【摘要】：[目的]研究云南省大理、德宏片形吸蟲的形態(tài)及核糖體、線粒體DNA的多態(tài)性,旨在從基因水平上探討云南省大理、德宏片形吸蟲的種類及遺傳變異情況。[方法]1.采集樣本:從云南省大理市泰興市場2頭病黃牛的肝膽管內(nèi)采集片形吸蟲各10條;從云南省德宏州芒市1頭病黃牛和盈江縣1頭病山羊的肝膽管內(nèi)采集片形吸蟲各10條。2.形態(tài)研究:肉眼觀察片形吸蟲的肩部特征及體后端的形狀;測量尺測量蟲體的體長及體寬;體式顯微鏡下觀察蟲體的肩部特征和生殖腔的形狀,測量蟲體頭錐的長度、口吸盤及腹吸盤的最大直徑和口吸盤到腹吸盤之間的距離。3.核糖體、線粒體DNA多態(tài)性研究:a.試劑盒抽提基因組DNA及DNA純度的鑒定;b.引物的設(shè)計(jì)與合成;c.采用PCR技術(shù)對云南兩地片形吸蟲核糖體ITS、28S rDNA和線粒體nad4基因序列進(jìn)行擴(kuò)增及測序;d.用DNAStar7.1軟件、BioEdit軟件進(jìn)行序列的整理和比較,并用Mega5.1軟件對線粒體nad4基因序列構(gòu)建分子進(jìn)化樹。[結(jié)果]1.通過形態(tài)分析初步得出云南省存在兩種片形吸蟲:肝片形吸蟲和巨片形吸蟲。2.獲得24個片形吸蟲樣本的ITS序列長為922bp,16個片形吸蟲樣本的ITS序列長為902bp;40個片形吸蟲樣本的28SrDNA序列長為489bp。進(jìn)行序列分析顯示:完整的ITS-1長為435bp,共有5個變異位點(diǎn);5.8S長為141bp,無變異位點(diǎn);ITS-2長為346bp或327bp,共有8個或5個變異位點(diǎn);而28SrDNA序列上有4個變異位點(diǎn)。依據(jù)這些變異位點(diǎn)可以區(qū)別出兩種片形吸蟲,而有的片形吸蟲樣本在變異位點(diǎn)處具有肝片形吸蟲和巨片形吸蟲的堿基重疊現(xiàn)象。結(jié)果40個片形吸蟲經(jīng)鑒定被分成三種:肝片形吸蟲、巨片形吸蟲和“中間型”片形吸蟲。3.獲得線粒體DNA的nad4基因序列長為470bp。測序結(jié)果分析顯示,片形吸蟲線粒體nad4序列的種間差異大于種內(nèi)差異,經(jīng)前一部分鑒定為“中間型”的樣本其nad4序列與肝片形吸蟲的相應(yīng)序列相似性高。進(jìn)化樹顯示云南大理地區(qū)的片形吸蟲明顯集聚在一起,同巨片形吸蟲有明顯的分支,但與文獻(xiàn)報(bào)道的肝片形吸蟲和“中間型”片形吸蟲線粒體相同基因序列比較,不構(gòu)成獨(dú)立的分支;云南德宏地區(qū)的片形吸蟲明顯集聚在一起,同肝片形吸蟲有明顯的分支,與文獻(xiàn)報(bào)道的巨片形吸蟲線粒體相同基因序列比較不構(gòu)成獨(dú)立的分支。[結(jié)論]1.云南大理、德宏地區(qū)的片形吸蟲從形態(tài)學(xué)初步分類,存在兩種片形吸蟲:肝片形吸蟲和巨片形吸蟲。2.用核糖體ITS、28SrDNA基因作為遺傳標(biāo)記來鑒別云南大理、德宏地區(qū)片形吸蟲的種類,可初步分成三種:肝片形吸蟲、巨片形吸蟲和“中間型”片形吸蟲。3.用線粒體nad4基因作為遺傳標(biāo)記來研究云南大理、德宏地區(qū)片形吸蟲的遺傳變異情況,云南地區(qū)片形吸蟲存在著不同程度的遺傳變異,其種內(nèi)變異不明顯而種間分化較為顯著。
【圖文】：

（ＯＳ－ＶＳ），并記錄。依據(jù)片形吸蟲的體長將其分成三個組：大型組（Ｌａｒｇｅ逡逑ｓｉｚｅ）邋＞３．５ｃｍ邋；中型組（Ｍｅｄｉｕｍ邋ｓｉｚｅ）邋２．５－３．５ｃｍ；小型組（Ｓｍａｌｌ邋ｓｉｚｅ）邋＜２．５ｃｍ［４９］。逡逑片形吸蟲的測量標(biāo)準(zhǔn)如圖１所示。測量數(shù)據(jù)經(jīng)認(rèn)真核對后輸入Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ邋Ｅｘｃｄ逡逑２０１０版，然后再使用Ｇｒａｐｈｐａｄ邋Ｐｒｉｓｍ邋６．０軟件中的ｃｏｌｕｍｎ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ對相應(yīng)的測量逡逑數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)分析并計(jì)算最小值和最大值范圍（Ｒａｎｇｅ）和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｘ±逡逑ＳＤ）的值。逡逑ＢＷ逡逑＇＊邐＞５，，逡逑邐邋＜逡逑ｆ翻．ｍ逡逑＼邐ｍ逡逑［邐，．４邋．翻邐輔N偳駑義希齲懾義賢跡逼撾嫻牟飭勘曜煎義希疲椋玨澹卞澹裕瑁邋澹恚澹幔螅酰潁澹恚澹睿翦澹螅簦幔睿洌幔潁溴澹錚駑澹疲幔螅悖椋錚歟徨義轄峁義希椋猿嫣寮綺刻卣骷疤搴蠖私腥庋酃鄄戾義俠醋栽頗鮮〈罄硎刑┬聳諧。餐凡』婆８蔚ü苣詰鈉撾婀玻玻疤酰綺垮義咸卣髏饗緣撓校保刺酰綺刻卣韃幻饗緣撓校短�。其中季_刻卣髏饗蘊(yùn)搴蠖順省埃鍘卞義閑偷撓校保碧醵搴蠖順省埃幀斃偷撓校程酰綺刻卣韃幻饗蘊(yùn)搴蠖順省埃鍘鋇撓繡義希保沖義

本文編號：2588072