼瘡鼠骨髓中B220+B淋巴細(xì)胞比例和CFU-pre-B數(shù)目均明顯下降(P0.05)。狼瘡鼠BMMSCs的粘附分子N-鈣黏蛋白的表達(dá)水平明顯高于對照組(P0.05)。BMP-2處理狼瘡鼠BMMSCs后其N-鈣黏蛋白的水平下降,而Noggin處理后則上調(diào)其N-鈣黏蛋白表達(dá)(P0.05)。與BMMSCs共培養(yǎng)2周后,以MRL/1pr狼瘡鼠BMMSCs作為飼養(yǎng)層的Sca-1+骨髓造血干細(xì)胞形成CFU-pre-B、CFU-GM集落數(shù)以及總集落數(shù)明顯高于正常對照組(P0.01),B220+細(xì)胞比例明顯高于正常對照組,而CD11b+細(xì)胞比例則明顯降低(P0.01)。結(jié)論MRL/1pr狼瘡鼠存在血液系統(tǒng)損傷,表現(xiàn)為貧血、骨髓中B淋巴細(xì)胞生成障礙,HSCs向B淋系前體細(xì)胞分化缺陷。MRL/1pr狼瘡鼠BMMSCs表面粘附分子N-鈣粘蛋白表達(dá)升高,BMP信號通路可調(diào)控N-鈣粘蛋白的表達(dá),狼瘡鼠BMMSCs BMP信號通路的抑制可導(dǎo)致其N-鈣粘蛋白表達(dá)升高。MRL/1pr狼瘡鼠BMMSCs能促進(jìn)正常骨髓Sca-1+造血干細(xì)胞增殖并向B淋系前體細(xì)胞及粒-巨噬系祖細(xì)胞的分化。
【圖文】：

１．邐ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡鼠發(fā)病特征逡逑ＭＲＬ／ｌｐｒ小鼠是目前較為常用的狼瘡鼠模型，，１６－２０周齡的ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡鼠表逡逑現(xiàn)出明顯的脾臟腫大、淋巴結(jié)腫大以及脫毛、皮損等改變。見圖１。逡逑１，１１１逡逑圖１．邋ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡鼠的發(fā)病特征。Ａ．狼瘡鼠的皮損表現(xiàn)；Ｂ．狼瘡鼠和正常對照逡逑小鼠的脾臟比較；Ｃ．狼瘡鼠頸部淋巴結(jié)明顯腫大；Ｄ．狼瘡鼠腫大的脾臟和淋巴逡逑結(jié)。逡逑２．邐ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡鼠外周血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果逡逑對ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡鼠和對照組Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的外周血進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)，結(jié)果顯逡逑示，狼瘡鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞計數(shù)和血細(xì)胞比容和對照組相比明顯降低，差逡逑異有統(tǒng)計學(xué)意義（戶＜０．０１），白細(xì)胞計數(shù)和血小板計數(shù)兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。逡逑具體數(shù)值詳見表３．逡逑２４逡逑

（２２．２±１０．１）％（ｎ＝５）ｖｓ（２１．３±５．９）％（ｎ＝６），邋Ｐ＞０．０５）、Ｓｃａ－１＋造血干細(xì)胞比例逡逑（ＭＲＬ／ｌｐｒ邋ｖｓ邋Ｃ５７ＢＬ／６：邋（９．２±２＿０）％（ｎ＝５）邋ｖｓ邋（８．２±０．９）％（ｎ＝６），邋ＰＸＪ．ＯＳ）與對照逡逑組Ｃ５７ＢＬ／６小鼠相比均無統(tǒng)計學(xué)差異。見
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R593.241;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 宋冬明;崔婷;裘影影;芮金兵;費小明;徐欣欣;李晶;湯郁;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型鼠骨BMP/Smads信號通路狀態(tài)的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年03期

2 徐婷;金鷗陽;趙盛楠;張華勇;侯亞義;孫凌云;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化能力異常[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2009年03期

本文編號：2596523