【摘要】：第一章高血流性肺動脈高壓大鼠模型的建立 研究目的 分別利用右肺切除術(shù)和腹主動脈-下腔靜脈分流手術(shù)構(gòu)建大鼠高血流性肺動脈高壓模型,觀察比較兩種模型在血流動力學(xué)和肺血管形態(tài)學(xué)方面的動態(tài)變化和差異,為進(jìn)一步研究選擇合適的動物模型。 材料與方法 160只Spargue-Dawley大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組(Control, n=40)、右肺切除組(PE,n=60)和腹主動脈-下腔靜脈分流組(A-V,n=60),每組進(jìn)一步分成1周、2周、4周和6周四個亞組。正常對照組每個亞組10只,PE組和A-V組每個亞組15只。各組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)至觀察終點(diǎn),測定肺動脈平均壓(mPAP),分離、稱重并計(jì)算右心室壁與左心室壁加室間隔重量比[RV/(LV+SP)];取部分肺組織作HE染色、Masson染色和a-SMA免疫組織化學(xué)檢測,觀察中小肺動脈組織病理形態(tài)學(xué)改變,測量并計(jì)算肺血管壁厚度占管壁外徑百分比(WT%)和肺血管肌化程度(MA%)。 結(jié)果 1.建模過程中,PE組大鼠死亡例數(shù)明顯高于A-V組,術(shù)中、術(shù)后出血和右心衰竭是PE組大鼠死亡的重要原因。 2.A-V組和PE組mPAP波動趨勢一致：術(shù)后1W迅速增高,術(shù)后2W降到最低值,術(shù)后4W開始逐漸回升。與對照組比較,PE組術(shù)后各個時間點(diǎn)(1W、2W、4W和6W) mPAP均顯著性升高(P0.01),A-V組1W、4W和6W組顯著性升高(P0.01)。與A-V組比較,PE組術(shù)后各個時間點(diǎn)均明顯增高(P0.05)。 3.PE組和A-V組的RVHI均隨術(shù)后時間延長進(jìn)行性增高。與對照組比較,A-V組和PE組術(shù)后各個時間點(diǎn)的RVHI顯著性升高(P0.05)。與A-V組比較,PE4W組、2W組和1W組RVHI明顯升高(P0.05)。 4.兩個手術(shù)組WT%隨術(shù)后時間延長均呈現(xiàn)上升趨勢。從手術(shù)后2W開始,A-V組和PE組WT%均較正常對照組明顯增高(P0.01或P0.05),術(shù)后各個時間點(diǎn),PE組WT%均較A-V組顯著上升(P0.01或P0.05)。 5.A-V組和PE組MA%均隨術(shù)后時間延長進(jìn)行性增高。A-V組和PE組MA%從手術(shù)后2W開始較對照組顯著增高(P0.01或P0.05)；術(shù)后4W開始,PE組MA%較A-V組明顯上升(P0.01)。 結(jié)論 1.大鼠右肺切除肺動脈高壓模型和腹主動脈-下腔靜脈分流肺動脈高壓模型模擬了先天性心臟病相關(guān)性肺動脈高壓的病理生理特點(diǎn),出現(xiàn)了肺動脈高壓和右心肥厚的臨床表現(xiàn),發(fā)生了以中膜增厚和肌性肺小動脈增多為特征的組織病理學(xué)改變。兩者都能作為研究先天性心臟病相關(guān)性肺動脈高壓的有效、可靠的動物模型。 2.與腹主動脈-下腔靜脈分流肺動脈高壓模型比較,大鼠右肺切除肺高壓模型具有血流動力學(xué)改變顯著,肺血管重構(gòu)程度嚴(yán)重,造模周期短的優(yōu)點(diǎn)。 第二章高血流性肺動脈高壓大鼠肺間質(zhì)的病變 研究目的 觀察右肺切除術(shù)構(gòu)建的大鼠高血流性肺動脈高壓模型的肺間質(zhì)病變情況。 材料與方法 40只Spargue-Dawley大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(sham).右肺切除2周組(PE-2W)、右肺切除4周組(PE-4W)和右肺切除6周組(PE-6W),每組10只。采用右肺切除術(shù)建立大鼠肺動脈高壓模型。各組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)至觀察終點(diǎn)。留取肺組織進(jìn)行HE染色和Masson染色,光鏡下觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)改變,透射電鏡觀察細(xì)胞微結(jié)構(gòu)。測定肺組織羥脯氨酸含量以了解肺臟膠原代謝水平。PCNA免疫組織化學(xué)染色檢測成纖維細(xì)胞增殖情況。采用免疫組織化學(xué)染色和Western blot方法檢測I型膠原(Col-I)和III型膠原(Col-Ⅲ)的蛋白表達(dá),實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測Col-Ⅰ mRNA和Col-Ⅲ mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1.光鏡下觀察假手術(shù)組肺組織結(jié)構(gòu)清晰,無水腫、炎癥,肺泡間隔未見增厚,有少量纖細(xì)的膠原分布。3個手術(shù)組均出現(xiàn)炎癥反應(yīng),術(shù)后早期炎癥反應(yīng)明顯,以中性粒細(xì)胞為主,后期炎癥減輕,以淋巴濾泡多見。隨著手術(shù)后時間的延長,肺泡間隔逐漸增厚,成纖維細(xì)胞大量增生,膠原纖維由血管周圍向肺間質(zhì)彌散、增多,部分肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞。 