發(fā)布時(shí)間：2017-03-20 22:11

  本文關(guān)鍵詞：CaMKⅡδ在兔心衰模型中對(duì)晚鈉通道的影響及其與AnkyrinG在心室肌細(xì)胞中的關(guān)聯(lián)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用兔耳緣靜脈注射異丙腎上腺素(Isoprenaline,ISO)建立兔心力衰竭(heart failure,HF)模型;探討HF時(shí),兔心室肌細(xì)胞的晚鈉電流(Late Sodium Current,INaL)的變化及KN-93(CaMKII抑制劑)對(duì)INaL的影響;同時(shí)檢測(cè)心室肌組織內(nèi)CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5、AnkyrinG的表達(dá)及CaMKIIδ和AnkyrinG定位情況;闡明HF時(shí)CaMKIIδ可能通過AnkyrinG調(diào)控晚鈉通道,誘導(dǎo)心律失常的產(chǎn)生。方法:實(shí)驗(yàn)用日本大耳白兔,雌雄不拘,隨機(jī)分為HF組和對(duì)照組(每組12只)。HF組兔經(jīng)耳緣靜脈注射ISO(300μg·kg-1·d-1),連續(xù)注射15天;對(duì)照組兔經(jīng)耳緣靜脈注射等體積0.9%生理鹽水(1ml·kg-1·d-1),連續(xù)注射15天;注射完成后,均自由進(jìn)食給水。(1)建立模型1月后進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查、ELISA法檢測(cè)兔血漿BNP含量、HE染色觀察心肌病理改變等來評(píng)價(jià)HF模型是否建立成功;(2)分離對(duì)照組和HF組兔心室肌細(xì)胞,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄INaL;(3)通過Western blotting檢測(cè)CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinG的表達(dá);(4)qRT-PCR檢測(cè)CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinGmRNA表達(dá);(5)石蠟切片免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記CaMKIIδ和AnkyrinG,觀察其定位情況。結(jié)果:1)造模一般結(jié)果:HF組兔在注射ISO造模過程中死亡3只、對(duì)照組兔無死亡,建立模型成功率為75.0%;與對(duì)照組相比,HF組兔的心率增加較明顯(P0.01)。2)心臟超聲結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比較,HF組心室腔增大、心功能降低;HF組LVEF(46.52±7.18%)較對(duì)照組(65.52±4.09%)明顯下降且小于50%(P0.01);HF組LVFS(21.14±3.70%)較對(duì)照組(32.58±2.84%)明顯下降(P0.01)。3)兔血漿BNP含量結(jié)果:HF組血漿BNP含量(391.40±38.59pg/ml)較對(duì)照組(234.49±31.68pg/ml)明顯增加(P0.01)。4)HE染色顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn):對(duì)照組心室肌細(xì)胞呈長梭形、排列整齊,細(xì)胞之間的界限清楚,可見心肌橫紋;HF組心室肌細(xì)胞排列紊亂、無規(guī)則,可見心室肌細(xì)胞呈空泡樣變性及心室肌細(xì)胞間質(zhì)水腫、纖維組織增多。5)全細(xì)胞膜片鉗發(fā)現(xiàn):HF組的INaL(-1.64±0.30pA/pF)與對(duì)照組(-0.70±0.17pA/pF)相比明顯增加(P0.01);分別加入30nM ATXII(INa L激動(dòng)劑)后,HF組中ATXII組與空白對(duì)照相比INaL明顯增加、對(duì)照組中ATXII組INa L也明顯增高,并且HF組比對(duì)照組增加更明顯(P0.01);在ATXII誘導(dǎo)電流增加穩(wěn)定后,分別加入1μM KN-93(CaMKII抑制劑)后,對(duì)照組中經(jīng)ATXII誘導(dǎo)增加的INaL由(-1.39±0.29pA/pF)減少至(-0.99±0.28pA/pF),且P0.05、HF組中經(jīng)ATXII誘導(dǎo)增加的INaL由(-2.27±0.22pA/pF)減少至(-1.87±0.25pA/pF),且P0.01。6)Western blotting結(jié)果示:HF組的心室肌組織CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinG蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比均明顯增加(P0.01)。