【摘要】：暈動病是指人們在乘坐汽車、輪船、飛機(jī)等交通工具時,受不適宜的運動刺激而引發(fā)的急性癥候群,主要表現(xiàn)為眩暈、惡心、嘔吐、面色蒼白、乏力等。大量研究表明,前庭系統(tǒng)在暈動病的發(fā)生中起重要作用,由外周前庭傳入而激活前庭核的興奮性,是暈動病病理過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以往研究發(fā)現(xiàn),暈動病發(fā)生時,前庭核神經(jīng)元中主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)是谷氨酸,且NMDAR1介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活,其下游信號分子CaMKⅡα與CREB經(jīng)活化后可進(jìn)一步誘導(dǎo)c-fos基因的表達(dá)。近年來大量研究已證實c-fos蛋白可作為前庭核神經(jīng)元激活或興奮的標(biāo)志,其表達(dá)水平能夠反映前庭核神經(jīng)元的活動狀態(tài)。目前,抗暈動藥物以西藥制劑為主,雖有一定的療效,但存在明顯的副作用,而中醫(yī)藥在防治暈動病方面具有獨特的優(yōu)勢。本課題組在中醫(yī)理論指導(dǎo)下所研發(fā)的中藥復(fù)方天香膠囊是在長期治療暈動病的臨床實踐基礎(chǔ)上,創(chuàng)新暈動病的中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識而形成的一個臨床經(jīng)驗方,經(jīng)過初步的臨床應(yīng)用證實該藥物在暈動病的防治中具有較好的作用,但藥理機(jī)制尚不完全明確。因此,本實驗采用雙軸旋轉(zhuǎn)刺激法建立暈動病模型,觀察天香膠囊對暈動病模型大鼠行為學(xué)、前庭核c-fos表達(dá)以及NMDAR1信號通路的影響,旨在驗證其藥效作用、明確其抗暈動作用靶點,為深入研究其藥理機(jī)制以及未來開發(fā)臨床新藥奠定基礎(chǔ)。目的:觀察中藥復(fù)方天香膠囊對暈動病模型大鼠行為學(xué)的影響,以驗證天香膠囊的藥效作用;觀察天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核c-fos及NMDAR1介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,以闡明天香膠囊在暈動病中發(fā)揮調(diào)節(jié)前庭核興奮性的分子靶點,深入詮釋天香膠囊抗暈動病的內(nèi)在機(jī)制,同時為NMDAR1介導(dǎo)的信號通路在暈動病前庭核興奮發(fā)生中的作用提供進(jìn)一步的實驗佐證。方法:1.天香膠囊對暈動病模型大鼠行為學(xué)的影響:將SD大鼠隨機(jī)分成6組,即正常組、模型組、陽性藥組(東莨菪堿)、天香膠囊低劑量組、天香膠囊中劑量組、天香膠囊高劑量組。灌胃預(yù)給藥3天后,采用雙軸旋轉(zhuǎn)刺激法復(fù)制暈動病模型,通過暈反應(yīng)指數(shù)評分、自發(fā)活動實驗、異嗜高嶺土實驗檢測各組大鼠行為學(xué)變化,以驗證天香膠囊的藥效作用。2.天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核c-fos蛋白表達(dá)的影響:實驗分組和處理同上,通過ELISA、Western blotting與免疫組化法檢測c-fos蛋白在各組SD大鼠前庭核中的表達(dá)情況,以觀察天香膠囊對c-fos蛋白表達(dá)的影響,從而揭示天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核興奮性的調(diào)節(jié)作用。3.天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核NMDAR1介導(dǎo)的信號通路的影響:實驗分組和處理同上,用Western blotting技術(shù)檢測各組前庭核NMDAR1蛋白表達(dá)以及CaMKⅡα亞基與CREB蛋白磷酸化水平,以觀察天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核NMDAR1及其下游因子的影響,從而揭示天香膠囊調(diào)節(jié)暈動病模型大鼠前庭核興奮性的分子機(jī)制。結(jié)果:1.天香膠囊可改善暈動病模型大鼠的行為學(xué)變化:與正常組比較,模型組大鼠暈反應(yīng)指數(shù)、排便顆粒數(shù)和高嶺土攝入量均顯著增高(P0.01),自發(fā)活動總路程與次數(shù)均顯著減少(P0.01),表明該旋轉(zhuǎn)刺激誘發(fā)了大鼠暈動病的常見癥狀;與模型組比較,天香膠囊中、高劑量組暈反應(yīng)指數(shù)與高嶺土攝入量顯著減少(P0.01,P0.05),自發(fā)活動增加(P0.01,P0.05),提示天香膠囊具有一定的抗暈動作用。2.天香膠囊可下調(diào)暈動病模型大鼠前庭核興奮性:與正常組比較,模型組大鼠c-fos蛋白表達(dá)水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),表明前庭核興奮性增強(qiáng),再次證實前庭核興奮性增加參與了大鼠暈動病發(fā)生的病理過程。而與模型組比較,天香膠囊各劑量組c-fos蛋白表達(dá)水平均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01,P0-05),提示天香膠囊可能通過調(diào)節(jié)前庭核興奮性來發(fā)揮其抗暈動的作用。3.天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核NMDAR1信號通路有下調(diào)作用:與正常組比較,模型組大鼠前庭核NMDAR1表達(dá)水平以及下游信號分子CaMKⅡα與CREB磷酸化水平顯著增高,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),提示旋轉(zhuǎn)刺激誘導(dǎo)了 NMDAR1信號通路以及其下游信號分子的活化,提示NMDAR1信號通路活化可能介導(dǎo)了暈動病發(fā)生時前庭核興奮性增強(qiáng);與模型組比較,天香膠囊中、高劑量組可以顯著抑制NMDAR1表達(dá)水平以及下調(diào)其下游分子CaMKⅡα與CREB磷酸化水平,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01,P0.05),提示天香膠囊可能通過下調(diào)NMDAR1信號通路來調(diào)節(jié)前庭核的興奮性,從而發(fā)揮其抗暈動的作用。結(jié)論:1.天香膠囊可有效改善暈動病模型大鼠的行為學(xué)變化,顯示了良好的抗暈動作用。2.天香膠囊可降低暈動病模型大鼠前庭核組織c-fos蛋白表達(dá),提示其抗暈動作用機(jī)制可能與下調(diào)大鼠前庭核興奮性有關(guān)。3.天香膠囊可調(diào)節(jié)暈動病模型大鼠前庭核組織NMDAR1、P-CaMKⅡα、P-CREB蛋白的表達(dá),抑制NMDAR1介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,這可能是其在治療暈動病中降低前庭核興奮性的內(nèi)在分子機(jī)制之一。
【圖文】：

