【摘要】：目的：觀察防齲基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG經(jīng)肌肉注射、頜下腺區(qū)皮下注射和鼻腔粘膜滴注免疫新西蘭大白兔后的免疫效果,并探索免疫的最佳途徑。 方法：本研究包括兩部分：實(shí)驗(yàn)一：重組質(zhì)粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及載體質(zhì)粒pVAX1的鑒定和大量制備。1.先小量抽提儲存的重組質(zhì)粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及載體質(zhì)粒pVAX1。2.限制性內(nèi)切酶酶切鑒定重組質(zhì)粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及載體質(zhì)粒pVAX1是否正確。3.在鑒定正確的基礎(chǔ)上,大量抽提重組質(zhì)粒pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG及載體質(zhì)粒pVAX1,紫外分光光度計(jì)測定所抽提質(zhì)粒的OD值,并計(jì)算其濃度和純度,貯存以備免疫動物。實(shí)驗(yàn)二：基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG免疫新西蘭耳大白兔。1.動物選擇與分組：A大組：9只1.5kg新西蘭大白兔,隨機(jī)分為3組,每組3只。A1組：pVAX1-SA股四頭肌注射組；A2組：pVAX1-SA頜下腺區(qū)皮下注射組；A3組：pVAX1-SA鼻腔粘膜滴注組。B大組：9只1.5kg新西蘭大白兔,隨機(jī)分為3組,每組3只。B1組：pVAX1-GC股四頭肌注射組；B2組：pVAX1-GC頜下腺區(qū)皮下注射組；B3組：pVAX1-GC鼻腔粘膜滴注組。C大組：9只1.5kg新西蘭大白兔,隨機(jī)分為3組,每組3只。C1組：pVAX1-SG股四頭肌注射組；C2組：pVAX1-SG頜下腺區(qū)皮下注射組；C3組：pVAX1-SG鼻腔粘膜滴注組。D大組(對照組)：6只1.5kg新西蘭大白兔,隨機(jī)分為2組,每組3只。D1組(陰性對照組)：pVAX1股四頭肌注射組；D2組(空白對照組)：生理鹽水股四頭肌注射組。2.免疫時(shí)間：共免疫3次,首次免疫后間隔1周以同樣劑量加強(qiáng)免疫1次,再間隔2周進(jìn)行第2次加強(qiáng)免疫。3.樣品采集時(shí)間：分別于免疫前1天和免疫后第1,2,3,4,6,8,10周收集血清和唾液樣本。4.特異性抗體的檢測：血液和唾液中IgG和SIgA特異性抗體采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(間接ELISA法)檢測。 結(jié)果：①在重組質(zhì)粒小量抽提、鑒定無誤的基礎(chǔ)上,應(yīng)用特大型質(zhì)粒純化試劑盒抽提出高純度、高濃度的質(zhì)粒。②經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)證明,免疫后血清IgG型特異性抗體和唾液SIgA型特異性抗體均明顯升高,并持續(xù)數(shù)周。且鼻腔滴注組和頜下腺區(qū)皮下注射組比肌肉注射誘導(dǎo)唾液IgA型特異性抗體要多。 結(jié)論：①基因疫苗pVAX1-SA、pVAX1-GC和pVAX1-SG可以誘導(dǎo)新西蘭大白兔產(chǎn)生特異性IgG和SIgA抗體,表明三種防齲基因疫苗均有較好的免疫原性；②pVAX1-SG鼻腔滴注和頜下腺皮下注射免疫誘導(dǎo)的唾液SIgA型抗PAc和抗GTF抗體水平高于股四頭肌注射免疫。提示鼻腔黏膜滴注和頜下腺區(qū)域皮下注射免疫可能是pVAX1-SG的有效免疫途徑。
【圖文】：

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