7)q RT-PCR結(jié)果顯示:HF組中CaMKIIδ、Nav1.5和AnkyrinG mRNA表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P0.01)。8)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果示:對(duì)照組和HF組均有綠色及紅色熒光,且HF組的綠色及紅色熒光與對(duì)照組相比熒光更強(qiáng);對(duì)照組和HF組的綠色及紅色熒光均分布在細(xì)胞內(nèi),兩者在細(xì)胞膜上的同一部位表達(dá)更明顯,這表明CaMKIIδ和AnkyrinG共同表達(dá)在細(xì)胞膜上。結(jié)論:1、異丙腎上腺素誘導(dǎo)的兔HF中,不僅Nav1.5表達(dá)上調(diào),而且INaL也會(huì)增大。2、HF時(shí),CaMKIIδ表達(dá)及活性增加,且使用CaMKII的抑制劑KN-93能減少INaL,說明HF時(shí)增加的CaMKIIδ能調(diào)控INaL。3、HF時(shí),AnkyrinG表達(dá)上調(diào),且AnkyrinG與CaMKIIδ共同表達(dá)于心室肌細(xì)胞膜上同一部位推測(cè)AnkyrinG可能調(diào)控CaMKIIδ對(duì)INaL的影響,這可能是HF時(shí)CaMKIIδ促發(fā)心律失常的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：心力衰竭 晚鈉電流 CaMKIIδ 磷酸化CaMKIIδ AnkyrinG Nav1.5 心律失常
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.6;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑14-16
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.1.4 溶液配制17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-27
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及動(dòng)物模型的建立18
• 2.2.2 兔心臟超聲心動(dòng)圖檢查18-19
• 2.2.3 ELISA試劑盒檢測(cè)兔血漿BNP含量19-20
• 2.2.4 兔心室肌組織的病理改變20-21
• 2.2.5 兔心室肌細(xì)胞的分離21-22
• 2.2.6 全細(xì)胞膜片鉗記錄INaL22
• 2.2.7 Western blotting實(shí)驗(yàn)步驟22-24
• 2.2.8 熒光定量PCR(qRT-PCR)實(shí)驗(yàn)步驟24-26
• 2.2.9 石蠟切片免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟26-27
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-37
• 3.1 兔心力衰竭模型建立的結(jié)果28-31
• 3.1.1 造模一般結(jié)果28-29
• 3.1.2 兩組兔心臟結(jié)構(gòu)及心功能比較29-30
• 3.1.3 兩組兔血漿 BNP 含量比較30
• 3.1.4 兩組兔心肌組織 HE 染色的病理變化30-31
• 3.2 兩組兔心室肌細(xì)胞的I_(NaL)及CaMKII抑制劑KN-93對(duì)I_(NaL)的影響31-33
• 3.3 兩組兔心室肌組織CaMKIIδ 和磷酸化CaMKII蛋白表達(dá)比較33
• 3.4 兩組兔心室肌組織Nav1.5 和AnkyrinG蛋白表達(dá)比較33-35
• 3.5 兩組兔CaMKIIδ、Nav1.5 和AnkyrinGmRN A的表達(dá)35-36
• 3.6 兩組兔CaMKIIδ 和AnkyrinG蛋白免疫熒光雙標(biāo)36-37
• 第4章 討論37-42
• 4.1 ISO誘導(dǎo)兔心力衰竭模型的建立37-38
• 4.2 心室肌細(xì)胞的I_(NaL)及KN-93對(duì)I_(NaL)的抑制作用38-39
• 4.3 心室肌組織CaMKIIδ 和磷酸化CaMKIIδ 蛋白及其mRNA的表達(dá)39-40
• 4.4 心室肌組織Nav1.5 和AnkyrinG蛋白及其mRNA的表達(dá)40-41
• 4.5 CaMKIIδ 和AnkyrinG蛋白在心室肌細(xì)胞上的定位41-42
• 第5章 結(jié)論42-43
• 第6章 研究不足及展望43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述 心肌細(xì)胞晚鈉電流的研究進(jìn)展49-54
• 參考文獻(xiàn)53-54

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：258552