2.羥脯氨酸含量隨手術(shù)后時間延長逐漸升高,術(shù)后4W組和6W組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P0.01)。羥脯氨酸含量與mPAP、 WT%和MA%呈正相關(guān)。 3.Col-Ⅰ和Col-Ⅲ在對照組肺間質(zhì)內(nèi)有少量表達(dá),手術(shù)后4W開始肺間質(zhì)內(nèi)表達(dá)明顯增多,交織成網(wǎng),血管周圍旁更為多見。Western blot結(jié)果顯示,Col-Ⅰ蛋白術(shù)后4W和6W較假手術(shù)組和術(shù)后2W組顯著上升(P0.01),6W組較4W組顯著性回落。Col-Ⅲ蛋白在術(shù)后4W和6W較假手術(shù)組和術(shù)后2W組顯著上升(P0.01)。 4.Col-Ⅰ mRNA表達(dá)從術(shù)后2W開始明顯升高,術(shù)后6W稍有回落,假手術(shù)組、2W、4W和6W組之間兩兩比較差異有顯著性(P0.01或者P0.05)。Col-Ⅲ mRNA表達(dá)隨著手術(shù)后時間延長進(jìn)行性升高,假手術(shù)組、2W、4W和6W組之間兩兩比較差異具有顯著性(P0.01或者P0.05)。 5.羥脯氨酸含量與WT%和MA%呈正相關(guān)(P0.05)。COL-Ⅲ蛋白和mRNA表達(dá)量與WT%和MA%呈正相關(guān)(P0.05)。 結(jié)論 1.右肺切除手術(shù)構(gòu)建的高血流性肺動脈高壓大鼠模型出現(xiàn)了肺間質(zhì)病變,組織病理學(xué)特點(diǎn)類似于人類混合型非特異性間質(zhì)性肺炎。 2.隨著肺動脈壓力的升高和血管重構(gòu)的進(jìn)展,肺組織膠原蛋白的表達(dá)逐漸上調(diào),肺間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)沉積。 第三章TGF-β1和CTGF在高血流性肺動脈高壓大鼠肺間質(zhì)的表達(dá)和意義 研究目的 觀察TGF-β1和CTGF在高血流性肺動脈高壓大鼠肺組織中的動態(tài)表達(dá),探討TGF-β1和CTGF在高血流性肺動脈高壓致肺間質(zhì)病變中的作用。 材料與方法 40只Spargue-Dawley大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(sham)、右肺切除2周組(PE-2W)、右肺切除4周組(PE-4W)和右肺切除6周組(PE-6W),每組10只。采用右肺切除術(shù)建立大鼠肺動脈高壓模型。常規(guī)飼養(yǎng)至觀察終點(diǎn)。采用免疫組織化學(xué)染色檢測TGF-β1和CTGF在肺組織的表達(dá),Western blot方法檢測肺組織中TGF-β1和CTGF蛋白含量,實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測TGF-β1mRNA和CTGF mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1.術(shù)后2W組和4W組的TGF-β1蛋白顯著性升高,術(shù)后6W回落；假手術(shù)組、術(shù)后2W、4W和6W組之間兩兩比較,都有顯著性差異(P0.01或P0.05)。TGF-β1mRNA在術(shù)后2W組達(dá)到高峰,術(shù)后4W組和6W組逐漸下降；假手術(shù)組、術(shù)后2W組、4W組和6W組之間兩兩比較,差異都有顯著性(P0.01或P0.05) 2.術(shù)后4W組和6W組的CTGF蛋白較假手術(shù)組和術(shù)后2W組明顯升高(P0.01)。假手術(shù)組和術(shù)后2W組之間,術(shù)后4W組和6W組之間差異無顯著性。術(shù)后各組CTGF mRNA逐漸升高,與假手術(shù)組比較均明顯上升(P0.01),術(shù)后4W組和6W組與2W組比較差異有顯著性(P0.01),術(shù)后4W和6W組之間差異無顯著性。 3.TGF-β1蛋白表達(dá)量與Col-I蛋白和mRNA表達(dá)量呈正相關(guān)(P 0.05), CTGF蛋白和nRNA表達(dá)量與Col-Ⅲ蛋白和mRNA表達(dá)量呈正相關(guān)(P0.05),TGF-β1mRNA與CTGF蛋白和mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。 結(jié)論 1.高血流性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展過程中,TGF-β1和CTGF的表達(dá)上調(diào),表達(dá)增多的部位不僅有肺血管壁,還有輕度纖維化的肺間質(zhì)。 2.作為重要的促纖維化因子,TGF-β1和CTGF可能參與了高血流性肺動脈高壓大鼠肺間質(zhì)纖維化的過程。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R-332

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 趙文;鈣敏感受體在高肺血流性肺動脈高壓大鼠的表達(dá)及其在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號：2582286