發(fā)布時(shí)間：2020-02-26 17:20

【摘要】：目的 比較小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)體系二維法及三維法，通過(guò)觀察比較二維液滴法和三維海藻酸鈉明膠法體外卵泡的存活及生長(zhǎng)情況、產(chǎn)生激素能力及卵母細(xì)胞成熟情況，來(lái)選擇優(yōu)化的小鼠腔前卵泡體外生長(zhǎng)培養(yǎng)體系。 方法 經(jīng)機(jī)械法分離得到出生12-14天C57BL/6J小鼠的單個(gè)卵泡，選擇直徑在80-130μm的結(jié)構(gòu)完整的腔前卵泡，分別使用二維96孔板液滴法和三維96孔板海藻酸鈉明膠法體系進(jìn)行體外培養(yǎng)，在添加了10%血清、5.5mg/mlPNa、ITS、5ng/mlEGF及100mIUr-FSH的a-MEM培養(yǎng)基中共培養(yǎng)7天。隔天1/2換液，并使用倒置顯微鏡及Image J軟件拍照并測(cè)量卵泡直徑，使用免疫熒光分析法檢測(cè)換液培養(yǎng)基的激素濃度。 結(jié)果 二維液滴法和三維海藻酸鈉明膠法兩體系中，，卵泡的生存率及閉鎖率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；二維液滴法中卵泡直徑增長(zhǎng)速度快于三維海藻酸鈉明膠法體系，且差異從第3天開(kāi)始出現(xiàn)（1.12±0.154:1.11±0.148），并逐漸增大至第7天的最大值；兩體系中產(chǎn)生雌二醇濃度差異不明顯；培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，二維液滴法中卵泡的卵母細(xì)胞恢復(fù)減數(shù)分裂至MI期（61%：4%）、MII期（17%：8%）的比例大于三維法培養(yǎng)的卵泡。 結(jié)論 小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)體系中二維液滴法中卵泡的生長(zhǎng)速度及卵母細(xì)胞恢復(fù)減數(shù)分裂成熟狀況均優(yōu)于三維海藻酸鈉明膠法。因此，二維液滴法小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)體系更加有利于卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育及卵母細(xì)胞的成熟。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R321.1

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本文編號(hào)：2583052