基于ＮＭＤＡＲ１信號通路探討天香膠囊對暈動病模型大鼠前庭核興奮性的影響表２：各組大鼠自發(fā)活動總路程與自發(fā)活動次數(shù)情況（［±Ｓ）逡逑組別邐ｎ邐自發(fā)活動總路程（ｃｍ）自發(fā)活動次常組邐８邐１６１０．９３±３１３．２３邐１４４．３８±３５．型組邐８邐６１４．２５士邋１３０．７８＊＊邐５０．００±１８．７０性藥組邐８邐９１０．５３±９０．８５＃邐８０．８８±２０．８囊低劑量組邐８邐６８２．３３±２０９．５２邐５３．００士邋２０．４囊中劑量組邐８邐９６７．５０±１６５．７０＃＃邐７８．６７±１９．囊高劑量組邐８邐８８６．１６±２８０．５０＃邐９０．１３±２８．９９常組比較，＊＊Ｐ＜０．０１；與模型組比較，＃Ｐ＜0．0５，邋＞＜0．0１逡逑？邐２５００－

高劑量組與陽性藥組大鼠嗜食高嶺土行為明顯減輕，３ｄ高嶺土攝降低（Ｐ＜０．０５，邋Ｐ＜０．０１），提示天香膠囊具有一定的抗暈動作用；天性藥組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。逡逑表３：天香膠囊對暈動病模型大鼠高嶺土攝入量的影響（ｉ±ｓ）逡逑組別邐ｎ邋造模ＲＵ后３ｄ尚嶺土攝入總量的差正常組邐８邐０．０８±０．１１逡逑模型組邐８邐１．７１±０．６５＊＊逡逑性藥組邐８邐１．２４±０．４１＃逡逑囊低劑量組邐８邐１．５３±０．５２逡逑囊中劑量組邐８邐０．９４±０．３５＾逡逑囊高劑量組邐８邐１．２１±０．４５＃逡逑組比較，＊＊Ｐ＜０．０１；與模型組比較，，＃Ｐ＜０．０５，斤＜０．０１逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

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