發(fā)布時(shí)間：2020-03-01 05:31

【摘要】：目的原核表達(dá)狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并評(píng)價(jià)其基本功能。方法采用RT-PCR法擴(kuò)增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表達(dá)載體p GEX-5X-1,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p GEX-5X-1-CTN,轉(zhuǎn)化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)的重組蛋白經(jīng)親和層析純化后,采用間接ELISA法檢測(cè)其與陽(yáng)性血清的結(jié)合性能及親和力。結(jié)果重組表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)雙酶切及測(cè)序證實(shí)構(gòu)建正確;純化的重組蛋白R(shí)V-G相對(duì)分子質(zhì)量約85 000,純度可達(dá)85%,能與陽(yáng)性血清特異性結(jié)合,且具有較好的區(qū)分性,與陽(yáng)性血清的親和力常數(shù)為1.2×1010 M-1。結(jié)論成功原核表達(dá)、純化獲得了純度較高、特異性較好、親和力較強(qiáng)、靈敏度較高的RV CTN-1株G蛋白,為研究G蛋白的抗原表位、建立針對(duì)RV G蛋白的ELISA抗體檢測(cè)方法及其中和抗體的分選檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。

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