【摘要】：背景：研究表明,綠原酸是中藥杜仲中的主要活性成分之一,杜仲具有補(bǔ)中、益精氣、堅(jiān)筋骨、強(qiáng)志的作用。 目的：研究綠原酸對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的影響。設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn)：隨機(jī)對(duì)照動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn),于2010年3月至2010年9月在南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院分子中心實(shí)驗(yàn)室完成。 材料：選用清潔級(jí)2周齡SD大鼠12只,綠原酸由江西中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室提供。 方法：在無(wú)菌條件下取2周齡SD大鼠的股骨、脛骨骨髓,采取密度梯度離心法與貼壁細(xì)胞分離法相結(jié)合分離培養(yǎng)大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,加入含10%胎牛血清的LG-DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng),取第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。取lmg綠原酸,溶解于細(xì)胞凍存液DMSO中,依次稀釋成含綠原酸10-8、10-9、10-10,10-11g/L的試劑,加入實(shí)驗(yàn)組的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中。對(duì)照組為空白試劑組和傳統(tǒng)成骨誘導(dǎo)劑組,每日于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化,于培養(yǎng)第24,48,72小時(shí)用四唑鹽法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況,于培養(yǎng)第3周用Von Kossa法檢測(cè)鈣結(jié)節(jié),免疫組化檢測(cè)Ⅱ型膠原的表達(dá)。 結(jié)果：12只大鼠均進(jìn)入結(jié)果分析。MTT法證實(shí)了實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在傳代后24小時(shí)細(xì)胞增殖緩慢,兩組差異無(wú)顯著性(p0.05),48小時(shí)兩組出現(xiàn)差異(p0.05),72小時(shí)進(jìn)入細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,兩組差異顯著(p0.01)。鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞大量誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,與傳統(tǒng)成骨誘導(dǎo)劑相比無(wú)顯著差異,Von Kossa法鑒定鈣結(jié)節(jié)表明傳統(tǒng)成骨誘導(dǎo)劑組的鈣結(jié)節(jié)大,形狀規(guī)則,著色深,而實(shí)驗(yàn)組鈣結(jié)節(jié)形狀不規(guī)則,著色淺,隨著濃度的下降其鈣結(jié)節(jié)也不明顯,與傳統(tǒng)成骨誘導(dǎo)劑相比無(wú)顯著差異。免疫組化染色結(jié)果表明不論是傳統(tǒng)成骨誘導(dǎo)劑組還是綠原酸組,都不表達(dá)Ⅱ型膠原。 結(jié)論：綠原酸可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及向成骨細(xì)胞分化,但其效果與其濃度呈一定的正相關(guān),可能不具有向成軟骨細(xì)胞分化的效果。
【圖文】：

讓大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自然貼壁，第二天觀察時(shí)可見(jiàn)部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁;貼壁細(xì)胞多呈三角形、多角形或短梭形;3天后換液去除未貼壁細(xì)胞，貼壁細(xì)胞體積增大，呈集落生長(zhǎng)(見(jiàn)圖1);當(dāng)貼壁細(xì)胞達(dá)到80%融合時(shí)可以傳代，傳代后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈有序的旋渦狀排列，，形態(tài)類似成纖維細(xì)胞，但也可見(jiàn)較多的單核細(xì)胞。(見(jiàn)圖2)，消化傳代后第二天見(jiàn)細(xì)胞貼壁散在生長(zhǎng)，3天換液，6天可見(jiàn)細(xì)胞大部融合，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣(見(jiàn)圖3)，連續(xù)傳代，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變(見(jiàn)圖4)。、.O.忿聲。價(jià)..戶、嘗護(hù).?釗戶、氣沖""?9產(chǎn)丫。婦.、丸自，補(bǔ)、心、吃.‘.心奮咤刁尸、沙

本文編號(hào)：2583228